【正文】 ................................................................................. 判定結(jié)果和解釋 .......................................................................................................... 質(zhì)量控制 ..........................................................................................................................附表 抗體篩查檢測報告 .......................................................................................................附表 抗體確證檢測報告 .......................................................................................................附表 核酸檢測報告 ...............................................................................................................附表 抗體確證檢測報告（特定條件） ...............................................................................附表 淋巴細(xì)胞檢測報告 .......................................................................................................附表 耐藥基因型檢測報告 ...................................................................................................附表 嬰兒艾滋病病毒感染早期診斷檢測報告 ...................................................................第一章 樣品的采集和處理 范圍本章規(guī)定了用于人免疫缺陷病毒（）檢測的全血、血清、血漿、細(xì)胞、口腔黏膜滲出液、尿液以及濾紙干血斑（）樣品的采集和處理方法，適用于抗體、抗原、核酸、基因亞型、耐藥檢測、和淋巴細(xì)胞數(shù)測定及分離培養(yǎng)?！栋滩〔《靖腥菊呒鞍滩』颊吡馨图?xì)胞檢測質(zhì)量及保證指南》 （中國疾病預(yù)防控制中心，年版） 。《基因型耐藥檢測及質(zhì)量保證指南》 ， （中國疾病預(yù)防控制中心，年版） 。 樣品種類及相應(yīng)的用途 全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品可用于抗體檢測。 抗凝全血可用于和淋巴細(xì)胞測定。 淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞（）及全血可用于核酸定性與定量、基因型檢測和分離培養(yǎng)。檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時間及唯一編碼。口腔黏膜滲出液樣本應(yīng)使用試劑盒提供的專用采樣工具，尿液樣本建議使用可保持尿液穩(wěn)定的專用采尿管。 采血前，先對試管或濾紙進行標(biāo)記，核對后編碼。干血斑濾紙應(yīng)使用具有資質(zhì)的產(chǎn)品。 尿液樣本準(zhǔn)備好帶有唯一編碼的采尿管，并保留唯一編碼。 樣品的采集和處理 血液 抗凝全血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻～次，備用。歲以下兒童采用足跟部） 。收集滴出的血液，備用。 血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取～靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至無抗凝劑的試管中，室溫下自然放置～小時，待血液凝固、血塊收縮后再用～離心分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。 ：使用淋巴細(xì)胞分離液，進行密度梯度離心，吸出層，置于合適的容器中，備用。 樣品采集后處理、保存、運輸?shù)臅r限和條件，因不同的檢測項目而異，應(yīng)參見不同檢測項目要求。 濾紙干血斑 根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，用于檢測。 用移液器從樣品管中吸取 μ 抗凝全血（或血漿） ，對準(zhǔn)濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。 于室溫下自然干燥至少小時（潮濕氣候下至少干燥小時） ，不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸。 尿液和口腔黏膜滲出液 尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定。 口腔黏膜滲出液：使用試劑盒提供的容器收集樣品。口腔黏膜滲出液應(yīng)采集口腔滲出液,不是唾液。 用于核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品天內(nèi)進行檢測的可存放于 4℃，個月以內(nèi)應(yīng)存放于20℃以下。 口腔黏膜滲出液樣品應(yīng)即刻使用，需要保存應(yīng)以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。長期保存（一年以上）的樣本凍存條件、是否添加防腐劑等以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。如果用設(shè)門，樣品保存不超過小時。特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。 樣品的運送 全血、血漿的運送應(yīng)符合生物安全要求，參照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》(衛(wèi)生部第號令,2022年2月1日執(zhí)行)。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時間。 第二層容器：容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。 第三層容器：容納并保護第二層容器的運輸用外層包裝箱。 用于抗體檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運送用于和淋巴細(xì)胞測定的樣品應(yīng)在室溫下（～25℃）運送。和尿液樣品應(yīng)在室溫下（～25℃）運送，可通過郵寄方式運送。 樣品的接收 樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實驗室內(nèi)、由經(jīng)過培訓(xùn)的工作人員打開，打開包裹時應(yīng)穿戴防護衣、戴口罩和防護眼鏡，在生物安全柜中打開，用后的包裹應(yīng)及時進行消毒。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告實驗室負(fù)責(zé)人和上一級實驗室技術(shù)人員。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過重或者不符合接收要求，應(yīng)將樣品安全廢棄。 接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。適用于各級各類醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、檢驗檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機構(gòu)。 規(guī)范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》 （中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，有效版本） 。實驗室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。.2 以診斷為目的的檢測是為了確定個體感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進行的體檢等。.4 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群。.2 嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（） 。.4 篩查試驗有反應(yīng)，須作補充試驗。補充試驗包括抗體確證試驗（免疫印跡試驗，條帶線性免疫試驗，特定條件 *下的替代檢測，免疫層析或免疫滲濾試驗）和核酸試驗（核酸定性和核酸定量試驗） 。 * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于） 、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群）、三種試劑均經(jīng)過使用地區(qū)中心實驗室評價。.6 對篩查及補充試驗對象均應(yīng)做好咨詢工作。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的方法及試劑。方法 篩查方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗（）這類試驗可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑） 、尿液樣品，多為抗體檢測試劑?？乖贵w包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的抗原抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測定結(jié)果。 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗（）這類試驗采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體。有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。一般可在～分鐘內(nèi)得出結(jié)果。將抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。試劑有兩種:同時檢測和抗體以及分別檢測和抗體。免疫滲濾試驗：斑點和斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：均以硝酸纖維膜為載體，抗原點狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應(yīng)。反應(yīng)時間在分鐘以內(nèi)。免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體，抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。反應(yīng)時間在分鐘以內(nèi)。采用間接法檢測樣品中的抗特異性抗體。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離過的抗原。加入抗人酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況, 按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。試劑盒的膜條上包被有不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人（堿性磷酸酶標(biāo)記）與特異性抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶, 按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 結(jié)果報告 篩查報告抗體篩查試驗報告使用附表（抗體篩查檢測報告） ?？贵w篩查報告需由一名檢驗人員和一名審核者簽字。（）符合抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“抗體陽性” ，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。（）符合抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“抗體陰性” 。（）符合抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“抗體不確定” ，在備注中應(yīng)注明“周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測。 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗報告。 質(zhì)量控制 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制 試劑盒內(nèi)部對照15 / 74試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照。每一次檢測臨床樣品時，必須有試劑盒內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。 室內(nèi)質(zhì)控品為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽性。因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時，必須重新試驗。 質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌、且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。一般采用在不同批次檢測取得至少個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做個批次的檢測，每個批次中不少于個質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個臨時性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達到批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。為了統(tǒng)計學(xué)上有顯著x性意義，應(yīng)該采用至少次（天）測得的外部對照質(zhì)控品的值計算平均值。一組值的標(biāo)準(zhǔn)差以表示。（）控制限：由實驗室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。 質(zhì)控規(guī)則 實驗室在報告結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。（）告 警 （ ） ： 當(dāng) 外 部 質(zhì) 控 品 的 值 超 出 范 圍 時 ， 系 統(tǒng) 處 于 告 警 狀 態(tài) ， 應(yīng) 予 注 意 ，x是 否 可 以 繼 續(xù) 檢 測 需 要 進 一 步 觀 察 。（）失控（）：當(dāng)外部質(zhì)控品的值超出 范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗x結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)定性下降所致。 當(dāng)出現(xiàn)失控時， 必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。具體計算方法如下： 將質(zhì)控品的測定值從小到大排列：， ，……（為最小值，為最大值） 。x 計算 上限值 和 下限值 。表 值表（）當(dāng) 上限 和 下限 時表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。（）當(dāng) 上 限 和 下 限 有 一 值 處 于 ～ 值 之 間 時 說 明 該 值 在 ～ 范 圍 ， 處 于 “告 警 ”狀 態(tài) ?！凹纯谭ā敝荒茉谇按蝺?nèi)使用，超出即可采用質(zhì)控圖方法。清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。 室內(nèi)質(zhì)控品對照 外部質(zhì)控品可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽性樣品。除此之外，建議每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測量大于份樣品，至少應(yīng)作次質(zhì)控。 開展抗體相關(guān)檢測的實驗室須參加有資質(zhì)機構(gòu)組織的能力驗證，或室間比對。適用于開展新發(fā)感染檢測的各類實驗室。目的了解重點人群新發(fā)感染情況，為估計艾滋病流行形勢和判斷疫情變化提供科學(xué)依據(jù)。– 方法的原理是，人體在感染后產(chǎn)生的特異性抗體對相應(yīng)抗原的識別和結(jié)合能力隨著感染時間的延長而增加，即親和力逐漸增加。兩種方法均只適用于抗體陽性樣品。目前對兩種方法的評價結(jié)果顯示，– 方法的假陽性率較方法低，受疾病狀態(tài)，如細(xì)胞計數(shù)，抗病毒治療等因素的影響較方法小，可以更加準(zhǔn)確地區(qū)分新近感染和長期感染者。此外，也有快速新發(fā)感染檢測方法的研究報道，因其具有快速、簡便、價格低廉等優(yōu)點，未來對其需求將會越來越多。 實驗室檢測：首選推薦– ，也可使用。 樣品的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 入選標(biāo)準(zhǔn)（）新發(fā)感染檢測必須應(yīng)用診斷為抗體陽性的血清或血漿或樣品，禁止將抗體陰性樣品納入新發(fā)感染檢測。樣品要求清亮、無嚴(yán)重溶血、沒有交叉污染，必須保存在℃以下，反復(fù)凍融次數(shù)不多于三次。()所有艾滋病病人的樣品。 方法()如果同一人在六個月以內(nèi)出現(xiàn)兩份或兩份以上確認(rèn)陽性樣品，將第一份樣品納入新發(fā)感染檢測。()所有接受抗病毒治療的感染者樣品。 相關(guān)要求21 / 74() 對于哨點樣品，進行新發(fā)感染檢測的樣品量必須占應(yīng)檢測陽性樣品的以上，否則不納入新發(fā)感染檢測。病例報告樣品應(yīng)當(dāng)填寫病例報告系統(tǒng)卡片號。否則，任何一個對照和校準(zhǔn)品的中值值不在試劑