【正文】 年版） 抗體檢測實(shí)驗(yàn)室要求應(yīng)符合國家對實(shí)驗(yàn)室生物安全的有關(guān)要求。實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。 抗體檢測的目的和要點(diǎn) 抗體檢測的目的 抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。.2 以診斷為目的的檢測是為了確定個體感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。.3 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。.4 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群。 抗體檢測的要點(diǎn) 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。.2 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（） 。 結(jié)果判定以試劑盒說明書為標(biāo)準(zhǔn)。.4 篩查試驗(yàn)有反應(yīng)，須作補(bǔ)充試驗(yàn)。補(bǔ)充試驗(yàn)是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。補(bǔ)充試驗(yàn)包括抗體確證試驗(yàn)（免疫印跡試驗(yàn)，條帶線性免疫試驗(yàn)，特定條件 *下的替代檢測，免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)）和核酸試驗(yàn)（核酸定性和核酸定量試驗(yàn)） 。替代檢測包括三種酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)。 * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于） 、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群）、三種試劑均經(jīng)過使用地區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室評價(jià)。.5 篩查試驗(yàn)無反應(yīng)，不應(yīng)做補(bǔ)充試驗(yàn)。.6 對篩查及補(bǔ)充試驗(yàn)對象均應(yīng)做好咨詢工作。 常規(guī)抗體檢測方法 試劑和樣品必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的方法及試劑。樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。方法 篩查方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（）這類試驗(yàn)可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑） 、尿液樣品，多為抗體檢測試劑?？乖贵w聯(lián)合檢測試劑可同時(shí)檢測血液中抗原和抗體。抗原抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的抗原抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（）這類試驗(yàn)采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體?？乖贵w包被于固相載體，加入待檢樣品和13 / 74酶或熒光標(biāo)記的抗原抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 快速檢測（）及其它試驗(yàn)這類試驗(yàn)可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急診檢測、及檢測點(diǎn)等。一般可在～分鐘內(nèi)得出結(jié)果。明膠顆粒凝集試驗(yàn)（）：是抗體檢測的一種簡便方法。將抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。當(dāng)待檢樣品含有抗體時(shí)，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。試劑有兩種:同時(shí)檢測和抗體以及分別檢測和抗體。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照質(zhì)控，需符合試劑盒的規(guī)定。免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：均以硝酸纖維膜為載體，抗原點(diǎn)狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應(yīng)。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)或條帶。反應(yīng)時(shí)間在分鐘以內(nèi)。有效試驗(yàn)的質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。反應(yīng)時(shí)間在分鐘以內(nèi)。 抗體確證試驗(yàn) 免疫印跡試驗(yàn)（）可使用血清、血漿和濾紙干血斑。采用間接法檢測樣品中的抗特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的蛋白分離開來，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或膜） 。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離過的抗原。待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應(yīng)，血清中若含有抗體，就會與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況, 按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 條帶線性免疫試驗(yàn)（）采用間接法檢測樣品中的抗特異性抗體。試劑盒的膜條上包被有不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人（堿性磷酸酶標(biāo)記）與特異性抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶, 按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 其他方法： 可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)，免疫層析和免疫滲濾試驗(yàn)。 結(jié)果報(bào)告 篩查報(bào)告抗體篩查試驗(yàn)報(bào)告使用附表（抗體篩查檢測報(bào)告） 。篩查試驗(yàn)無反應(yīng)報(bào)告為“抗體陰性” ；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測均無反應(yīng)報(bào)告為“抗體陰性” ，復(fù)檢檢測均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)” ；報(bào)告為“感染待確定” ，不能出具陽性報(bào)告?？贵w篩查報(bào)告需由一名檢驗(yàn)人員和一名審核者簽字。 確證報(bào)告 及 報(bào)告抗體及 試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告使用附表（抗體確證檢測報(bào)告） 。（）符合抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“抗體陽性” ，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報(bào)告。符合抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“抗體陽性” ，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報(bào)告。（）符合抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“抗體陰性” 。如疑似“窗口期”感染，建議進(jìn)一步做核酸檢測或周后隨訪，盡早明確診斷。（）符合抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“抗體不確定” ，在備注中應(yīng)注明“周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測。 （） 抗體確證檢測報(bào)告應(yīng)在收到樣品后的個工作日內(nèi)發(fā)出。 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)報(bào)告。見附表。 質(zhì)量控制 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制 試劑盒內(nèi)部對照15 / 74試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。如內(nèi)部對照結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。 室內(nèi)質(zhì)控品為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽性。外部質(zhì)控品的作用是判斷該批臨床樣品檢測的可信性。因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時(shí)，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以購買或?qū)嶒?yàn)室自行制備。 質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌、且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。 質(zhì)控圖 質(zhì)控圖參數(shù)外部質(zhì)控品的均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對外部質(zhì)控品重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做個批次的檢測，每個批次中不少于個質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。（）算術(shù)平均值（ ）：代表一組質(zhì)控品測定值的均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著x性意義，應(yīng)該采用至少次（天）測得的外部對照質(zhì)控品的值計(jì)算平均值。（）標(biāo)準(zhǔn)差（）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個指標(biāo)，是與質(zhì)控品值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組值的標(biāo)準(zhǔn)差以表示。（）變異系數(shù)（）：是反映各次值相對于均值離散程度的一個指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。（）控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如，按照質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品均值加減個標(biāo)準(zhǔn)差；按照質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品均值加減個標(biāo)準(zhǔn)差。 質(zhì)控規(guī)則 實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告結(jié)果之前必須評價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是和規(guī)則。（）告 警 （ ） ： 當(dāng) 外 部 質(zhì) 控 品 的 值 超 出 范 圍 時(shí) ， 系 統(tǒng) 處 于 告 警 狀 態(tài) ， 應(yīng) 予 注 意 ，x是 否 可 以 繼 續(xù) 檢 測 需 要 進(jìn) 一 步 觀 察 。 若 將 做 失 控 標(biāo) 準(zhǔn) ， 有 較 高 的 假 失 控 概 率 ， 所 以一 般 不 采 用 。（）失控（）：當(dāng)外部質(zhì)控品的值超出 范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)x結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)定性下降所致。 質(zhì)控圖的分析及失控處理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。 當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)， 必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。 室內(nèi)質(zhì)控其他方式—“即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控品連續(xù)測定次后，即可對第次以后的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下： 將質(zhì)控品的測定值從小到大排列：， ，……（為最小值，為最大值） 。 計(jì)算 和。x 計(jì)算 上限值 和 下限值 。最大值 x上限最小值x下限17 / 74 將 上限 、 下限 與值表（表）中的數(shù)字比較。表 值表（）當(dāng) 上限 和 下限 時(shí)表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。（）當(dāng) 上 限 和 下 限 有 一 值 處 于 ～ 值 之 間 時(shí) 說 明 該 值 在 ～ 范 圍 ， 處 于 “告 警 ”狀 態(tài) 。（）當(dāng) 上限 和 下限 有一值 值時(shí)說明該值已在范圍之外，屬“失控” ?！凹纯谭ā敝荒茉谇按蝺?nèi)使用，超出即可采用質(zhì)控圖方法。 快速法抗體檢測質(zhì)控 試劑內(nèi)對照在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過程質(zhì)控，說明實(shí)驗(yàn)操作全部完成并且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。如實(shí)驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無效，樣品須重檢。 室內(nèi)質(zhì)控品對照 外部質(zhì)控品可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽性樣品。下列情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號；更換檢測人員；更換包裝；更換試劑廠家。除此之外，建議每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測量大于份樣品，至少應(yīng)作次質(zhì)控。 出現(xiàn)以下問題，提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理損傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯誤、缺失或字跡模糊 （特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號和貨號，失效期或和生產(chǎn)日期） ；缺失目錄；泄漏或污染；不適宜的存放條件；保護(hù)包裝紙破損或污染；未達(dá)到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn) （陽性陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標(biāo)志） ；試劑質(zhì)量問題須報(bào)告省確證中心實(shí)驗(yàn)室。 開展抗體相關(guān)檢測的實(shí)驗(yàn)室須參加有資質(zhì)機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證，或室間比對。19 / 74第三章 新發(fā)感染檢測范圍本章規(guī)定了新發(fā)感染的檢測方法、程序、結(jié)果報(bào)告及質(zhì)量控制。適用于開展新發(fā)感染檢測的各類實(shí)驗(yàn)室。規(guī)范性文件引用 . . Atlanta, . . Atlanta, .新發(fā)感染檢測實(shí)驗(yàn)室要求須經(jīng)過培訓(xùn)考核合格的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室，方可開展本項(xiàng)檢測。目的了解重點(diǎn)人群新發(fā)感染情況，為估計(jì)艾滋病流行形勢和判斷疫情變化提供科學(xué)依據(jù)。新發(fā)感染檢測方法 方法學(xué)原理用于新發(fā)感染檢測的方法包括限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫方法（ – ， ）和 捕獲酶聯(lián)免疫方法（ , ） 。– 方法的原理是，人體在感染后產(chǎn)生的特異性抗體對相應(yīng)抗原的識別和結(jié)合能力隨著感染時(shí)間的延長而增加，即親和力逐漸增加。而方法的原理是，特異性占總抗體的比例隨著感染時(shí)間的延長而逐漸增高。兩種方法均只適用于抗體陽性樣品。只應(yīng)用于監(jiān)測目的，不能用于個體診斷和臨床，其用于監(jiān)測及發(fā)病率計(jì)算的條件參見“《艾滋病病毒新發(fā)感染監(jiān)測操作手冊》 ”。目前對兩種方法的評價(jià)結(jié)果顯示，– 方法的假陽性率較方法低，受疾病狀態(tài)，如細(xì)胞計(jì)數(shù)，抗病毒治療等因素的影響較方法小，可以更加準(zhǔn)確地區(qū)分新近感染和長期感染者。因此，方法正逐漸被– 方法所替代。此外，也有快速新發(fā)感染檢測方法的研究報(bào)道，因其具有快速、簡便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，未來對其需求將會越來越多。 方法 樣品和信息：來源于哨點(diǎn)監(jiān)測和病例報(bào)告系統(tǒng)，用于檢測的為抗體陽性樣本。 實(shí)驗(yàn)室檢測：首選推薦– ，也可使用。 數(shù)據(jù)分析：根據(jù)哨點(diǎn)監(jiān)測各人群新發(fā)感染檢測結(jié)果，結(jié)合流行病學(xué)相關(guān)資料，計(jì)算重點(diǎn)人群新發(fā)感染率,并進(jìn)行適當(dāng)校正；根據(jù)病例報(bào)告系統(tǒng)新報(bào)告感染者新發(fā)感染檢測結(jié)果，計(jì)算新發(fā)感染者占新報(bào)告感染者的比例，并根據(jù)相關(guān)背景信息，綜合分析新發(fā)感染情況。 樣品的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 入選標(biāo)準(zhǔn)（）新發(fā)感染檢測必須應(yīng)用診斷為抗體陽性的血清或血漿或樣品，禁止將抗體陰性樣品納入新發(fā)感染檢測。( ) 每份樣品量不少于。樣品要求清亮、無嚴(yán)重溶血、沒有交叉污染，必須保存在℃以下，反復(fù)凍融次數(shù)不多于三次。 排除標(biāo)準(zhǔn) – 方法()如果同一人在六個月以內(nèi)出現(xiàn)兩份或兩份以上確認(rèn)陽性樣品，將第一份樣品納入新發(fā)感染檢測。()所有艾滋病病人的樣品。()所有接受抗病毒治療的感染者樣品。 方法()如果同一人在六個月以內(nèi)出現(xiàn)兩份或兩份以上確認(rèn)陽性樣品，將第一份樣品納入新發(fā)感染檢測。()所有艾滋病病人的樣品。()所有接受抗病毒治療的感染者樣品。()細(xì)胞個者的樣本。 相關(guān)要求21 / 74() 對于哨點(diǎn)樣品，進(jìn)行新發(fā)感染檢測的樣品量必須占應(yīng)檢測陽性樣品的以上，否則不納入新發(fā)感染檢測。()哨點(diǎn)樣品必須具有哨點(diǎn)問卷編號，并盡可能補(bǔ)充病例報(bào)告系統(tǒng)卡片號。病例報(bào)告樣品應(yīng)當(dāng)填寫病例報(bào)告系統(tǒng)卡片號。 結(jié)果處理和解釋 – 方法： 確定對照和校準(zhǔn)品的中值值（中值值為次值排序后中間的值，陰性對照的中值為兩孔值的平均值） ，對照和校準(zhǔn)品的中值值必須在試劑盒規(guī)定的范圍內(nèi)，兩個樣品的值都必須在該范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。否則，任何一個對照和校準(zhǔn)品的中值值不在試劑