【正文】 技術(shù)在生物藥物研制方面發(fā)揮了重要作用.(3)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作為“生物反應(yīng)器”,由其液體或乳汁中體制人類蛋白制劑.(4)利用基因重組技術(shù)將編碼抗原決定簇或功能蛋白的外源基因插入植物病毒基因中,用以感染植物,使在植物體內(nèi)復(fù)制和裝配,從而高效表達(dá)所需抗原或蛋白.(5)重組及轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物制品解決了人源性生物制品原料不足的限制,同時(shí)較好的避免了致病因子污染人源性生物制品的危險(xiǎn)性,同時(shí),隨著擴(kuò)增、培養(yǎng)、純化技術(shù)的不斷完善,使這類制品逐步具有較大的產(chǎn)量,較少的成本,從而提高了市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力,最終將改變?nèi)嗽葱陨镏破返氖袌?chǎng)格局.第五章 二、名詞概念 :是一類胞外生物大分子,是動(dòng)物體內(nèi)糖蛋白分子中的糖鏈部分. :是動(dòng)物體內(nèi)血紅蛋白的成色成分,由原卟啉與一個(gè)二價(jià)鐵原子構(gòu)成的稱為鐵卟啉的化合物.、組織和器官來(lái)源的生物制品、腺體來(lái)源的生物制品、乳源生物制品及禽蛋來(lái)源的生物制品等.、酶與輔酶類制品、和酸類制品、糖類制品、脂類制品等.,基于其功能不同于其它蛋白質(zhì),只要極少量就能在生理pH及體溫下迅速產(chǎn)生巨大的、非常專一的效應(yīng).、核苷、堿基及其衍生物.、磷脂類、膽酸類、卟啉及其衍生物等.、羊、豬胰臟中提取的一種蛋白水解酶.,不溶于氯仿、乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑. 、牛、羊等哺乳動(dòng)物的胰腺中提取得到的一種混合酶制劑,主要成分為胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶,還有羧肽酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、激肽釋放酶和核糖核酸酶.,在動(dòng)物體內(nèi)具有促進(jìn)葡萄糖氧化及肝糖原合成的生理功能,注射胰島素后能使體內(nèi)血糖降低,肝糖元增加.,B鏈含有30個(gè)氨基酸殘基,兩鏈之間由兩個(gè)二巰基相連,A鏈還有一個(gè)鏈內(nèi)二巰基鍵.、部分熱變性、超濾等工藝過(guò)程制備的一種具 有高活力的混合肽類藥物制劑.,是一個(gè)直鏈的四吡咯化合物,屬于二烯膽素類.,屬于不均一的多糖分子,由動(dòng)物結(jié)締組織的肥大細(xì)胞產(chǎn)生,它廣泛分布于動(dòng)物的各種器官與組織中. ,又稱包壁質(zhì)酶,為糖苷水解酶,全稱為1,4βN溶菌酶是由129個(gè)氨基酸殘基組成的堿性球蛋白.第六章 :傳統(tǒng)的定義是指用人工變異或從自然界篩選獲得的減毒或無(wú)毒的活的病原微生物制成的制劑,或者用理化方法將病原微生物殺死制備的生物制劑,用于人工自動(dòng)免疫,以使人或動(dòng)物產(chǎn)生免疫力,這些制劑被稱為疫苗,(多肽、肽)、多糖或核酸,以單一成分或含有有效成分復(fù)雜顆粒的形式,或通過(guò)活的減毒致病原或載體,進(jìn)入機(jī)體后能產(chǎn)生滅活、破壞或抑制病原的特異性免疫應(yīng)答.:又稱死疫苗,是指利用加熱或甲醛等理化方法將人工大量培養(yǎng)的玩轉(zhuǎn)的病原微生物殺死,使其喪失感染性而保持其免疫原性,并結(jié)合相應(yīng)的佐劑而制成的疫苗.:又稱弱毒疫苗,是將微生物的自然強(qiáng)毒株通過(guò)物理的化學(xué)的和生物學(xué)的方法,連續(xù)傳代,使其對(duì)原宿主喪失致病力,或只引起亞臨床感染,但仍保持良好的免疫原性、遺傳特性,用這種毒株制備的疫苗就叫減毒疫苗.:將也稱遺傳工程疫苗,是指使用重組DNA技術(shù)克隆并表達(dá)保護(hù)性抗原基因,利用表達(dá)的抗原產(chǎn)物,或重組體本身制成的疫苗.:又稱生物合成亞單位疫苗或重組亞單位疫苗,主要是指將基因工程表達(dá)的蛋白抗原純化后制成的疫苗.:是指將病毒微生物的免疫原基因,通過(guò)分子生物學(xué)方法將其分離,然后與載體DNA相連接,實(shí)現(xiàn)遺傳特性的轉(zhuǎn)移與重新組合,在經(jīng)載體將目的基因帶進(jìn)受體進(jìn)行正常復(fù)制與表達(dá),從而獲得增值培養(yǎng)物供制疫苗用。②它能夠起到免疫作用.:是指使用經(jīng)遺傳重組方法獲得的重組微生物制成的疫苗.:也成為表位疫苗,是指使用化學(xué)方法合成能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)的多肽制成的疫苗.:是指使用與特定抗原的免疫原性相近的抗抗體(Ab2)做抗原制成的疫苗,稱為獨(dú)特型.:也稱可控緩釋疫苗,指使用微膠囊技術(shù)將特定抗原包裹后制成的疫苗,是一種使用現(xiàn)代材料和工藝技術(shù)改進(jìn)現(xiàn)有疫苗的劑型,簡(jiǎn)化免疫程序提高免疫效果的新型疫苗.,這是人類歷史上第一個(gè)使用疫苗消滅的傳染病..,或在不同寄主動(dòng)物上傳代是致病微生物毒性減弱,或通過(guò)物理、化學(xué)方法將其滅活來(lái)完成,稱為第一代疫苗.,將病毒、支原體等微生物制成的生物制品稱為狹義的疫苗,現(xiàn)在國(guó)際上一般將細(xì)菌性制劑、病毒性制劑以及類毒素統(tǒng)稱為疫苗.,也稱遺傳工程疫苗被稱為第二代疫苗.,其感染性已被滅活劑所滅活,表現(xiàn)一定程度的保護(hù)力.、免疫原性的穩(wěn)定性高易于制備多價(jià)疫苗等優(yōu)點(diǎn). 、毒株,其減毒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到足以產(chǎn)生模擬自然發(fā)生的隱形感染、引起免疫應(yīng)答的滿意水平,但不誘生臨床癥狀.。純度高。安全性高..1基因工程載體疫苗多為載體疫苗,重組體用量少,抗原不需純化,載體本身可發(fā)揮佐劑效應(yīng)增強(qiáng)免疫效果.17.“非復(fù)制型”載體,即重組微生物用于機(jī)體后,只保留DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)的功能,因此能有效產(chǎn)生保護(hù)性抗原,以刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng),但不能產(chǎn)生感染性的后代,這類載體具有高度安全性,并可能用作再次免疫.,故具有亞單位或滅活疫苗的安全性,又具有活疫苗的免疫全面的優(yōu)點(diǎn),核酸疫苗又稱第三代疫苗.、粒子轟擊(基因槍)技術(shù)和口服、鼻內(nèi)滴注等. :純度和安全性高?？砷L(zhǎng)期在常溫下保存.:其抗原性單一,免疫原性弱:合成肽疫苗的直鏈結(jié)構(gòu)缺乏天然蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。需要特定的載體與表達(dá)系統(tǒng).,有效的抗原應(yīng)能模擬誘生有效保護(hù)性抗體的應(yīng)答的抗原決定簇,為病原體蛋白中具有免疫優(yōu)勢(shì)的抗原決定簇。對(duì)某一病毒是特異的. 、枯草桿菌等,真核表達(dá)系統(tǒng)主要有哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞等.,在基因工程載體疫苗設(shè)計(jì)中,載體的安全性是首要考慮的問(wèn)題.,細(xì)菌載體操作更為簡(jiǎn)便,更易于實(shí)現(xiàn)多抗原的輸送。疫苗誘導(dǎo)的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)能抵抗攻擊的免疫保護(hù)力等體內(nèi)方法..,HIV的感染在世界范圍內(nèi)迅速流行,感染HIV的人數(shù)也日益增多.(HIV)在分類上歸于反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬中的靈長(zhǎng)類免疫缺陷病毒亞屬,己發(fā)現(xiàn)人免疫缺陷病毒有HIV1和HIV2兩種.,、HIv病毒有病毒核酸、病毒核心結(jié)構(gòu)蛋白和病毒復(fù)制所必須的酶類組成,: (1)基因組穩(wěn)定,較少發(fā)生重排,操作簡(jiǎn)單。(3)在人體內(nèi)不發(fā)生整合,無(wú)插入突變或激活癌基哆的風(fēng)險(xiǎn),應(yīng)用安全。(5)容易獲得高滴度的重組病毒。(2)明確描述插入載體時(shí)所用的內(nèi)切酶及方法:(3)具有穩(wěn)定結(jié)構(gòu)和功能(4)確定的基因產(chǎn)物與免疫反應(yīng)的關(guān)系: (5)插入后是否影響和改變其他基因的功能. : (1)最困難的是在很多可能的抗獨(dú)特型抗體中選擇特異性的抗獨(dú)特型抗體。(4)不能提供完全的保護(hù)。(2)用雜交瘤細(xì)胞在體外生產(chǎn)大量單克隆抗獨(dú)特型抗體比較容易,花費(fèi)小,生產(chǎn)周期短,濃縮純化簡(jiǎn)單(3)較非活化病毒能誘導(dǎo)更多的活性T細(xì)胞、B細(xì)胞反應(yīng):(3)對(duì)新生兒有特別價(jià)值:(4)僅啟動(dòng)其攜帶內(nèi)映像抗原決定簇的抗體反應(yīng):(5)能模仿抗原決定簇,使其被工程化.:(1)分子量小,拷貝數(shù)高,易于操作,插入的基因幅度較寬。(4)具有一些容易檢測(cè)的篩選標(biāo)記,比較安全.:(1)沒(méi)有感染威脅。(2)誘發(fā)特異性細(xì)毒T細(xì)胞免疫反應(yīng): (3)長(zhǎng)期持續(xù)免疫反應(yīng):(4)便于構(gòu)建多價(jià)疫苗:(5)穩(wěn)定性不受溫度影響。 (7)具備預(yù)防和免疫治療的雙重功能。(9)能定向誘導(dǎo)以Thl或Fh2為主導(dǎo)的免疫反應(yīng).:(1)具有很好的安全性。(3)外源基因包裝容量大。(6)耐熱性強(qiáng),易獲得高效價(jià)的培養(yǎng).: (1)溴化腈活化法(2)環(huán)氧基活化法 (3)硅膠的活化:(1)樣品上柱后分離目的物先緊密地吸附在親和柱上,迅速用平衡緩沖液洗滌時(shí)層譜上出現(xiàn)第一個(gè)雜蛋白的峰.(2)繼續(xù)用大量平衡緩沖液充分洗滌,必要時(shí)用不同緩沖液洗滌,以除去非專一吸附的雜質(zhì),使柱上只留下專一吸附的目的物.(3)然后改變緩沖液,要求選擇能減弱純化目的物與親和吸附劑之間吸附力的條件,使絡(luò)合物解離洗出,圖譜上出現(xiàn)第二個(gè)峰.(4)一般洗脫方法是改變緩沖液的pH,．1m01／／L稀鹽酸,如果目的物要被酸破壞,. (5)蛋白質(zhì)洗出后應(yīng)立刻中和、稀釋、透析、重折疊為天然結(jié)構(gòu)恢復(fù)蛋白質(zhì)活力.第七章 二、名詞概念:有細(xì)菌、支原體、螺旋體等制成的疫苗稱為細(xì)菌性疫苗.:又稱弱疫苗,是采用人工誘變的方法培育出的弱毒菌株或無(wú)毒菌株而制成的疫苗. :是指通常采用自然強(qiáng)毒菌株或標(biāo)準(zhǔn)菌株人工大量培養(yǎng)后,經(jīng)加熱處理或福爾馬林、戊二醛、.:將多糖與載體蛋白工價(jià)連接,通過(guò)載體蛋白提供適當(dāng)?shù)腡細(xì)胞表位,由T細(xì)胞表位,由T細(xì)胞協(xié)助B細(xì)胞產(chǎn)生多糖特異性抗體,使T細(xì)胞非依賴性抗原轉(zhuǎn)變?yōu)門(mén)細(xì)胞依賴性抗原,這類菌苗稱為多糖一蛋白結(jié)合苗.:主要是指用重組DNA技術(shù)研制的菌苗.,其發(fā)病急、傳播快、波及面廣且危害嚴(yán)重,.~2周接種2劑或3劑.,其發(fā)病率始終居24種法定傳染病前2位,主要病原體為痢疾桿菌,其致病特點(diǎn)是定居侵入結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞,且能迅速溶解吞噬泡膜進(jìn)入胞漿,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、膿血便、腹瀉、里急后重,甚至引起神經(jīng)癥狀和血尿綜合癥.:一個(gè)是減毒活疫苗,一個(gè)是化學(xué)組分苗.,是ETEC疫苗的重要成分.:,產(chǎn)生類志賀毒素和腸溶血素等,癥狀表現(xiàn)為出血性腹瀉,溶血性尿毒綜合癥、血栓形成性血小板減少性紫癜.,感染網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞系統(tǒng)、腸道淋巴組織及膽囊,病原是傷寒沙門(mén)菌,臨床表現(xiàn)為長(zhǎng)期發(fā)高熱、胃腸炎,敗血癥等. ,包括脊髓灰質(zhì)炎、霍亂和黃熱病活疫苗或麻疹、腮腺炎和風(fēng)疹聯(lián)合疫苗同時(shí)接種.,危害大的傳染病,隨著人口流動(dòng)的增加,軋多重耐藥性菌株的流行,以及MTB和人類免疫缺陷病毒的雙重感染,導(dǎo)致TB的發(fā)病率和死亡率大幅度上升.,避免了無(wú)關(guān)蛋白的免疫應(yīng)答,這一方面由于卡介疫苗,但是亞單位疫苗需加入佐劑,這一點(diǎn)在應(yīng)用時(shí)不易接受. ,可引起人類多種傳染性疾病,最常見(jiàn)和最嚴(yán)重的是腦膜炎,可將其分為兩大類,有莢膜型和無(wú)莢膜型.,被細(xì)胞攝取并轉(zhuǎn)錄翻譯,表達(dá)相應(yīng)抗原,通過(guò)不同途徑誘導(dǎo)機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答. ,用細(xì)菌釋放DNA優(yōu)點(diǎn)如下:增加靶向性。增加免疫途徑. 三、重點(diǎn)及難點(diǎn) :(1)安全,不能有毒性。 (4).(5)多價(jià),有更大的覆蓋面,因此對(duì)這類感染性病原體預(yù)存特異性抗體阻止病原微生物進(jìn)入細(xì)胞是特別必要的(6)能口服,能有效誘導(dǎo)黏膜免疫.(7)為大量人群應(yīng)用,疫苗必須廉價(jià).(8)易于生產(chǎn),貯存及服務(wù)不需冷藏.第八章 :瘧疾、血吸蟲(chóng)、利什曼原蟲(chóng)、絲蟲(chóng)、錐蟲(chóng).,人瘧疾是虐原蟲(chóng)引起的地方性傳染病,它是熱帶寄生蟲(chóng)病中最嚴(yán)重的一種.,其病原體為虐原蟲(chóng).,經(jīng)在肝臟發(fā)育繁殖引起的肝、脾及腎臟等器官的損害.、血孢子目、虐原蟲(chóng)屬,是由按蚊傳播的脊椎動(dòng)物寄生蟲(chóng).,瘧疾疫苗可分為3種,即抗紅前期原蟲(chóng)疫苗、抗紅內(nèi)期原蟲(chóng)疫苗和傳播阻斷疫苗.,唯有紅內(nèi)期原蟲(chóng)能使人體致病乃至死亡,人們期望的紅內(nèi)期疫苗由兩種:一種是完全有效的疫苗,這種疫苗能產(chǎn)生比天然感染更強(qiáng)的免疫保護(hù)力。(6)抗獨(dú)特型Ab疫苗(7)DNA疫苗.:(1)多數(shù)寄生蟲(chóng)為多細(xì)胞生物,寄生蟲(chóng)抗原成分非常復(fù)雜,很難找準(zhǔn)特定保護(hù)性抗原,保護(hù)性免疫應(yīng)答機(jī)制不清(2)寄生蟲(chóng)抗原免疫所誘導(dǎo)的大都為部分保護(hù)性免疫力。基因重組技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用。而治療性疫苗的使用對(duì)象是感染者,或免疫應(yīng)答低下的患者,故疫苗法屬免疫治療.(2)治療性疫苗與預(yù)防性疫苗使用的目的不同,后者是為了防病,二前者是為了治療或防止病情惡化.(3)治療性疫苗的另一個(gè)突出特點(diǎn)是應(yīng)用時(shí)必須考慮適應(yīng)癥與禁忌癥,也可根據(jù)需要進(jìn)行各種組合和調(diào)整.:(1)免疫原的選擇與優(yōu)化,治療性疫苗所用免疫原的選擇在深入研究治療對(duì)象的免疫應(yīng)答基礎(chǔ)上選定,根據(jù)病原學(xué)的特點(diǎn),一般選用的微生物抗原應(yīng)為能引起中和性抗體及可誘生殺傷T細(xì)胞免疫應(yīng)答的抗原。另一種是建立有病毒基因整合的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,類似天然的持續(xù)感染,但因是人工將病毒基因整合入鼠胚胎所獲得的動(dòng)物,畢竟與天然的病毒持續(xù)感染不同.(3)臨床應(yīng)用的重要性,因此常伴有免疫低或其他病理變化,在使用疫苗時(shí)需要預(yù)防性疫苗更為慎重,選擇對(duì)象時(shí)還可能伴有免疫損傷而出現(xiàn)不良反應(yīng),需要醫(yī)生協(xié)同進(jìn)行判斷:核酸疫苗的免疫機(jī)理概括為3個(gè)方面,含病原體的DNA疫苗被導(dǎo)入宿主的肌細(xì)胞或皮膚細(xì)胞后,可在肌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)病原體的蛋白質(zhì)抗原,經(jīng)加工后形成的多肽抗原可與宿主細(xì)胞．MHCI類和MHCII類分子結(jié)合,被提呈給宿主的免疫識(shí)別系統(tǒng),目的基因產(chǎn)物從肌細(xì)胞分泌出來(lái)后,被巨噬細(xì)胞或樹(shù)突狀細(xì)胞吞噬、提呈,分別在MHC I和MHC 11分子的限制下,誘導(dǎo)CTL前體、:樹(shù)突狀細(xì)胞是核酸免疫過(guò)程中的最重要的抗原提呈細(xì)胞,從而調(diào)節(jié)T細(xì)胞、B細(xì)胞功能,肌細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞均被感染,引起細(xì)胞亞群的同時(shí)活化,從而產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答.:(1)基因疫苗在接種后,蛋白抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá),加工處理過(guò)程與病毒的自然感染相似,抗原提呈過(guò)程也相同,因而可以誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫.(2)因外源基因在體內(nèi)存在較長(zhǎng)時(shí)間,不斷表達(dá)外源蛋白,持續(xù)給免疫系統(tǒng)提供刺激,因而非常方便(3)DNA質(zhì)粒性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定,疫苗在制成千粉后能在室溫保存很長(zhǎng)時(shí)間,因此運(yùn)輸和貯存非常方便(4),就可以轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行大規(guī)模擴(kuò)增并純化出來(lái),而且這種生產(chǎn)工藝建立起來(lái)以后,幾乎對(duì)所有質(zhì)粒都通用.(5)成本低,而且大規(guī)模生長(zhǎng)簡(jiǎn)單,所以成本大大降低.(6),而且沒(méi)有載體或佐劑也可發(fā)揮作用(7)可制成多價(jià)疫苗,產(chǎn)生聯(lián)合免疫,幾乎任何DNA片段都可以插入到DNA質(zhì)粒中作成疫苗,而一個(gè)DNA質(zhì)粒可以同時(shí)容納一個(gè)以上的抗原基因,包括一些可以影響免疫反應(yīng)的分子的基因(8)由于質(zhì)粒DNA幾乎無(wú)免疫原性,.(9)可重復(fù)使用.(10)安全穩(wěn)定,在迄今所作的核酸免疫試驗(yàn)中未檢測(cè)到抗體DNA的抗體,死疫苗釋放的異種蛋白則可引起一定的副作用.:(1)核酸疫苗的免疫機(jī)制尚不太清楚。(4)核酸疫苗的大量制備、純化工藝中尚存在許多理論和實(shí)踐上較難解決的問(wèn)題(5)核酸疫苗的用量和接種次數(shù)、間隔時(shí)間,接種途徑、方法和部位。(9)抗體維持的時(shí)間,以及如何終止核酸疫苗的作用等.:質(zhì)粒純化的主要目的是去除帶有抗原基因的表達(dá)質(zhì)粒DNA,再通過(guò)培養(yǎng)含有表達(dá)質(zhì)粒的工程苗使質(zhì)粒擴(kuò)增,最后利用一系列的純化方法獲得純度較高的質(zhì)粒.(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法,基本原理:聚乙二醇是一類高分子化合物,在不同的鹽離子溶液中,可結(jié)合形成孔徑不同的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),利用超