哺乳動(dòng)物細(xì)胞克隆(1)-閱讀頁(yè)
2025-02-05 18:00本頁(yè)面
【正文】 圖 86 小鼠核移植實(shí)驗(yàn) 與供體基因型一致 圖 88 體細(xì)胞克隆小鼠 圖 87 體細(xì)胞克隆小鼠 技術(shù)路線 奶?？寺∵^程 代孕牛 圖 89 以奶牛為例的產(chǎn)生克隆動(dòng)物技術(shù)路線示意圖 1 2 3 4 5 供卵動(dòng)物 (黑牛 ) 供核動(dòng)物 (黑白花牛 ) 幾種克隆方法匯總 體細(xì)胞克隆動(dòng)物 多莉羊的產(chǎn)生 圖 810 克隆多莉羊技術(shù)路線示意圖 （ 或 植入 到另一只羊的結(jié)扎的輸卵管內(nèi)，體內(nèi)培養(yǎng) ） ，英格蘭愛丁堡羅斯林研究所和PPL制藥公司宣布，于1996年 7月無(wú)性繁殖了一頭雌性小綿羊 “ 多莉 ” 。 圖 811 克隆羊多莉組圖 克隆 “ 多莉 ” 羊的具體操作步驟 ? (1)獲取供體細(xì)胞 取處于后 1/3妊娠期的 6歲白色 （ 白面 ） 母綿羊 A（ 芬蘭多塞特綿羊 ） 的乳腺細(xì)胞作核供體細(xì)胞 (具 54條染色體 ,體外培養(yǎng)傳代到第 3代至第 6代細(xì)胞 ),用 “ 饑娥法 ” ——10%FCS（ foetal calf serum小牛血清 ） 、 1%FCS和 %FCS連續(xù)培養(yǎng) 5天 ， 使其進(jìn)入G0期用作供體細(xì)胞 。用饑餓法連續(xù)培養(yǎng) 5d， 使其進(jìn)入 G0期用作受體細(xì)胞 。之后，將乳腺細(xì)胞與無(wú)核卵放入同一培養(yǎng)皿中，在微電流的作用下使乳腺細(xì)胞融入卵中，形成一個(gè)含有新的遺傳物質(zhì)的卵細(xì)胞。 ?(5) 產(chǎn)下 6歲母羊的復(fù)制品 白色 “ 多莉 ” 羊。 (2)成功的根本原因 ： 采用血清逐級(jí)遞減的 “ 饑餓法 ” 減慢細(xì)胞生長(zhǎng)速度 ， 使核供體細(xì)胞與核受體細(xì)胞的細(xì)胞周期同時(shí)進(jìn)入 G0期 ， 通過這一同步方法 ，實(shí)現(xiàn)了胚胎正常發(fā)育到期 。 Ian Wilmut用了 434體細(xì)胞 → 277(融合成功 )→ 247(輸入子宮 )→ 29(桑椹胚 )→ 13(只綿羊 )→ 1頭多莉羊 。 第二 ， 多莉羊是否真來(lái)源于乳腺上皮細(xì)胞 ? 供體細(xì)胞來(lái)源于已死于 1995年的一只 6歲懷孕綿羊 ，多莉羊是否來(lái)源于乳腺組織中混入的胚胎細(xì)胞 ，若如此 ， 則與幾十年前已成功的胚胎細(xì)胞核移植無(wú)異 。因?yàn)?“ 胎盤 ” 是一道天然的過濾屏障，胚胎細(xì)胞很難透過“ 胎盤 ” 進(jìn)入血液循環(huán)再到達(dá)乳腺。 ? 克隆胚胎妊娠率低、流產(chǎn)率高； ? 胎兒胎盤大、出生率低； ? 出生后常出現(xiàn)呼吸、消化等系統(tǒng)的異常。 圖 8－ 12 克隆動(dòng)物異常 ?在核移植胚胎中，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)可以是來(lái)源于不同的動(dòng)物個(gè)體，甚至是不同的物種。 ?哺乳動(dòng)物核移植中，無(wú)論采用電融合法還是胞質(zhì)內(nèi)注射法重構(gòu)卵， 不可避免的將部分供體線粒體帶入受體卵胞質(zhì)， 即重構(gòu)卵胞質(zhì)中有供體又有受體來(lái)源的線粒體。 和正常受精胚胎發(fā)育中線粒體變化相似 ， 供體來(lái)源的線粒體被受體卵胞質(zhì)所識(shí)別 ， 被蛋白水解作用降解并消失 。 重構(gòu)胚或核移植個(gè)體中的線粒體呈異質(zhì)性 。 受體來(lái)源的線粒體被選擇性降解 ， 供體來(lái)源的線粒體選擇性復(fù)制 。 ? 通過實(shí)時(shí)熒光定量監(jiān)測(cè)表明，就單個(gè)胚胎講，供體細(xì)胞來(lái)源的線粒體與受體卵來(lái)源的線粒體從 1細(xì)胞期到桑椹胚期其含量都保持恒定； ? 卵子來(lái)源的線粒體在囊胚期經(jīng)歷復(fù)制，而供體細(xì)胞源的線粒體在囊胚期略有降解。隨年齡增長(zhǎng)，端粒變短。但楊向忠等對(duì) 10頭克隆牛研究發(fā)現(xiàn)，克隆動(dòng)物與并無(wú)差異。這頭牛的后代通過自然繁殖產(chǎn)下一頭重 。 圖 813 英科學(xué)家克隆出人類胚胎 克隆人胚胎引發(fā)爭(zhēng)議 圖 8－ 13 治療性克隆與生殖性克隆技術(shù)路線示意圖 克隆人違犯了倫理學(xué)三原則 (1) 違背了 “ 不傷害原則 ” 目前人類知識(shí)遠(yuǎn)沒有達(dá)到徹底了解人類基因組所有基因功能的水平 ， 且克隆技術(shù)很可能導(dǎo)致大量的流產(chǎn)與殘障嬰兒 。 克隆生命個(gè)體 自然將該兒童本屬于偶然性的部分自由 （ 自主原則 ） 剝奪了 。 ? （ 1）克隆基礎(chǔ)理論研究， 弄清楚為什么克隆動(dòng)物受孕率，存活率低，流產(chǎn)率，死亡率高等一系問題； ? （ 2）開展治療克隆和器官移植 ，以推動(dòng)人類更好地解決各種疑難疾病，為人類健康造福。 “ 條件成熟時(shí)甚至還可以將滅絕物種恢復(fù)原狀，例如取出掩埋于冰川底下已滅絕動(dòng)物的體細(xì)胞，通過克隆讓它們?cè)佻F(xiàn)于地球 ” ； 克隆技術(shù)未來(lái)的發(fā)展 一般性研究 （ 2）重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容 ? 第一 ,認(rèn)識(shí)去分化細(xì)胞是如何重新獲得全能性的 。 ? 第二 ,動(dòng)物克隆技術(shù)與轉(zhuǎn)基因技術(shù)或基因敲除技術(shù)組結(jié)合已成為未來(lái)世界各國(guó)科學(xué)家相互競(jìng)爭(zhēng)的制高點(diǎn)。利用克隆技術(shù)獲得克隆胚胎，培育胚胎干細(xì)胞，并誘導(dǎo)形成臨床上要達(dá)到治療目的所需的細(xì)胞、組織和器官等
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