凝膠過濾層析法測定蛋白質(zhì)分子量-閱讀頁
2025-06-01 07:50本頁面
【正文】 (ml/g) 【 應用 】 生物大分子的純化 分子量測定 脫鹽及去除小分子雜質(zhì) 去熱源物質(zhì) 溶液的濃縮 【 操作方法 】 一、凝膠的選擇和處理 量 取 110mL Sephadex G75于 250 mL燒杯中，加入洗脫液 100mL，在沸水浴中煮沸 1h，冷卻至室溫后抽真空脫去顆?？障吨械目諝?。 2） 凝膠柱床總體積（ Vt）的測定：在距柱上端約 5㎝ 處作一記號，關(guān)閉柱出水口，加入蒸餾水，打開出水口，液面降至柱記號處即關(guān)閉出水口，然后用量筒接收柱中蒸餾水，讀出的體積即為柱床總體積 Vt 。然后關(guān)閉出水口，靜置片刻，等完全沉降，將接接口的乳膠管與盛有洗脫液的儲液瓶連接，調(diào)流速 3～ 6mL/10min，用 2～ 3倍 柱床體積的洗脫液平衡。用細滴管吸取 1 mL藍色葡聚糖 2021液，小心地繞柱壁一圈 （ 距膠面2mm） 緩慢加入，打開出水口 （ 開始收集 ） ，待溶液完全滲入柱床后，關(guān)閉出水口，取 1mL洗脫液沿管壁洗柱一次，等溶液完全滲入柱床，柱上端再加入幾毫升洗脫液，將柱上端接口與儲液瓶連接，打開出水口，開始洗脫。 1） 用洗脫液配制標準蛋白質(zhì)溶液（ 牛血清蛋白、雞卵清蛋白、溶菌酶）。 3）分別收集各標準蛋白質(zhì)的洗脫峰 （ 靈敏度 ），測量它們的洗脫體積 Ve。 4） 以 Kav值為橫坐標，標準蛋白質(zhì) lgMr為縱坐標，繪出標準曲線。根據(jù)紫外檢測的洗脫峰位置，量出洗脫體積 Ve ，代入公式計算待測蛋白的 Kav值，然后在標準曲線上查得lgMr，其 反對數(shù) 便是未知樣品的相對分子質(zhì)量
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