20xx年醫(yī)學(xué)專題—第十六篇細(xì)胞因子及細(xì)胞粘附因子的測定-在線瀏覽
2024-11-13 20:31本頁面
【正文】 物熒光(y237。)方法分類,第九頁，共三十八頁。ch233。在細(xì)胞的增殖過程中，DNA合成(h233。ng)的增加使得指示細(xì)胞對核苷或堿基的需求增多，若將核苷標(biāo)記上可以示蹤的同位素（3H/125I ），通過檢測細(xì)胞內(nèi)的同位素含量，則可反映細(xì)胞增殖的程度。y242。,常見(ch225。n)細(xì)胞因子3HTdR摻入檢測法所需細(xì)胞及參考試驗(yàn)條件,第十一頁，共三十八頁。bāo)代謝變化為增殖指征 指示細(xì)胞的增殖情況與線粒體代謝活性相關(guān),測定(c232。ng)步驟類似,相同點(diǎn),不同點(diǎn),與同位素?fù)饺敕ㄏ啾?xiānɡ bǐ),摻入物：MTT而非3HTdR； 反應(yīng)條件：選用的細(xì)胞及其濃度、 培養(yǎng)時(shí)間不同,(2) MTT 比色法,第十二頁，共三十八頁。zh236。,對指示細(xì)胞具有破壞作用的細(xì)胞因子，若與細(xì)胞共育將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。)培養(yǎng)細(xì)胞的死細(xì)胞數(shù)作為判斷指標(biāo)，死細(xì)胞數(shù)量與細(xì)胞因子的活性呈正比。死、活細(xì)胞情況可用同位素51Cr釋放法判斷，或應(yīng)用臺(tái)盼蘭染色死細(xì)胞后直接計(jì)數(shù)。死細(xì)胞數(shù)、51Cr釋放量越高或比色測定的吸光值越低，表明待測細(xì)胞因子的細(xì)胞毒活性則越高。,本法常用(ch225。nɡ)于TNF等的測定,二、細(xì)胞毒活性測定法,基本原理,第十四頁，共三十八頁。)的IFNα和IFNγ,本法(běn fǎ)常用于IFN等的測定，IFN可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抑制病毒RNA和DNA合成的酶，保護(hù)細(xì)胞不受病毒感染，產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）。ngdngd,TNFα和TNFβ與同一受體結(jié)合，故兩者生物學(xué)活性相似 用TNFα與TNFβ特異性中和抗體作阻斷試驗(yàn)，以區(qū)別兩類TNF TNF活性測定靶細(xì)胞：小鼠成纖維細(xì)胞株L92LM、WEHI164.13 注意： 若選用L929細(xì)胞，其不宜(b249。)生長過密。 MTT染色時(shí)，必須考慮待檢樣品中有無激活靶細(xì)胞的因素。nɡ y242。,細(xì)胞病變程度分為5個(gè)等級(jí)，即： “0”，表示無明顯CPE； “1+”，CPE≤25％； “2+”，CPE為25～50％； “3+”，CPE為50～75％； “4+”，CPE為75～100％。 該法操作復(fù)雜、影響因素較多，在試驗(yàn)前應(yīng)對所用(suǒ y242。,細(xì)胞(x236。,第十七頁，共三十八頁。 化學(xué)增活性(chemokinesis)： 細(xì)胞因子增強(qiáng)細(xì)胞的隨機(jī)運(yùn)動(dòng)(y249。ng)能力的特性,可采用瓊脂糖小滴化學(xué)動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)檢測。udǎo)細(xì)胞移動(dòng)的方式,四、趨化活性測定法,第十八頁，共三十八頁。)繁瑣 易受干擾,五、生物學(xué)活性測定方法學(xué)評價(jià)(p237。),第十九頁，共三十八頁。,第二十頁，共三十八頁。ngli224。ELISA法不僅可以用于細(xì)胞因子檢測，也可用于可溶性細(xì)胞因子受體或可溶性粘附因子的測定,第二十一頁，共三十八頁。ndu224。,ELISA,特異、簡便 易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn) 可同時(shí)檢測大量標(biāo)本(biāoběn)且試驗(yàn)廢棄物便于處理 細(xì)胞因子測定的首選方法,優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn),缺點(diǎn),第二十二頁，共三十八頁。ngtǐ)染色技術(shù)并借助流式細(xì)胞儀敏感的分辨力所建立的方法。ngtǐ)染色，能簡單、快速地進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞水平的細(xì)胞因子或粘附因子的檢測，精確判斷不同細(xì)胞亞群細(xì)胞因
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