【正文】 染在臨床上常見以下幾種情況：（1）毒血癥：致病菌不進入血液循環(huán)，但其產(chǎn)生的外毒素入血。（3）敗血癥：致病菌侵入血流，在其中大量繁殖并產(chǎn)生毒性物質(zhì)。（5）內(nèi)毒素血癥：革蘭陰性細菌侵入血流，并在其大量繁殖，崩解后釋放大量內(nèi)毒素。（一）革蘭染色革蘭染色為兩種染料先后進行染色，為復染色法。染色步驟：初染1min（結(jié)晶紫）→流水沖洗→媒染1min（盧戈碘液）→流水沖洗→脫色2030s（95%乙醇）→流水沖洗→（稀釋苯酚復紅液或沙黃）→流水沖洗→干燥→鏡檢意義：鑒別細菌、指導用藥、指導臨床治療。（二）抗酸染色抗酸染色也是兩種染料先后染色，也是復染色法。③痰標本需要經(jīng)過酸或堿處理后，使痰液化后接種。結(jié)果判定：染成紅色為抗酸菌，染成藍色為非抗酸菌。暗視野聚光法使用暗視野顯微鏡可觀察螺旋體及其動力。%～。細菌L型的培養(yǎng)基必須采用高滲（3%～5%NaCl、10%～20%蔗糖等）低瓊脂培養(yǎng)基。平板劃線接種法一般用于含有多種細菌的標本，利用此接種法可以得到單個菌落，分為分區(qū)劃線法和連續(xù)劃線法。連續(xù)劃線法多用于含菌量少的標本。穿刺接種法可用于觀察細菌動力，有鞭毛的細菌可沿穿刺線擴散生長。1細菌在液體培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象有三種，分別是：①混濁（大多數(shù)細菌）；②沉淀（鏈狀生長的細菌，如鏈球菌、炭疽芽孢桿菌等）；③菌膜（專性需氧菌，如銅綠假單胞菌等）。β溶血：又稱完全溶血，菌落周圍形成一個完全清晰透明的環(huán)。雙環(huán)：上層溶血環(huán)，內(nèi)層為θ溶血，外層為α溶血。1傾注平板法用于水、牛乳、飲料及尿液等液體標本的細菌計數(shù)。1最常用的營養(yǎng)培養(yǎng)基：血平板和巧克力平板。1選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種化學成分或抗生素以抑制某些細菌的生長，而有助于需要的細菌生長，此培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。1增菌培養(yǎng)基：如乙型溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌的生長需含血液或血清的培養(yǎng)基；霍亂弧菌的增菌常用堿性蛋白胨水。巰基乙醇酸鈉是特殊培養(yǎng)基。細菌血液培養(yǎng)使用的抗凝劑為聚苯乙烯磺酸鈉（SPS）。甲基紅試驗的原理是細菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，加入甲基指示劑變紅為試驗陽性。VP試驗常與甲基紅試驗一起使用，因為前者陽性的細菌，后者通常為陰性。（二）蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗包括：靛基質(zhì)（吲哚）試驗、硫化氫試驗、尿素酶試驗、苯丙氨酸脫氨酶試驗、氨基酸脫羧酶試驗。硫化氫試驗是細菌能分解含硫氨基酸，產(chǎn)生的H2S與Fe2+反應呈黑色為陽性。如沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細菌，絕大多數(shù)硫化氫陽性，其他菌屬陰性。尿素酶試驗是細菌分解尿素生成氨，使培養(yǎng)基呈堿性，指示劑變紅為陽性。（三）碳源利用試驗碳源利用試驗包括枸櫞酸鹽利用試驗和丙二酸鹽利用試驗。丙二酸鹽利用試驗的陽性結(jié)果為深藍色。（四）酶類試驗觸酶試驗：細菌能催化過氧化氫生成水和氧氣，出現(xiàn)氣泡為陽性。凝固酶試驗：主要用于金黃色葡萄球菌的鑒定。葡萄球菌、沙雷菌、變形桿菌均為陽性。若加入試劑后無顏色反應，可能是：①硝酸鹽沒有被還原，試驗陰性；②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產(chǎn)物而導致假陰性結(jié)果，這時應在試管內(nèi)加入少許鋅粉（還原劑），如出現(xiàn)紅色則表明試驗確實為陰性。（五）其他及藥敏鑒定試驗CAMP試驗：B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進葡萄球菌的β溶血素溶解紅細胞的活性，因此在兩菌（B群鏈球菌和葡萄球菌）的交界處溶血力增加，出現(xiàn)箭頭狀或矢形（半月形）的溶血區(qū)。膽汁溶菌試驗：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是由于膽汁降低細胞膜表面的張力，使細胞膜破損或使菌體裂解；或者是由于膽汁加速了肺炎鏈球菌本身自溶過程，促使細菌發(fā)生自溶。桿菌肽試驗：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎全部敏感，而其他群鏈球菌絕大多數(shù)對其耐藥。五、細菌毒力鑒定▲內(nèi)毒素常采用鱟試驗——內(nèi)毒素激活鱟試劑中凝固酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂?，凝固蛋白原生成凝固蛋白。第五章細菌對抗菌藥物的敏感試驗一、臨床常用抗菌藥物（一）β內(nèi)酰胺類常見藥物主要是青霉素類、頭孢菌素類和單環(huán)β內(nèi)酰胺類（氨曲南和卡蘆莫南）。（二）氨基糖苷類作用機制：①依靠離子的附作用，吸附在菌體表面，造成膜的損傷；②和細菌核糖體30S小亞基發(fā)生不可逆結(jié)合，抑制mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成，造成遺傳密碼的錯讀，產(chǎn)生無意義的蛋白質(zhì)。（三）喹諾酮類作用機制：①通過外膜孔蛋白和磷脂滲透進入細菌細胞；②作用于DNA旋轉(zhuǎn)酶，干擾細菌DNA復制、修復和重組。②第二代：對G和G+細菌均有作用；比較這類藥的抗菌活性強度依次為環(huán)丙沙星、氧氟沙星、羅美沙星、氟羅沙星、培氟沙星、諾氟沙星；③第三代：對G+菌作用高于第二代的4～8倍，對厭氧菌亦有作用；司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟沙星、加替沙星、格帕沙星、莫西沙星等。新一代大環(huán)內(nèi)酯類有克拉霉素、羅紅霉素、地紅霉素、氟紅霉素、阿奇霉素和乙酰麥迪霉素?！沫h(huán)素類：阻止酰胺基轉(zhuǎn)移酶RNA與mRNA核糖體的受體位點結(jié)合?！让顾仡悺⒘挚嗣顾仡悾耗芘c細菌核蛋白體50S亞基結(jié)合，使蛋白質(zhì)合成呈可逆性抑制。包括萬古霉素、去甲萬古霉素、替考拉寧、多粘菌素、桿菌肽等。二、抗菌藥物敏感試驗方法▲細菌多抗菌藥物的敏感分為三種現(xiàn)象：敏感（S）、耐藥（R）、中介（I）。采用的接種方法是平板涂布法。含藥紙片貼于含菌瓊脂表面時應注意：①各紙片中心距離不小于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應大于15mm；②一旦碰觸培養(yǎng)基就不可再動；③平板最好單獨平放，不超過兩個疊放?！艚瘘S色葡萄球菌ATCC25923，大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853，糞腸球菌ATCC29212或ATCC33186。堿性可擴大氨基糖苷類藥物的抑菌圈，酸性可擴大四環(huán)素類藥物的抑菌圈。體外聯(lián)合藥物敏感試驗的FIC（部分抑菌濃度指數(shù)）：FIC指數(shù)＜協(xié)同作用；～1相加作用；FIC指數(shù)1～2無關(guān)作用；FIC指數(shù)＞2拮抗作用。產(chǎn)ESBL菌株臨床上用β內(nèi)酰胺類抗生素（青霉素類、頭孢菌素類及氨曲南）治療無效。產(chǎn)AmpC酶菌株對β內(nèi)酰胺類抗生素（青霉素類、頭孢菌素類及氨曲南）及含酶抑制劑復合制劑耐藥。藥敏試驗時，10^8/ml含菌量。包括金黃色、表皮、腐生、溶血葡萄球菌。葡萄球菌的致病性用凝固酶試驗，致病性葡萄糖球菌為陽性，還可以分解甘露醇產(chǎn)酸，耐熱DNA酶陽性。葡萄球菌的細胞壁上有葡萄球菌A蛋白（SPA），可以與人類IgG的Fc段結(jié)合，可進行協(xié)同凝集試驗。耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐萬古霉素的金黃色葡萄球菌（VRSA），耐萬古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE），MRSA的首選抗生素為萬古霉素。腐生葡萄球菌是導致尿路感染的常見病原菌之一?！矜溓蚓鷮冁溓蚓鷮偈且淮笕河|酶試驗陰性、在液體培養(yǎng)基上呈鏈狀排列的革蘭陽性（G＋）球菌，但在陳舊培養(yǎng)基或被吞噬細胞吞噬后常呈革蘭陰性（G－）。肺炎鏈球菌矛頭狀排列，由于其能產(chǎn)生自溶酶，菌落呈臍窩狀，鑒別試驗：奧普托欣試驗（Optochin），陽性、膽汁溶菌試驗陽性、莢膜腫脹試驗陽性、草綠色溶血圈。A群鏈球菌用桿菌肽試驗鑒別，為陽性。對人類有致病性的90%屬A群。D群鏈球菌七葉苷試驗陽性。鏈球菌感染引起的變態(tài)反應疾病為風濕熱、腎小球腎炎，為Ⅲ。因為有這幾種酶的的產(chǎn)生，化膿性鏈球菌感染的病灶范圍廣、膿液稀薄、邊界不清?！衲c球菌屬腸球菌屬是腸道的正常棲居菌。腸球菌能在高鹽（%NaCl）、高堿（）、40%膽汁培養(yǎng)基上和10℃～45℃環(huán)境下生長；●奈瑟菌屬G，呈腎形，坦面相對，雙球菌，存在于中性粒細胞內(nèi)（或胞外），無鞭毛，無芽胞，有菌毛。在血瓊脂平板、巧克力瓊脂或EPV瓊脂，置5%～10%C02環(huán)境中，35℃培養(yǎng)18～24h后可見圓形、灰褐色、濕潤、光滑、邊緣整齊、直徑1～2mm的小菌落。奈瑟菌屬初次分離需要5%10%二氧化碳。腦膜炎奈瑟菌定植于鼻咽部，引起流腦，少數(shù)還可引起敗血癥。懷疑奈瑟菌感染，標本需保溫保濕送檢?！衲c桿菌科腸桿菌科共同特征：革蘭氏陰性桿菌、氧化酶陰性、觸酶和硝酸鹽還原試驗為陽性。O抗原和H抗原是腸桿菌科分群及分型的依據(jù)，乳糖發(fā)酵是區(qū)別致病性與非致病性，致病性不發(fā)酵乳糖，非致病性發(fā)酵乳糖。兼性厭氧菌。雙糖鐵發(fā)酵管（KIA）產(chǎn)酸產(chǎn)氣，IMViC試驗結(jié)果＋＋－－。腸道內(nèi)感染：（1）產(chǎn)毒素性（ETEC）：主要引起旅游者腹瀉、嬰兒腹瀉。（3）腸侵襲性（EIEC）：類似志賀菌腸炎的癥狀。（4）腸出血性（EHEC）：常見血清型O157：H7，引起出血性腸炎，主要見于嬰幼兒，還可引起溶血性尿毒癥。●志賀菌屬G，短小桿菌，無莢膜，無芽胞，無鞭毛，有菌毛。志賀菌屬是細菌性痢疾最常見的病原菌，中國最常見的是福氏（B群）和宋氏（D群）。由于志賀菌沒有鞭毛，所以它沒有H抗原，有O抗原、K抗原。●沙門菌屬G，直桿菌，無芽胞，無莢膜，周鞭毛（除雞沙門菌），多數(shù)有菌毛。產(chǎn)H2S者在SS瓊脂上形成黑色中心菌落。傷寒沙門菌檢測用肥達試驗：用已知的傷寒沙門菌O、H抗原，副傷寒甲、乙H抗原稀釋后與被檢血清作定量凝集試驗，以檢測患者血清中抗體的含量，來判斷機體是否受沙門菌感染而導致腸熱癥并判別沙門菌的種類。傷寒沙門菌感染1周取血液標本，2～3周取糞便，3周以后取尿液?！褡冃螚U菌屬G，桿菌，多形，有周鞭毛，無芽胞、無莢膜。苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性使其重要的生化鑒別反應?！褚疇柹鷮倨胀ㄗ冃詶U菌引起食物中毒，奇異變性桿菌引起嬰幼兒腸炎鼠疫耶爾森菌是鼠疫的病原菌，我國將其列為甲類傳染病。鼠疫耶爾森菌在血平板上菌落柔軟、黏稠，在液體培養(yǎng)基中，開始為渾濁生長，24小時后為沉淀生長，48小時后形成菌膜，搖動后呈鐘乳石狀下沉。小腸結(jié)腸耶爾森菌22～25℃培養(yǎng)有周鞭毛，呈翻滾螺旋運動；35℃時培養(yǎng)該菌無動力，最適生長溫度為20～28℃?！窕【鷮倩【蒲趸付际顷栃?，動力陽性的G細菌?；魜y弧菌根據(jù)生物學特性上的差異，分為古典生物型和Eltor生物型兩個生物型，兩個生物型的抗原同屬O1群霍亂弧菌?；魜y運動呈穿梭狀或流星狀，排列呈魚群狀，在亞碲酸鉀培養(yǎng)基上是褐色菌落，培養(yǎng)基是堿性蛋白胨水?；魜y弧菌的鑒別培養(yǎng)用硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂平板（TCBS）。霍亂弧菌的O1群、O139群引起霍亂，O2～O138群只引起人類胃腸炎，稱之為非O1群霍亂弧菌。副溶血性弧菌是一種嗜鹽菌，常存在與海水及海類產(chǎn)品中，是沿海地區(qū)食物中毒最常見的病原菌。1副溶血性弧菌能使人或兔的紅細胞發(fā)生溶血，對馬紅細胞不溶血，稱為神奈川現(xiàn)象。小結(jié)：志賀菌IMViC（+），大腸埃希菌IMViC（++），產(chǎn)氣腸桿菌IMViC（++）。嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌可發(fā)酵阿拉伯糖。假單胞菌屬、產(chǎn)檢桿菌屬、不動桿菌屬等不能發(fā)酵葡萄糖，均為非發(fā)酵革蘭陰性桿菌。該菌42℃可生長，可通過該試驗區(qū)分其他假單胞菌。不動桿菌屬有三陰特征，即氧化酶、動力、硝酸鹽還原試驗均為陰性。培養(yǎng)有特殊要求，營養(yǎng)要求高，初次分離需要5%～10%CO2，用巧克力平板。嗜血桿菌的菌落呈露滴狀。流感嗜血桿菌相似，也能產(chǎn)生衛(wèi)星現(xiàn)象，在生長過程中只需要V因子而不需要X因子。傳播途徑為空氣。引起布病。1彎曲菌屬，不分解糖類，氧化酶陽性，分離培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中需含有大量抗生素，初次分離，須在5%O10%CO85%N2的氣體環(huán)境中生長。1白喉棒狀桿菌特異性標志是異染顆粒，在亞碲酸鉀培養(yǎng)基上是黑色菌落，培養(yǎng)基選用呂氏血清斜面和亞碲酸鉀，致1～，可發(fā)生形態(tài)變異，形成大而均勻的圓球狀并相連如串珠狀，稱為串抗酸染色分級報告標準：①－：連續(xù)觀察300個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；②177。2麻風分枝桿菌，典型的胞內(nèi)寄生，所在細胞呈泡沫狀，稱為麻風細胞?？顾崛旧珵殛栃詶U菌。2破傷風梭菌，嚴格厭氧，有周鞭毛、無莢膜。本菌的致病物質(zhì)主要是外毒素，包括破傷風痙攣毒素和破傷風溶血毒素，引起強直性痙攣。3肉毒梭菌引起食物中毒，致病物質(zhì)是肉毒毒素，是已知最劇烈的神經(jīng)外毒素。3艱難梭菌可以引起腹瀉和假膜性腸炎。有獨特的發(fā)育周期：①原體有高度感染性，無繁殖能力；②始體（網(wǎng)狀體），有繁殖能力，沒有感染性。3沙眼衣原體培養(yǎng)用McCoy細胞，鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體用Hela299細胞培養(yǎng)。④性淋巴肉芽腫：又稱第四性病。3肺炎衣原體，呼吸道傳播，主要引起肺炎。治療藥物首選紅霉素。解脲支原體通過性傳播，引起非淋菌性尿道炎。立克次體一個重要試驗是外斐試驗，是非特異性凝集試驗。OX2對應斑點熱，OXK對應恙蟲病。治療藥物首選青霉素。4梅毒三期分型，一期硬下疳，二期梅毒疹，三期梅毒瘤4早期梅毒傳染性強，破壞力小，晚期破壞力大，傳染性小4梅毒通過性傳播，輸血傳播，垂直傳播4梅毒檢查非特異性試驗用牛心類脂質(zhì)。4放線菌患者病灶有硫磺顆粒，菌體呈菊花狀，菌落由R型轉(zhuǎn)變?yōu)镾型。色素小顆粒壓碎染色鏡檢，可見顆粒呈菊花狀。巴西諾卡菌七葉苷、黃嘌呤、肌醇、甘露醇均為陽性。●真菌常見考點真菌檢測的標本如皮屑、指甲、頭發(fā)等，需要用10%KOH處理。白假絲酵母菌鑒別要點：①芽管形成試驗（＋）；②厚膜孢子形成試驗（＋）；③脲酶試驗（－）；④不能形成假菌絲；⑤革蘭陽性。艾滋病人最易合并感染的真菌是卡氏肺孢子菌。●病毒常見考點病毒是非細胞型微生物，基本結(jié)構(gòu)是核心、衣殼。此病毒的命名方式HXNX（X為型號，比如H1NH2N2等）。常見并發(fā)癥為肺炎。甲型肝炎病毒（HAV）是無包膜的RNA病毒。產(chǎn)生的甲肝抗體為IgM，ELISA檢測用捕獲法。常見考點：①HBV的大球型顆粒（Dane）有感染性；②乙肝兩對半：HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc；③大三陽指HBsAg、HBeAg、抗HBc均為陽性，此種模式為急性乙肝，傳染性極強；④小三陽指HBsAg、抗HBe、抗HB