食品微生物實驗室操作手冊-在線瀏覽
2024-10-21 04:44本頁面
【正文】 裂）。觀察是否渾濁，渾濁說明菌種復蘇生長；若不渾濁，細菌應延長培養(yǎng)時間至7天，真菌應延長培養(yǎng)時間至14天，若仍未渾濁，滅菌處理。%（ml/ml）%無菌氯化鈉溶液洗脫到無菌試管中。以無菌技術向復壯后的菌種中加入100ml20%的無菌甘油混勻，12ml/管分裝于凍存管。其余作為儲備管。以無菌技術向復壯后的菌種中加入20ml、30%的無菌甘油混勻，12ml/管封存于凍存管。其余作為儲備管。內容包括：菌種名稱、菌種代號、編號、代次、制備日期、制備人、貯存條件、有效期至等。用無菌接種環(huán)從質控管中取細菌培養(yǎng)物接種到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，或相應的宜于該細菌生長的鑒別平板上，劃線分離出單個菌落。假如在該平板上發(fā)現有其他菌落生長，則說明或操作有污染或菌種不純?？蓪ふ以蛑匦路蛛x挑選純菌落轉接斜面菌種作為第四代。菌種的傳代次數（自原始菌種凍干粉起）不得超過5代。傳第三代時取1支凍存管自然解凍，將其轉接斜面菌種作為工作用菌種。工作用菌種，分為兩類：一類用于定期傳代(W3)，一類用于實驗用（S3）。（2）將裝有新鮮配制的培養(yǎng)基菌種保藏管管壁上注明菌名及接種日期，和傳代菌種一并移入潔凈工作臺，打開紫外燈照射一小時。點燃酒精燈，左手握住菌種斜面，將管口靠近火焰上方，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅約30秒，隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過三次。（5）塞上管塞，左手將菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂斜面（或改良馬丁瓊脂斜面）一支，照上述操作打開管塞，將接種環(huán)伸入管內至瓊脂斜面的底部向上劃一條直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線，一直劃到斜面頂端，使細菌接種在斜面的表面上。（7）將已接種好的細菌管置30～35℃細菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)22 ～24h，真菌管置23～28℃真菌培養(yǎng)箱最多培養(yǎng)7天。按上述程序操作，直至（W4）轉為（W5）為止，需重新接種，舊的工作菌種進行銷毀。每次進行菌種復活時，只能復活一個菌種。每次操作，都應進行記錄。標明菌種名稱、菌種代號、代次、傳代人、編號和傳代日期、貯存條件、有效期至等。并對操作過程進行記錄。這些都是必備基本設備，只要能擺放的下就可以。這些房間的共同特點是地板和墻壁的質地光滑堅硬，儀器和設備的陳設簡潔，便于打掃衛(wèi)生。室內設有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實驗臺、電爐、冰箱和上下水道、電源等。由于使用過的器皿已被微生物污染，有時還會存在病原微生物。室內應備有加熱器、蒸鍋，洗刷器皿用的盆、桶等，還應有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。（四）無菌室無菌室也稱接種室，是系統(tǒng)接種、純化菌種等無菌操作的專用實驗室。在一般環(huán)境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，很易造成污染，對接種工作干擾很大。其基本要求有以下幾點：（1）無菌室應有內、外兩間，內間是無菌室，外間是緩沖室。最小內間面積2＝5m2，外間面積12＝2m2，都應有天花板。（3）在分隔內間與外間的墻壁或“隔扇”上，應開一個小窗，作接種過程中必要的內外傳遞物品的通道，以減少人員進出內間的次數，降低污染程度。（4）無菌室容積小而嚴密，使用一段時間后，室內溫度很高，故應設置通氣窗。通氣窗可在內室使用后、滅菌前開啟，以流通空氣。（1）無菌室內的工作臺，不論是什么材質、用途的，都要求表面光滑和臺面水平。內室的紫外線燈應安裝在經常工作的座位正上方，離地面2m，外室的紫外線燈可安裝在外室中央。（4）內室應有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業(yè)酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標簽紙、膠水、廢物筐等。無菌室使用了較長時間，
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