【正文】 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 II 頁 畢業(yè)論文 任務(wù)書 題 目 厚樸中厚樸酚與和厚樸酚提取工藝研究 本論文的目的、意義 中藥厚樸為木蘭科木蘭屬喬木 (Magnolia officinalis Rehd． et Wils)凹葉厚樸 (Magnolia officinalis Rehd． et Wils． var． biloba Rehd． et Wil)的干燥樹皮、根皮以及枝皮，厚樸酚與和厚樸酚 (honokiol)為其 主要活性成分，它具有多種藥理作用，包括抗炎，抗心律失常，抗癲癇，抗血小板，抑制肌肉收縮和抗菌作用，此外還可以抑制氮的氧化產(chǎn)物，抑制腫瘤壞死因子 α的表達(dá)活性等。本論文以 正交試驗設(shè)計為工具，以浸膏得率作為質(zhì)量指標(biāo)，考察 醇法提取 厚樸中厚樸酚與和厚樸酚的提取工藝條件，著重研究乙醇濃度、回流時間、提取次數(shù)、乙醇用量等因素對浸膏得率的影響，得到其較優(yōu)的提取工藝條件，為工業(yè)化提取工藝的設(shè)計提供理論依據(jù)。 論文各部分內(nèi)容及時間分配：（共 16 周） 第一部分 查閱文獻(xiàn)資料。 （ 1 周 ） 第三部分 準(zhǔn) 備實驗儀器設(shè)備，藥材，試劑，藥品 。 （ 8周 ） 第五部分 結(jié) 果分析， 翻譯文獻(xiàn)，撰寫論文。 提取中藥中有效成分的傳統(tǒng)方法主要有 堿提酸沉法，水提取法，乙醇提取法，聚酰胺分離提取法， 堿提樹脂工藝，超臨界 CO2 萃取等，其中乙醇提取法由于價廉、污染小、適合工業(yè)生產(chǎn)等特點(diǎn)而被廣泛使用。 乙醇濃度對浸膏得率的影響最大，乙醇濃度在70%的時候浸膏得率最高 ； 其次是提取次數(shù)，提取次數(shù)越大，浸膏得率越高 ； 之后是乙醇 用量，用量 6 倍時最好 ； 影響最小的因素是提取時間，隨提取時間的延長，浸膏得率升高，但在 120min 提取時間后，再延長提取時間，浸膏得率反而降低， 因此 可以考慮縮短提取時間，以降低能耗，提高經(jīng)濟(jì)效益。 關(guān)鍵詞： 厚樸酚，提取工藝；正交試驗法；醇提法。 圖 厚樸實物圖 1． 形態(tài)特征 落葉喬木，高 15 米，胸徑達(dá) 35 厘米；樹皮厚，紫褐色，有辛辣味；幼枝淡黃色，有細(xì)毛，后變無毛；頂芽大，窄卵狀圓錐形，長 45 厘米，密被淡黃褐色絹狀毛?；ㄅc葉同時開放，單生枝頂，白色，芳香，直徑 1520 厘米；花被片 912，厚肉質(zhì)，外輪長圓狀倒卵形，長 810 厘米，內(nèi)兩輪匙形，長 厘米；，雄蕊多數(shù)，花絲紅色；心皮多數(shù)。 厚樸葉互生，橢圓狀倒卵形，先端圓而有短急尖頭，全緣；長 2435 厘米，寬 1224厘米，表面光滑，淡黃綠色，葉柄長 34 厘米。果期 910 月，聚合果長橢圓狀卵形，長912 厘米，直徑 厘米，心皮排列緊密，成熟時木質(zhì)，頂端有彎尖頭；種子三角狀倒卵形，外種皮紅色。生長海拔下限是 500 米，生長海拔 上限是 20xx 米。喜光且喜涼爽、濕潤、多云霧、相對濕度大的氣候環(huán)境。其根系發(fā)達(dá)，生長快，萌生力強(qiáng)。 分布區(qū)年平均溫 1420℃ ， 1 月平均溫 39℃ ，年降水量 8001400 毫米。在 土層深厚、肥沃、疏松、腐殖質(zhì)豐富、排水良好的微酸性或中性土壤上生長較好。根系發(fā)達(dá)，生長快，萌生力強(qiáng)。壽命可長達(dá) 100 余年。厚樸是木蘭屬中分布較廣、而且較原始的種類，對研究東亞和北美的植物區(qū)系及木蘭科分類有科學(xué)意義。由于過度剝皮和砍伐森林，使這一物種資源急劇減少，分布面積越來越小，野生植株已極少見。 性狀鑒別 及顯微鑒別 1． 形狀鑒別 厚樸外形為干皮，呈卷筒狀或皮塊狀 ，如圖 所示， 長約 1030 cm，厚 cm，根皮呈單筒狀或不規(guī)則塊片，枝皮呈單筒狀，厚 cm，表面粗糙，顏色外表面灰棕色或灰褐色，表面較平滑。厚樸皮層石細(xì)胞呈不規(guī)則分枝，多個成群，韌皮部射線寬 13 列細(xì)胞， 纖維多呈束，顆粒性，內(nèi)部紫色或棕色纖維性，可見發(fā)亮的細(xì)小結(jié)晶 [1]。外表面灰棕色或灰褐色，粗糙，有時呈鱗片狀，較易剝落，有明顯橢圓形皮孔和縱皺紋，刮去粗皮者顯黃棕色。質(zhì)堅硬，不易折斷，斷面顆粒性，外層灰棕色，內(nèi)層紫褐色或棕色，有油性，有的可見多數(shù)小亮 星。根皮（根樸）呈單筒狀或不規(guī)則塊片；有的彎曲似雞腸，習(xí)稱 “雞腸樸 ”。枝皮（枝樸）呈單筒狀，長 1020cm，厚 。 2． 顯微鑒別 厚樸橫切面為落皮層黃棕色，由外向內(nèi)分別是老的木栓層、木栓形成層、栓內(nèi)層（石細(xì)胞環(huán)）和皮層薄壁細(xì)胞及皮層石細(xì)胞；有時新周皮于栓內(nèi)層（石細(xì)胞環(huán)）發(fā)生，無老皮層。皮層石細(xì)胞分布較多，單個散在或數(shù)個成群，形大，長 64239μm，寬 32111μm，呈多角形或鹿角分枝狀，孔溝明顯，層紋清晰可見，強(qiáng)木化，亦有少數(shù)壁薄腔大的；油細(xì)胞多數(shù)散在，圓形或橢圓形，圓形者直徑 6299μm，橢圓形者長徑 74167μm，短徑 5681μm，內(nèi)含黃棕色樹脂狀物或充滿黃色油液，壁略增厚，微木化；偶見纖維束；薄壁細(xì)胞長方形，切向排列。薄壁細(xì)胞含草酸鈣棒狀小結(jié)晶或方晶。 主要成分 厚樸中含有 5 種酚類物質(zhì)，主要成分為木蘭醇（ Magnolo1）和厚樸酚（ Honokid）及揮發(fā)油和生物堿，揮 發(fā)油中含 β桉油醇體及其異構(gòu)體。據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明，厚樸有中樞鎮(zhèn)靜、抗痙攣及抗鏈球菌等多方面藥理作用，并證明 這些作用的有效成分為厚樸酚和 β桉油醇。 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 4 頁 注（一）皮橫切面簡圖（ ）（二）皮橫切面詳圖（ 77）（三）皮組織解離圖 1. 纖維 （均 193） 粉末為纖維窄長條狀，寬 1931μm，末端漸尖，極少數(shù)邊緣有微波狀突起，胞腔較窄，孔溝不明顯。草酸鈣方晶較少，直徑 ，棒狀結(jié)晶較多，長 .。楊紅兵等 [10]采用揮發(fā) xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 5 頁 油測定法和氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用對湖北恩施產(chǎn)厚樸的揮發(fā)油進(jìn)行研究，由表 可看出發(fā)現(xiàn)其主要成分是倍半萜 （ sesquiterpenoids） 及其含氧衍生物 （ oxide derivatives）（包括酯類化合物如乙酸龍腦酯等）類化合物。同時他們發(fā)現(xiàn)同一厚樸株，枝皮的揮發(fā)油含量最高，枝、干、根皮依次降低；不同樹齡問，五年生與二十年生厚樸的揮發(fā)油含量較高，十年生與十五年生的含量較低。 表 十五年生厚樸干皮（未發(fā)汗）的揮發(fā)油成分分析結(jié)果 [10] No tR／ min 化合物名稱 分子式 相對含量／ % 1 βp inene C10H16 2 βmyrcene C10H16 3 Αphellandrene C10H16 4 pcymene C10H14 5 Dlimonene C10H16 6 eucalyptol C10H18O 7 linalool C10H18O 8 transmenthenol C10H18O 9 βterp ineol C10H18O 10 borneol C10H18O 11 4carvomenthenol C10H18O 12 αterpineol C10H18O 13 piperitone C10H18O 14 borneolacetate C12H20O2 15 copaene C15H24 16 βelemene C15H24 17 isocaryophyllene C15H24 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 6 頁 表 十五年生厚樸干皮（未發(fā)汗）的揮發(fā)油成分分析結(jié)果 續(xù) [10] No tR／ min 化合物名稱 分子式 相對含量／ % 18 caryophyllene C15H24 19 αcaryophyllene C15H24 20 γcadinene C15H24 21 αselinene C15H24 22 γselinene C15H24 23 δcadinene C15H24 24 αcalacorene C15H20 25 caryophylleneoxide C15H24O 26 γeudesmol C15H25O 27 hinesol C15H26O 28 βeudesmol C15H26O 29 cadalene C15H18 30 1, 3, 5 tris(1methylethyl) benzene C15H24 31 nhexadecanoic acid C16H32O2 32 linoleic acid C18H32O2 2． 木脂素 木脂素類成分是厚樸中分離出來的最多的一類化合物，迄今為止已分離出 20多種木脂素類化合物，多數(shù)屬于新木脂素。厚樸酚與和厚樸 酚是一對同分異構(gòu)體，由兩分子苯丙素通過 33’碳原子相連，主要從厚樸的樹皮、根皮中得到，也有從葉中獲得的 [13]，還有厚樸酚與和厚樸酚結(jié)構(gòu)類似的化合物及二聚體，如厚樸三醇 B（ Magnatriol B）、厚樸醛 B， D（ Magnoldehyde B， D）、單菇木脂素、木蘭醌、 4Omethylhonokiol， 3Omethylmagnolol、 magnaldehyde B、magnolignan A 和 magnolignan C等 [14]。 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 7 頁 圖 厚樸酚與和厚樸酚的分子結(jié)構(gòu)圖 3． 生物堿 厚樸樹皮中含有生物堿，王洪燕等對凹葉厚樸 Magnolia officinalis ，采用離子交換樹脂法提取總堿，硅膠柱層析法分離純化，最后分得 9個異喹啉生物堿，分別為 N降荷葉堿、 lirinidine、羅默堿、番荔枝堿、 lysicamine、鵝掌楸堿、瑞枯靈、 isosalsoline和Nmethylisosalsoline[。其余生物堿類成分主要為厚樸堿（ Mcurarine），此外還有木蘭花堿（ Salicifoline）、武當(dāng)木蘭堿（ magnosprengerine）、白蘭花堿（ michelarbine）、木蘭箭毒堿（ magnocurarine）等 [12， 14]。分離得 9個化合物，經(jīng)理化和波譜分析，鑒定出 7個成分，分別為棕櫚酮、槲皮苷、蘆丁、花生酸、二十六烷醇、 β谷甾醇、胡蘿卜苷，均為首次從 厚樸中分離得到 [15]。厚樸活性成分厚樸酚有顯著抑制胃酸分泌和抗?jié)冏饔?。厚樸主治病食不消、寒濕瀉痢、溫中止痛 [3]。厚樸乙醇提取物 5 g／ kg、 15 g／ kg均有明顯鎮(zhèn)痛作用，明顯減少乙酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高，并明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫及角叉菜膠引起的小鼠足跖腫脹。 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 8 頁 厚樸酚對小鼠體內(nèi) A23187引起的胸膜炎具有很好的抗炎療效，厚樸酚在濃度 10 mg／ kg的劑量時可減輕 A23187引起的蛋白質(zhì)泄漏， A23187引起的分葉核白細(xì)胞的滲透被厚樸酚抑制，同時，厚樸酚減少了胸膜液體中的前列腺素和白三烯水平，厚樸酚 在濃度為 ／ L時還抑制由 A23187引起的凝血唔烷 B2（ TXB2）和 LTB4的形成。另外，抑制溶酶體酶的釋放也可能是厚樸酚抗炎作用機(jī)制之一。 3． 中樞性、末梢性肌松弛與抗痙攣作用 厚樸常用于極度精神緊張、興奮狀態(tài)及原因不明振顫。和厚樸酚具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮作用。 4． 心肌保護(hù)作用 厚樸的活性成分厚樸酚，試驗證實對心肌具有保護(hù)作用。在解除結(jié)扎后的 10分鐘再灌注，室性心律失常的發(fā)生也大為減少。 5． 抗茵作用 厚樸的乙醚和甲醇提取物對致齲變形鏈球菌有強(qiáng)抗菌作用，其抗菌活性成分確定為厚樸酚，對變形鏈球 菌的最低抑菌濃度（ MIC）為 g／ ml，其抗菌作用（對變形 鏈球菌）比黃連素更強(qiáng)。 厚樸酚與和厚樸 酚具有明顯抗真菌作用。和厚樸酚對牙齒周圍的病原菌也具有顯著的抑制作用，馮瑾等研究了厚樸活性成分厚樸酚與和厚樸酚對 5種致齲菌的生長和產(chǎn)酸的影響， 5種致齲菌分別為變形鏈球菌、血鏈球菌、內(nèi)氏放線菌、粘性放線菌和乳酸桿菌。在藥物、對致齲菌產(chǎn)酸能力的影響研究中發(fā)現(xiàn)，厚樸酚及和厚樸 酚對致齲菌產(chǎn)酸均有一定的抑制作用，且隨著藥物濃度增加，抑制作用增強(qiáng) [24] 。構(gòu)效關(guān)系研究表明，