【正文】 響應(yīng)值不穩(wěn)定，有時(shí)會(huì)波動(dòng)較大，不建議使用。 熔距越短或終熔點(diǎn)越接近高限、純度越高。 【 氧瓶燃燒法 】 樣品一定要燃燒完全。 【 溶液的澄清度與顏色、氯化物、硫酸鹽、重金屬檢查等 】 建議配制梯度對(duì)照液，這樣可對(duì)樣品進(jìn)行一個(gè)全面、綜合分析。 【 崩解時(shí)限 】 膠囊劑有時(shí)會(huì)出現(xiàn)膠囊殼存留于網(wǎng)底的情況，可將囊殼取出，若其中無內(nèi)容物，亦可判斷為合格。一般 105℃ 、 3小時(shí)肯定已可以！ 典型案例 ——鹽酸西布曲明，見下。 其中的環(huán)丁基較為“脆弱”，不斷緩慢分解。 殘留溶劑 研究思路 ★ 研究原則： 合成過程中使用到的有機(jī)溶劑均需建立測(cè)定方法、并予以研究測(cè)定。 ★ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 擬定原則： 除第一類溶劑外、 “未檢出的溶劑” 可以不擬定，僅擬定最后一步重結(jié)晶溶劑。 殘留溶劑 研究思路 ★ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 擬定原則： 如僅殘留有重結(jié)晶溶劑、且為低沸點(diǎn)（如乙醇、丙酮等），完全可采用105℃ 干燥失重方法予以替代。 ★ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是一個(gè)不斷完善的過程： ? 列舉“自套枷鎖”、“事倍功半”實(shí)例！ ? 列舉阿法骨化醇無需研究測(cè)定實(shí)例！ 氣相色譜法測(cè)定時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng) (1) l 強(qiáng)烈建議男同志從事此項(xiàng)工作。 l 對(duì)于二氯甲烷、三氯甲烷采用氫火焰檢測(cè)器 (FID)勉為其難、應(yīng)采用電子捕獲檢測(cè)器 (ECD)。 l 供試品溶液一定要全部溶解。 氣相色譜法測(cè)定時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng) (2) ? 對(duì)照品溶液配制法（引申至對(duì)照品為油狀時(shí)）。 ? 定性時(shí)、多根色譜柱使用的意義。 ? 直接法進(jìn)樣樣品溶液后，進(jìn)樣針極易堵塞。試驗(yàn)結(jié)束后用乙醇浸泡進(jìn)樣針。使用時(shí)，酌情（針對(duì)放置時(shí)間和樣品之類）再標(biāo)化一份即可。 ☆ 高氯酸滴定液應(yīng)臨用現(xiàn)標(biāo)。 ☆ 不常用滴定液建議購(gòu)買，如甲醇鈉滴定液等。 (3) 指示劑使用注意點(diǎn) 部分指示液配制后，如放置時(shí)間過久，其變色會(huì)遲鈍，導(dǎo)致消耗體積過大，結(jié)果偏高；故配制后酌情放入冰箱中。 (5) 容量分析法與 HPLC法介紹 （引申至對(duì)照品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) ） ☆ 容量分析法：專屬性差、人為因素較強(qiáng)；但省時(shí)省力。 ☆ 雜質(zhì)和主成分對(duì)照品的標(biāo)化方法。即如何確定合適的“閾值”：先全程滴 定，根據(jù)突躍變化情況，確定閾值后再次滴定，尤其 是進(jìn)行兩個(gè)突躍點(diǎn)的滴定時(shí)（引申至新版藥典）。試驗(yàn)溫度建議在 3050℃ 。 ※ 色譜柱清洗： 對(duì)于正相、實(shí)驗(yàn)結(jié)束用流動(dòng)相再?zèng)_洗半小時(shí)即可。絕不推薦 …… ※ 液相色譜儀：絕不建議為節(jié)約乙腈 /甲醇，而采用兩個(gè)泵，將水相與有機(jī)相分別注入混合的方式（即便配置了脫氣機(jī)）。 ※ 正相流動(dòng)相無需過濾、混合均勻后超聲即可。 絕不建議 A相位純水相、 B相位純有機(jī)相，即便質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如此擬定，采用一元一次函數(shù)，將其轉(zhuǎn)換成第二種情況，否則極易出現(xiàn)基線飄動(dòng)、無法準(zhǔn)確積分的現(xiàn)象。 確認(rèn)色譜柱內(nèi)清洗干凈后再測(cè)定樣品。 高效液相色譜法應(yīng)用時(shí) 經(jīng)常出現(xiàn)的問題 高效液相色譜法測(cè)定含量 (1) 對(duì)照品溶液配制 2份（ 2份粉末） 分別進(jìn)樣 3針，計(jì)算校正因子 f=C/A，隨后計(jì)算 f的 RSD，小于%即認(rèn)為 2份對(duì)照品溶液配制均無誤、且儀器已穩(wěn)定。 (2) 樣品溶液亦配制 2份，每份進(jìn)樣一針，兩份百分含量差值在 177。 高效液相色譜法測(cè)定含量 (3) 待全部樣品檢測(cè)結(jié)束后（無所謂 n針，即便運(yùn)轉(zhuǎn)了一天、亦無須擔(dān)憂），任取一份對(duì)照溶液回進(jìn)一針，計(jì)算含量（濃度），應(yīng)在理論濃度偏差的177。 (4) 如原方法為內(nèi)標(biāo)法，秉承藥審中心提出的“仿產(chǎn)品不是仿標(biāo)準(zhǔn)”理念，一定要改為外標(biāo)法！除非前處理極為繁瑣、較易損失時(shí)。便于過濾（對(duì)于制劑）、雜質(zhì)干擾減少、積分準(zhǔn)確。 ? 波長(zhǎng)不是最大吸收波長(zhǎng)亦可、選用末端吸收。 薄層色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì) (1) 盡可能使用商品化薄層板、不建議自行鋪制。 (3) %斑點(diǎn)如顯現(xiàn)不出，加大點(diǎn)樣量。 (5) 顯色劑盡可能新鮮配制。 高效液相色譜法測(cè)定 有關(guān)物質(zhì) (1) 每批樣品配制 1份，即可。 (3) 對(duì)照溶液連續(xù)進(jìn)樣 3針，計(jì)算主峰峰面積的RSD，小于 %即認(rèn)為儀器穩(wěn)定、積分無誤。 高效液相色譜法測(cè)定 有關(guān)物質(zhì) (4) 測(cè)定空白溶劑（梯度洗脫時(shí)一定要先行測(cè)定） (5) 每一樣品進(jìn)樣一針，對(duì)雜質(zhì)峰進(jìn)行積分。 ? 技巧：對(duì)照溶液稀釋后，若主峰面積呈線性（一般均呈線性），歸一化法計(jì)算結(jié)果與自身對(duì)照法測(cè)定結(jié)果基本一致（相差在 %以內(nèi)），可用歸一化直接觀測(cè)。 溶出（釋放）度測(cè)定 以釋放量的 10%～120%間選取 5個(gè)點(diǎn)即可。 測(cè)定結(jié)果 ： 1）闡述如何看待截距和斜率、如何應(yīng)用。 3）為什么沒有不成線性的？通常 C、 H、 O、N結(jié)構(gòu)，紫外監(jiān)測(cè)器決定。梯度洗脫時(shí)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不成線性。 何種情況不呈線性？ 唑 來 磷 酸 結(jié) 構(gòu) 式 不呈線性情況 ： 1）分子結(jié)構(gòu)式怪異，如唑來膦酸。 3）主成分在色譜柱上幾乎無保留，保留時(shí)間為“死時(shí)間”（如氫溴酸右美沙芬的測(cè)定） 4）濃度過高時(shí)、檢測(cè)器或色譜柱超載。 2）緩釋制劑溶出度測(cè)定，對(duì)照品濃度設(shè)定為中間濃度。 3）回收率試驗(yàn)為何做 80%~120%即可？亦及樣品濃度與對(duì)照品濃度接近到何等程度的理解。 二、精密度試驗(yàn) 重復(fù)性試驗(yàn)：連續(xù)進(jìn)樣 6次。 濃度極低時(shí)才會(huì)不理想，加大進(jìn)樣量。加大柱溫、增加流動(dòng)相中有機(jī)相比例，使被測(cè)物質(zhì)峰盡快出峰。 已知雜質(zhì)、且有雜質(zhì)對(duì)照品的，可采用加入法，即加樣回收率來評(píng)價(jià)。 有關(guān)物質(zhì)的驗(yàn)證，采用中間體和降解產(chǎn)物（確認(rèn)結(jié)構(gòu)后人工合成）來驗(yàn)證與主成分的分離。 介紹配制方法： 先配制雜質(zhì)貯備液，再用供試品溶液（或濃的對(duì)照品溶液）來稀釋，簡(jiǎn)便、易行！ 存在問題： 配制相同濃度，測(cè)定樣品時(shí)，主成分峰驟然加大，將雜質(zhì)峰覆蓋。 破壞追求的目標(biāo)：可產(chǎn)生降解產(chǎn)物的條件下，主成分保留70~80%量。 ★ 保留時(shí)間的設(shè)定 經(jīng)過上述方法學(xué)認(rèn)證后，確定供試品溶液的保留時(shí)間，通常以洗脫出全部雜質(zhì)和經(jīng)強(qiáng)力破壞試驗(yàn)出的雜質(zhì)，規(guī)定至主成分保留時(shí)間的幾倍為止。