劉寧_dna重組技術(shù)的基本工具-在線瀏覽
2025-03-12 09:11本頁面
【正文】 成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因。 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 推測 推測 目的基因 化學(xué)合成 ? 上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？ 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 鳥槍法 反轉(zhuǎn)錄法 根據(jù)已知氨基酸合成 DNA法 操作簡便廣泛使用 工作量大，盲目，分離出來的有時(shí)并非一個(gè)基因 專一性強(qiáng) 操作過程麻煩， mRNA很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高 專一性最強(qiáng) 僅限于合成核苷酸對(duì)較少的簡單基因 思考 :為什么要構(gòu)建基因文庫 ?直接從含有目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎 ? ? 哪些新技術(shù)能大大簡化基因工程的操作技術(shù)？ 1） DNA序列自動(dòng)測序儀： 2） PCR技術(shù)： 對(duì)提取出來的基因進(jìn)行核苷酸序列分析。 ① 概念： PCR全稱為 _______________，是一項(xiàng) 在生物 ____復(fù)制 ___________的核酸合成技術(shù) ③條件： _______________________、 _______________、 ___________ (做啟動(dòng)子 )、 ： ②原理： __________ ④方式：以 _____方式擴(kuò)增，即 ____（ n為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤結(jié)果： 選修 1 P60 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 DNA復(fù)制 已知基因的核苷酸序列 四種脫氧核苷酸 一對(duì)引物 DNA聚合酶 指數(shù) 2n 使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增 (二 )利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 _________切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切 口，露出 ____________。 (二 )基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —— 核心 ______處， 再加入適量 ___________，形成了一個(gè)重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 限制酶 黏性末端 同一種限制酶 的黏性末端 切口 DNA連接酶 相同 質(zhì)粒 DNA分子 限制酶處理 一個(gè)切口 兩個(gè)黏性末端 兩個(gè)切口 獲得目的基因 DNA連接酶 重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） —— 核心 同一種 (二 )基因表達(dá)載體的構(gòu)建 : ： 復(fù)制原點(diǎn) +目的基因 +啟動(dòng)子 +終止子 +標(biāo)記基因 它們有什么作用？ ? 常用的受體細(xì)胞： 有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。 步驟三：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 (三 )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 轉(zhuǎn)化 —— 方法 將目的基因?qū)? 植物細(xì)胞 將目的基因?qū)? 動(dòng)物細(xì)胞 將目的基因?qū)? 微生物細(xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 感受態(tài)細(xì)胞 目的基因進(jìn)入 _________內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程 受體細(xì)胞 穩(wěn)定 表達(dá) 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 （ 1）農(nóng)桿菌介紹 （ 2）原理及適用范圍 (三 )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 （ 1）方法：顯微注射法 （ 2）程序： (三 )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 （ 1）思考：為什么選用微生物作為受體細(xì)胞？ （ 2）方法： 目的基因的檢測和鑒定 大量的受體細(xì)胞接受不多的目的基因。 將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落，檢測菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。 無表達(dá)產(chǎn)物 無表達(dá)產(chǎn)物 有表達(dá)產(chǎn)物 無表達(dá)產(chǎn)物 (四 )目的基因的檢測與鑒定 —— 檢查是否成功 檢測 — 鑒定 —— ①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA 上是否插入了目的基因 ②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA ③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 方法 —— 方法 —— 方法 —— DNA分子雜交 分子雜交 （ DNARNA雜交） 抗原抗體雜交 DNA分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的 DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。 二、基因工程在畜牧養(yǎng)殖業(yè)上的應(yīng)用 將人的 生長激素基因 和牛的生長激素基因分別注射到小白鼠受精卵中，得到的“ 超級(jí)小鼠 ”。 基因工程在畜牧養(yǎng)殖業(yè)上的應(yīng)用 導(dǎo)入人基因具特殊用途的豬 背上長人耳的老鼠 三、基因工程與藥物研制 我國生產(chǎn)的部分基因 工程疫苗和藥物 許多藥品的生產(chǎn)是從 生物組織 中
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