實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)報(bào)告-在線瀏覽
2025-02-11 00:07本頁(yè)面
【正文】 多態(tài) (SSLP)技術(shù) 簡(jiǎn)單序列長(zhǎng)度多態(tài)位點(diǎn)是動(dòng)物基因內(nèi)廣泛存在的由 l～ 4個(gè)核苷酸組成的成串的重復(fù)序列 ，又稱為微衛(wèi)星 (micro satellite)。 在每個(gè)特定的位點(diǎn)上 ， 重復(fù)序列的長(zhǎng)度在不同品系中存在著差異 。 21 例如：小鼠第 16條染色體的 D16Mit4位點(diǎn) ，其 PCR產(chǎn)物的大小 （ bp） 在常用近交系中分別如下： C57BL/6132， DBA/2123， A/J147， C3H123， BALB/c149， AKR126，CBA132。 22 3． DNA指紋 (finger printing)技術(shù) 上述兩種 DNA技術(shù)是針對(duì)單個(gè) DNA位點(diǎn)進(jìn)行的測(cè)試 。 DNA指紋技術(shù)經(jīng)過(guò)電泳后可獲得十幾到幾十條帶 ， 而這些帶型在個(gè)體之間或品系之間有差異 ， 如同人類的指紋在每個(gè)人都不同一樣 ， 因此而得名 。 一是用限制性內(nèi)切酶和小衛(wèi)星探針技術(shù)獲得的 DNA指紋 。 23 DNA指紋圖譜有時(shí)在亞系或亞群之間有區(qū)別 ， 所以對(duì)亞系的監(jiān)測(cè)十分有用 。 因此 ， 也影響其在遺傳監(jiān)測(cè)和其他研究中的應(yīng)用 。 24 4． 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài) （ RAPD） 技術(shù) RAPD技術(shù)是 20世紀(jì) 90年代發(fā)展起來(lái)的一種簡(jiǎn)便 、 快捷的檢測(cè)基因組 DNA多態(tài)性的遺傳標(biāo)記技術(shù) 。 各種 DNA多態(tài)分析方法 ， 25 如： DNA指紋 、 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài) (RFLP)等 ， 雖然可直接檢測(cè)基因組的遺傳變異 ，但都不同程度地存在操作復(fù)雜 、 需要特異性操作 、 需要事先知道動(dòng)物基因組 DNA序列等不足 。 26 七、遺傳性狀監(jiān)測(cè)結(jié)果的分析 當(dāng)被檢查的遺傳性狀與每個(gè)品系的遺傳概貌圖一致時(shí) ， 同時(shí)遺傳管理資料清晰 、 可信 ， 可以認(rèn)為有關(guān)品系的繁育生產(chǎn)正在正確地進(jìn)行 ， 該品系的動(dòng)物遺傳質(zhì)量合格；若與遺傳概貌圖不一致時(shí) ， 可以考慮以下原因： 27 1． 遺傳污染 (geic contamination) 這是最常見的遺傳變異 ， 往往是由于 遺傳學(xué)管理不善所致 。 出現(xiàn)上述情況均應(yīng)淘汰原品系 ， 更換來(lái)源清楚 、 質(zhì)量合格的動(dòng)物作為新種 ， 重新進(jìn)行品系的繁育 。 這種改變多由于近交系動(dòng)物部分雜合基因尚未純合時(shí)即進(jìn)行了分系 ， 造成了亞系和支系的形成 。 這種情況在經(jīng)同系異體移植試驗(yàn)排除了遺傳污染后需按照亞系和支系重新命名。 在分析監(jiān)測(cè)結(jié)果時(shí) ， 如果僅看到一只動(dòng)物單個(gè)基因標(biāo)記出現(xiàn)雜合型 ， 應(yīng)考慮有否發(fā)生遺傳突變 。 如遺傳突變發(fā)生在親代 ， 則同窩兄妹均應(yīng)為雜合型或分離產(chǎn)生不同的表型 。 在檢查時(shí)如同時(shí)發(fā)現(xiàn)其他基因標(biāo)記的表型與遺傳概貌圖不符 ， 無(wú)論是雜合型還是純合型均應(yīng)考慮發(fā)生了遺傳污染 ， 應(yīng)立即淘汰換種 。 31 第二節(jié) 微生物學(xué)與寄生蟲學(xué)監(jiān)測(cè) 如何控制微生物和寄生蟲 ， 是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化的主要內(nèi)容之一 。 32 一、監(jiān)測(cè)意義 1． 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行微生物 、 病毒與寄生蟲的監(jiān)控 ， 對(duì)保證實(shí)驗(yàn)研究的順利進(jìn)行和工作人員的身體健康具有十分重要的意義 。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病的爆發(fā) ， 除造成動(dòng)物死亡外 ， 還會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行 ， 引起生物制品的污染 ， 對(duì)人類健康產(chǎn)生危害 。 3． 對(duì)引進(jìn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行檢疫 ， 避免病原體入侵原有的動(dòng)物群 。 34 二、監(jiān)測(cè)方法 （一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒學(xué)檢測(cè)方法 1．血清學(xué)檢測(cè) 適用于各級(jí)各類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的經(jīng)常性檢測(cè)和疫情普查。 35 2． 病原學(xué)檢測(cè) 適用于動(dòng)物群中有疾病流行 ， 需要檢出病毒或確認(rèn)病毒存在的情況 。 例如：采用 HA或 HI方法檢查患病動(dòng)物排泄物或組織懸液中的血凝素抗原；采用聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)檢查病毒基因組；采用核酸分子雜交技術(shù)或聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)檢出組織或排泄物中的病毒核酸 。 部分病原菌 ， 如：鼠傷寒沙門菌 、 鼠棒狀桿菌 、 布氏桿菌 、 沙門菌 、 氣管敗血波氏桿菌等 ， 可采取血清學(xué)方法 ， 但仍需結(jié)合分離培養(yǎng)結(jié)果最后做出診斷 。 37 （ 三 ） 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物真菌學(xué)檢測(cè)方法 目前主要采用沙氏培養(yǎng)基分離培養(yǎng) 。不同的真菌具有一定的菌落特點(diǎn) ， 鏡下染色檢查可進(jìn)行種屬鑒定 ， 有時(shí) ， 還需借助于生物化學(xué)反應(yīng)結(jié)果和免疫學(xué)方法進(jìn)行最后診斷 。 39 2． 體內(nèi)寄生蟲 主要檢查蠕蟲和原蟲 ， 可用直接涂片法 (糞便 、 血液 、 臟器 、 腸內(nèi)容物 )、 飽和鹽水漂浮法或沉淀法 、透明膠紙肛門周圍粘取法 、 組織或器官剖面壓印法 、 病變組織切片或壓片法 、 尿液的離心法 (如查鼠膀胱線蟲 )等 。 40 三、監(jiān)測(cè)要求 1． 選定監(jiān)測(cè)項(xiàng)目 任何一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都有許多致病性微生物 、 寄生蟲 ， 結(jié)合具體情況選擇合適的檢測(cè)項(xiàng)目 ， 既達(dá)到保證動(dòng)物質(zhì)量的目的 ， 又可節(jié)省人力物力 。 41 2． 采樣數(shù)量和頻度 檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性 ， 要采取合適的動(dòng)物數(shù)量 。 按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定 ， 動(dòng)物數(shù)量超過(guò) 100只的生產(chǎn)繁殖單元取樣如下：普通級(jí)動(dòng)物不能少于 10只；清潔級(jí)動(dòng)物檢測(cè) 5～ 10只；飼養(yǎng)于小隔離罩內(nèi)的無(wú)菌動(dòng)物和無(wú)特定病原體動(dòng)物隨機(jī)抽檢 2只；飼養(yǎng)于生產(chǎn)繁殖單元的抽檢 5～ 10只 。 一般來(lái)說(shuō) ， 一旦病原體侵入動(dòng)物群體引起感
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