【正文】 5180。CCTGAGTCTACTGTGGAAGGC3180。錄目 3180。 3180。HBS的限制性內(nèi)切酶譜分析目 錄目 HBS的 PCRRFLP分析 錄目 PCRRFLP分析 ?珠蛋白生成障礙性貧血癥基因密碼子 17突變的檢測(cè) DNA/Msp2： bA/bT； bT注：由于 54? bp、 114bp片段及分子量標(biāo)準(zhǔn)中低于 200錄目 錄?珠蛋白生成障礙性貧血癥的反向斑點(diǎn)雜交分析2. 反向斑點(diǎn)雜交目 錄二、血友病（ Hemophilia）n 甲型血友病是由于血漿凝血因子 VIII（FVIII）缺陷造成。目 錄1.I， DraI等內(nèi)切酶（酶切位點(diǎn)位于交換點(diǎn)兩側(cè)）消化，用特異探針進(jìn)行雜交分析，正常人表現(xiàn)為 kb和 16 I型倒位患者表現(xiàn)為 14 kb三種帶型。 錄目 FVIII基因突變的檢測(cè)（ 1）依賴于 FVIII基因內(nèi)或旁側(cè)的多態(tài)性標(biāo)記的連鎖分析（ 2） RFLP連鎖分析（ 3） VNTR分析（ 4）短串聯(lián)重復(fù)序列（ STR）的連鎖分析目 錄三、脆性 X綜合征n 脆性 智力低下基因 1（ FMR1） 5ˊ非翻譯區(qū)遺傳不穩(wěn)定的 (CGG)n島的異常甲基化。8～ 50n 男性和女性攜帶者增多到 52～ 200拷貝，相鄰的 CpGn 男性患者和脆性部位高表達(dá)的女性中，達(dá)到 200～ 1000拷貝，相鄰的 CpG島也被甲基化，稱為全突變（ full mRNA在幾乎所有患者不表達(dá)或只有低表達(dá)，從而出現(xiàn)臨床癥狀。錄目 3． Souhern印跡雜交法4． PCR擴(kuò)增 錄 一、病毒性疾病n 甲型肝炎病毒（ HAV）HAV系 RNA病毒，利用 RTPCR技術(shù)可從糞便中檢測(cè)出甲型肝炎病毒的基因組 RNA。n 乙型肝炎病毒（ HBV）DNA片段；設(shè)計(jì)位于可變區(qū)的引物擴(kuò)增某一亞型 HBVn 丙型肝炎病毒（ HCV） 目 錄目 bp序列，再用探針雜交，靈敏度可達(dá)到 100個(gè)細(xì)菌水平。主要采用 PCR技術(shù)： ① 檢測(cè) HP染色體 DNA特異片段； ② 檢測(cè) HP尿素酶A基因； ③ 用 PCRRFLP鑒別 HP菌株。錄目 n 卡氏肺孢子蟲(chóng)n 衣原體感染目 錄第四節(jié) 腫瘤的基因診斷Gene Diagnosis of Malignant Tumors目 錄一、原癌基因與抑癌基因的檢測(cè) 二、常見(jiàn)腫瘤的基因診斷 乳腺癌 結(jié)腸癌 目 錄一、原癌基因與抑癌基因的檢測(cè)1．原癌基因的檢測(cè)ras最常見(jiàn)的突變是第 1 1 59或第 61位密碼子的點(diǎn)突變。胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌以 Kras突變?yōu)橹?，如?12位密碼子突變，由編碼甘氨酸的 GGT突變?yōu)?TGT、GTT或 GAT，少數(shù)突變?yōu)?GCT。急性淋巴細(xì)胞白血病，慢性淋巴細(xì)胞白血病等以 Nras突變?yōu)橹鳎幻谀蛳到y(tǒng)腫瘤則以 Hras突變?yōu)橹?。錄?PCR核苷酸雜交技術(shù)（如 ASO）： 檢測(cè) ras基因第 12位密碼子點(diǎn)突變。錄目 n p53基因以密碼子第 175位、第 248位、第 249位、第 273位及 在結(jié)直腸癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌，都可見(jiàn)異常的p53基因蛋白。（ 1） PCRSSCP分析技術(shù)（ 3） PCRRFLP分析目 錄（一）乳腺癌1．乳腺癌常見(jiàn)基因變異5% ～ 10% 乳腺癌患者有家族遺傳性。cancerBRAC1突變易致乳腺癌。 70% 的缺失或插入導(dǎo)致編碼序列的框移和翻譯提前終止。突變提高乳腺癌易感性。錄目 錄目 在癌發(fā)展過(guò)程的不同階段發(fā)生不同的基因突變。APC（ adenomatouscoli）是結(jié)腸癌發(fā)生過(guò)程中第一個(gè)突變基因。DCC（ deletioncolorectal抑癌基因 DPC4和MADR2也可能會(huì)因 18q等位基因丟失而失活。DNA修復(fù)基因也與結(jié)腸癌有關(guān)。二、常見(jiàn)腫瘤的基因診斷目 錄（ 1） PCRSSCP法： 對(duì)腺瘤樣息肉病人 APC基因 PCRSSCP技術(shù)進(jìn)行分析。（ 3）蛋白質(zhì)免疫印跡法： 檢測(cè)因基因突變而縮短了的 APC蛋白。2．結(jié)腸癌基因診斷方法第五節(jié) 基因診斷在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用Application of Gene Diagnosis in Forensic Medicine目 錄目 n 串聯(lián)重復(fù)序列散在分布于染色體上。bp長(zhǎng)，稱為小衛(wèi)星 DNA。bp長(zhǎng)，如（ TA） n,一、 DNA指紋與多態(tài)性遺傳標(biāo)記目 錄 repeat， TR）組成， TR的核心序列同源性很高，等位 HVR的長(zhǎng)度由于 TR的重復(fù)次數(shù)不同而有很大的差別，具高度多態(tài)性。錄目 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)（ amplifiedlengthAmpFLP）fingerprinting）。Alec John JeffreysOxford, United Kingdom 目 錄目 錄人類(lèi) DNA指紋圖目 錄二、 DNA指紋與法醫(yī)學(xué)診斷n 個(gè)體識(shí)別和親子鑒定： n 以往在刑事案件的法醫(yī)學(xué)鑒定中應(yīng)用的是血型、血清蛋白型、紅細(xì)胞酶型和 HLA分型，個(gè)體分辨能力不夠，只能排除，不能做到統(tǒng)一認(rèn)證。錄目 錄目 父權(quán)指數(shù)（ PaternityPI值表示爭(zhēng)議父作為親父比隨機(jī)男人作為親父的可能性大多少倍， PI值大于 1表示傾向肯定父子關(guān)系，數(shù)值越大，可能性越大；等于0時(shí)表示排除父子關(guān)系 。錄目 2． DNA指紋圖與親權(quán)鑒定目 錄親權(quán)鑒定與 DNA指紋圖由此圖可推斷出： A和 C是親生女兒； B為妻子和其前夫所生； D為養(yǎng)女。第六節(jié) 基因治療的概念及策略 Concept and Strategy of Gene Therapy目 目 廣義基因治療： ① 外源正?；?qū)氩∽兗?xì)胞，產(chǎn)生正?；虻谋磉_(dá)產(chǎn)物以補(bǔ)充缺失的或失去正常功能的蛋白質(zhì)； ② 采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)抑制細(xì)胞內(nèi)過(guò)度表達(dá)的基因； ③ 將特定的基因?qū)敕遣∽兗?xì)胞，在體內(nèi)表達(dá)特定產(chǎn)物； ④ 向功能異常的細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞）中導(dǎo)入該細(xì)胞中本來(lái)不存在的基因（如自殺基因），利用這些基因的表達(dá)產(chǎn)物達(dá)到治療疾病的目的。錄本節(jié)內(nèi)容提要 一、基因治療的策略二、基因轉(zhuǎn)移技術(shù)三、基因干預(yù)四、基因治療的應(yīng)用研究五、基因治療的前景與問(wèn)題目 錄基因治療分類(lèi)216。cell)基因治療216。錄目 錄 一、基因治療的策略目 replacement） 定義： 指將特定的目的基因?qū)胩囟?xì)胞，通過(guò)定位重組，導(dǎo)入的正?；?，以置換基因組內(nèi)原有的缺陷基因。 對(duì)缺陷基因的缺陷部位進(jìn)行精確的原位修復(fù)，不涉及基因組的任何改變。錄n 定向整合的條件 :轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的載體與基因組DNA具有相同的序列。n 基因同源重組技術(shù)又稱為 基因打靶 (gene基因同源重組技術(shù)目 augmentation） 類(lèi)型 :n 在有缺陷基因的細(xì)胞中導(dǎo)入相應(yīng)的正?；?，而細(xì)胞內(nèi)的缺陷基因并未除去，通過(guò)導(dǎo)入正?；虻谋磉_(dá)產(chǎn)物，補(bǔ)償缺陷基因的功能；n 向靶細(xì)胞中導(dǎo)入靶細(xì)胞本來(lái)不表達(dá)的基因，利用其表達(dá)產(chǎn)物達(dá)到治療疾病的目的。錄（三）基因干預(yù) （ geneinterference） 定義： 采用特定的方式抑制某個(gè)基因的表達(dá)，或者通過(guò)破壞某個(gè)基因的結(jié)構(gòu)而使之不能表達(dá)，以達(dá)到治療疾病的目的。錄n 定義： 將 “自殺 ”基因?qū)胨拗骷?xì)胞中，這種基因編碼的酶能使無(wú)毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性代謝物，誘導(dǎo)靶細(xì)胞產(chǎn)生 “自殺 ”效應(yīng)，從而達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的目的。（四）自殺基因治療 (SuicideTherapy)目 錄?TK/GCVsimplexHSV） Ⅰ 型胸苷激酶（ thymidinetk）基因編碼胸苷激酶，特異性地將無(wú)毒的核苷類(lèi)似物丙氧鳥(niǎo)苷（ ganciclovir,目 “自殺基因 ”導(dǎo)入后，不僅使轉(zhuǎn)導(dǎo)了 “自殺基因 ”的腫瘤細(xì)胞在用藥后被殺死，而且與其相鄰的未轉(zhuǎn)導(dǎo) “自殺基因 ”的腫瘤細(xì)胞也被殺死。2.effect）目 通過(guò)將抗癌免疫增強(qiáng)的細(xì)胞因子或 MHC基因?qū)肽[瘤組織，以增強(qiáng)腫瘤微環(huán)境中的抗癌免疫反應(yīng)。錄二、基因轉(zhuǎn)移技術(shù) 基因治療的兩種途徑載體目的基因in vivoex vivo 靶細(xì)胞目 錄基因轉(zhuǎn)移 (gene目 據(jù)統(tǒng)計(jì)，有 72%的臨床實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和 71%的病例使用了病毒載體，其中用得最多的是反轉(zhuǎn)錄病毒載體 。錄反轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)及生活周期（ 1）反轉(zhuǎn)錄病毒 目 p LTR由 U R和 U5三部分組成。p 含有負(fù)鏈 DNA轉(zhuǎn)錄的引物結(jié)合位點(diǎn) (PBS)和正鏈 DNA轉(zhuǎn)錄的引物結(jié)合位點(diǎn) 。l U3和 U5兩端分別有病毒整合序列 (IS)在 R內(nèi)還有 poly(A)加尾信號(hào)。目 能合成包裝蛋白，用于反轉(zhuǎn)錄病毒載體包裝，但本身卻不能包裝成輔助病毒顆粒。錄目 packaging錄反轉(zhuǎn)錄病毒載體的特點(diǎn) 錄反轉(zhuǎn)錄病毒載體的主要缺點(diǎn)kb以下的外源基因。錄kb)雙鏈無(wú)包膜 DNA病毒。宿主細(xì)胞范圍廣，可感染分裂和非分裂終末分化細(xì)胞，如神經(jīng)元等。目 錄腺病毒的優(yōu)點(diǎn)l 基因?qū)胄矢?，?duì)人類(lèi)安全；l 宿主范圍廣；l 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)與細(xì)胞分裂無(wú)關(guān)；l 重組腺病毒可通過(guò)口服經(jīng)腸道吸收、或噴霧吸入或氣管內(nèi)滴注；l 腺病毒載體