【正文】 脫脂乳粉 100g； 蒸餾水1000mL 化學(xué)合成培養(yǎng)基 檸檬酸培養(yǎng)液： 磷酸氫銨鈉 ； 檸檬酸鈉 3g； 磷酸氫二鉀 1g； 硫酸鎂 ； 蒸餾水 1000mL 複合培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)肉湯 (NB) ： 蛋白腖 10g；牛肉抽取物 3g； 氯化鈉 5g； 蒸餾水 1000mL 培養(yǎng)基種類 ~依形態(tài)分 ? 液體培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基中 無(wú)添加洋菜或明膠 等硬化劑，以利於微生物 的大量繁殖及化學(xué)藥劑加入的直接反應(yīng)。 ? 固體培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基中 添加 ~2%洋菜 ，當(dāng)培養(yǎng)基冷凝後會(huì)變成 固體狀態(tài)，以利於微生物的純化、計(jì)數(shù)及保存。 ? 滋養(yǎng)培養(yǎng)基 (enriched medium)： 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加特殊成分，使難於一般培養(yǎng)基生長(zhǎng)的菌體能生長(zhǎng)。 ? 選擇培養(yǎng)基 (selective medium)： 於培養(yǎng)基中添加特殊物質(zhì)，選擇性的抑制某些種類菌體 生長(zhǎng)，使欲分離培養(yǎng)的菌體藉此篩選出來(lái)。 ? 鑑別培養(yǎng)基 (differential medium)： 培養(yǎng)基中加某種特殊物質(zhì)，用來(lái)區(qū)分微生物對(duì)它利用情形，也藉以鑑定特殊菌體。 配方 Lactose broth BGLB broth EMB agar 蛋白腖 (Peptone) 乳糖 (Lactose) 牛肉抽出物 (Beef extract) 蛋白腖 乳糖 膽粉 (Oxgall powder) 煌綠 (Brilliant green) 蛋白腖 乳糖 伊紅 (Eosin Y) 甲烯藍(lán) (Methylene blue) 磷酸氫二鉀 (K2HPO4) 洋菜 微生物的培養(yǎng)法 ?液態(tài)培養(yǎng) ：將菌株接種在液體培養(yǎng)基中。 ?穿刺培養(yǎng) ：將菌株以接種針穿刺接種至固體培養(yǎng)基中。 ?帄板培養(yǎng) ?劃線培養(yǎng) ：利用接種環(huán)在培養(yǎng)皿帄盤上之固態(tài)培養(yǎng)基 表面逐次劃直線，每次起始點(diǎn)均含蓋上次 直線之末段，使達(dá)到逐漸稀釋之效應(yīng)。 ?混合倒皿培養(yǎng) ：將預(yù)先稀釋好的菌液加在含有溶融洋 菜培養(yǎng)基的試管中，經(jīng)充分混合後， 倒入培養(yǎng)皿中。 g= t = t n (log Nlog N0) g:世代時(shí)間 t: 某一培養(yǎng)時(shí)間 n:經(jīng)過(guò) n代繁殖 N:開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)之菌數(shù) N0:子代細(xì)胞總數(shù) N=N02n ? 2n=N/N0 ? log2n=log(N/N0) ? =logNlogN0 ? n=(logNlogN0)/=(logNlogN0) 微生物之生長(zhǎng)測(cè)定 ?計(jì)數(shù)測(cè)定： ?帄盤測(cè)定： 在培養(yǎng)基中培養(yǎng)之後，測(cè)定樣品中的活菌數(shù)。 (計(jì)活菌 ) ?特殊玻片顯微鏡測(cè)定： 用血球計(jì)數(shù)器檢視之。 (計(jì)活菌 ) 以濾膜過(guò)濾菌液，乾燥後計(jì)數(shù)。 一般細(xì)菌為例： 1012~1013g/個(gè)。 利用濁度計(jì)：菌數(shù)越多濁度越高，菌液透光率越低， 透光率與細(xì)菌數(shù)成反比。 ?氮量測(cè)定： 測(cè)定總氮量，以 推估 粗蛋白質(zhì)量並換算成菌體量。 (計(jì)活菌 ) 菌體內(nèi)含有大量蛋白質(zhì)，而氮是組成胺基酸 必需成分 。 一般生物的蛋白質(zhì)中約含 16%的氮 ∴ 蛋白質(zhì)量 16%=氮量 總氮量 247。單一細(xì)胞蛋白質(zhì)量＝細(xì)菌數(shù) 例： 今測(cè)得 E. coli 細(xì)胞之總氮量為 單一 E. coli之細(xì)胞蛋白質(zhì)量為 1ng 則有 247。1ng/個(gè) ＝ 102g247。 如食品上測(cè)牛奶內(nèi)是否有菌可採(cǎi)用此法。 例：利用溫度的改變： 大腸桿菌在 37℃ 下培養(yǎng)，可進(jìn)行正常的分裂，但 各細(xì)菌之生長(zhǎng)速率不同，當(dāng)改變培養(yǎng)溫度為 25℃ 時(shí)，細(xì)菌分裂會(huì)受影響，此時(shí)所有細(xì)胞全部暫停 分裂，經(jīng)一段時(shí)間後再移至 37℃ ，則所有細(xì)胞皆 同時(shí)分裂，達(dá)同步生長(zhǎng)目的。 經(jīng)幾代的培養(yǎng)之後，菌中之生長(zhǎng)速率又會(huì)不同。 實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方法 ?溼熱滅菌法 ?乾熱滅菌法 ?火焰法 ?過(guò)濾除菌法 ?紫外線殺菌法 ?酒精 ?超音波 (或 +清潔劑 ) ?滅菌 (sterilization)：徹底的殺菌方法。 ?消毒 (disinfection) ：消毒劑 利用物理或化學(xué)方式 殺死所有病原性微生物 ，主要是破 壞正在生長(zhǎng)之微生物營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，孢子型則仍存在。 ?清潔 (sanitizing) ：清潔劑 以化學(xué)藥劑處理物品，降低其所帶之微生物含量。 ?殺菌 (bactericidal) ：殺菌劑 利用物理化學(xué)方法殺死微生物的作用。 影響作用之因素 ?作用對(duì)象： 不同微生物對(duì)不同抗菌劑有不同反應(yīng)，所以必須先考慮要除去的 微生物種類，才能決定最適當(dāng)之方法。 ?溫度： 因溫度會(huì)影響化學(xué)反應(yīng)之進(jìn)行，提高溫度可加強(qiáng)殺菌效果。 ?pH值： 除影響抗菌劑本身之效能外，也會(huì)加強(qiáng)或降低對(duì)菌體之效能。 微生物生長(zhǎng)的控制 類別 方法 物理方法 溫度 過(guò)濾 放射線 滲透壓 乾燥 超音波 化學(xué)方法 防腐劑及殺菌劑 重金屬 防腐劑 抗生素 溫度 ~高溫 ?乾熱殺菌法： 熱傳導(dǎo)方式：以空氣為介質(zhì) 作用原理：利用高溫使微生物體內(nèi)的水分蒸發(fā)及 蛋白質(zhì)因高溫產(chǎn)生氧化變性而達(dá)滅菌 作用。 ?火焰法： 利用酒精燈或本生燈之火焰除去微生物，達(dá)完 全滅菌之作用。 ?溼熱殺菌法 熱傳導(dǎo)方式：以水為介質(zhì) 作用原理：利用產(chǎn)生之高溫及水中的氧氣與胺基酸 裡的氫氣產(chǎn)生氫鍵以破壞蛋白質(zhì)，使蛋 白質(zhì)變性而達(dá)滅菌作用。 條件： 121℃ 、 、 20~30mins。 ?開(kāi)放蒸氣 (steam)： 蒸汽溫度為攝氏 95~105度，因此滅菌的時(shí)間需 6~8小時(shí)才 能達(dá)到效果。 ?間歇滅菌法 (tyndallization)： 通常溫度不超過(guò) 100℃ ，每日一次，每次加熱時(shí)間 30分 鐘，每次滅菌後保溫在 25~30℃ ， 促使殘留的孢子體萌 發(fā)成營(yíng)養(yǎng)體。 ?巴斯德滅菌法 (pasteurization)： 由巴斯德所提出，以不造成物質(zhì)變性之低溫，殺死微 生物的營(yíng)養(yǎng)體，不過(guò)不能達(dá)完全滅菌之目的。 乾熱 ： 玻璃製品、金屬製品及耐乾熱的器材 ? 醫(yī)院中現(xiàn)在正須要剪刀、鑷子來(lái)開(kāi)刀，但剪刀、鑷子須先滅菌，則拿一個(gè)鐵盤放入剪刀、鑷子等，再倒入酒精用火燒 一燒，即達(dá)滅菌！ ? 例如 :微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)少一個(gè)培養(yǎng)皿 ,則拿一個(gè)洗淨(jìng)的培養(yǎng)皿倒入些酒精後 ,用火燒一燒 ,即可將之滅菌了！ 濕熱 ? 煮沸 ： 沒(méi)有遭受特別污染的製品（奶瓶消毒 ) ? 巴氏消毒法 ： 飲料、酒、牛奶 ? 間歇消毒法： 可能受到會(huì)產(chǎn)生內(nèi)生胞子 污染之物品 如花生麵筋罐頭 ? 高溫高壓：對(duì)熱不敏感的有機(jī)物如各種培養(yǎng)基及不耐乾熱的塑膠製品等。 利用低溫使微生物之代謝與生長(zhǎng)變慢， 此只能抑制微生物活性，不會(huì)完全死亡。 ?冷凍： 80℃ 、 196℃ (液態(tài)氮 ) 可使微生物之代謝完全停止； 可用於庫(kù)存微生物、組織細(xì)胞。 放射線 利用放射線容易被細(xì)胞內(nèi)核酸所吸收，造成 DNA 結(jié)構(gòu)之改變，產(chǎn)生突變甚至引起斷裂現(xiàn)象，以達(dá) 控制微生物生長(zhǎng)目的。 紅外線： 800~1000nm；可被光合細(xì)菌作為能源。 紫外光： 136~400nm；有殺菌作用。 ?紫外光： 波長(zhǎng)介於 240~280nm之紫外線，容易為 DNA所吸收而 造成其結(jié)構(gòu)之改變，因而影響 DNA之複製，對(duì)微生物 之生長(zhǎng)有嚴(yán)重影響。 ＊細(xì)菌具有特殊之修復(fù)系統(tǒng)，例如 可利用光分解酵素 (photolysase)將紫外光所造成之 DNA受損 (形成二聚體 (dimer))修復(fù)而回復(fù)原狀，所以需選用適當(dāng)波長(zhǎng)、劑量 和足夠作用時(shí)間，避免修復(fù)現(xiàn)象發(fā)生。 ? χ射線、 γ射線： 此帶有高能量之離子化射線作用使細(xì)胞 內(nèi)之水分子游 離出電子，形成離子 (如氧分