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2024-09-15 17:24本頁面
【正文】 body IgG structure 抗原結(jié)合片段 恒定區(qū)片段 V H V L C L C H1 C H2 C H3 Antibody IgG structure 抗體可變區(qū)片段 V H V L C L C H1 C H2 C H3 Fv Fv V H V L scFv V H V L Single Chain Fragment variable 抗體 —— 生物體最奇妙的分子 ● 無限的多樣性（ diversity) ● 功能與結(jié)構(gòu)的雙重性 可變區(qū) —— 抗原結(jié)合 恒定區(qū) —— 生物學效應(yīng)功能 ●分泌型和膜型表達 與抗體有關(guān)的諾貝爾獎獲得者 1901 von Bering 血清治療 1908 Ehrlich amp。 Metchnikoff 抗體生成、吞噬 1972 Edelman amp。 Jerne 單克隆抗體 1987 Tonegawa Ig基因結(jié)構(gòu) 本節(jié)課主要內(nèi)容 一、細胞工程抗體和基因工程抗體 二、治療性單抗研制進展 一、細胞工程抗體和基因工程抗體 ? 抗體研究領(lǐng)域的進展大致可分為三階段： ? 以 1890年 Behring發(fā)現(xiàn)白喉毒素免疫血清（白喉抗毒素）為代表，其特點是用抗原免疫動物來獲得 多克隆抗體 。 ? 以 1994年 Winter用 基因工程 方法制備抗體為代表 。 免疫動物 ? 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏 B淋巴細胞的過程。 HAT選擇性培養(yǎng)的原理 ? 融合后產(chǎn)生脾脾、脾瘤、瘤瘤融合細胞和未融合的骨髓瘤細胞。 ? B淋巴細胞無法在體外繁殖傳代。 ? 在最適培養(yǎng)條件下，大約 105個脾細胞才能形成一個雜交瘤細胞，單個或少數(shù)的雜交瘤細胞多半不易存活，通常加入飼養(yǎng)細胞（小鼠腹腔巨噬細胞、脾細胞和胸腺細胞） ? 飼養(yǎng)細胞釋放某些生長刺激因子，并能滿足雜交瘤細胞對細胞密度的依賴性。 篩選陽性克隆與克隆化 ? 抗體產(chǎn)生細胞只占所有脾細胞的 5%左右，所以融合后 89天對每孔的培養(yǎng)上清液進行抗體活性的篩選工作，篩選出產(chǎn)生抗體的陽性克隆。 ? 盡早克隆化。 單克隆抗體的大量制備 ? 體外培養(yǎng)法 – 在培養(yǎng)液中添加 10%20%小牛血清，由于培養(yǎng)液中含有血清成分，總蛋白量可達 100mg/ml,純化困難。 – 無血清培養(yǎng)法：利用白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、乙醇胺等混合物代替小牛血清。 – 用懸浮培養(yǎng)方式代替靜止培養(yǎng)法，微載體懸浮培養(yǎng) ? 多采用 動物體內(nèi)誘生法 – 雜交瘤細胞的兩種親本細胞都來自 BALB/c小鼠，故選用 BALB/c小鼠制備單克隆抗體。 – 操作簡便，經(jīng)濟，所得單克隆抗體量多且效價高，可有效保存雜交瘤細胞株。 單克隆抗體的純化 ? 在純化之前必須明確其 Ig類和亞類， Ig類和亞類不同，純化方法也不同； ? 根據(jù)用途不同選擇不同的純化方法； ? 如用于體外診斷試劑的 IgG類抗體應(yīng)采用沉淀處理結(jié)合親和層析親和層析的方法。 ? 動物體內(nèi)誘生法制備的單克隆抗體的純化方法： 1 澄清和沉淀處理 2 分離 凝膠過濾 陰離子交換層析 親和層析 ２、單克隆抗體在醫(yī)學上的應(yīng)用 A、用作診斷試劑 1. 檢測淋巴細胞表面分子，區(qū)分不同分化 階段的淋巴細胞，鑒別淋巴細胞。 3. 用于腫瘤的診斷和分型 4. 激素類單抗用于測定體內(nèi)激素含量，判 斷內(nèi)分泌的功能狀態(tài) B、用作研究工具 1. 純化抗原 2. 分析和探查抗原結(jié)構(gòu) 3. 分析抗原決定簇分子的功能 C、用于疾病的治療 1. 抗細胞表面分子單抗，用于移植排斥反應(yīng)的防治 2. 抗細胞因子單抗用于自身免疫性疾病的治療 3. 抗腫瘤單抗用于腫瘤的導向治療 單克隆抗體用于免疫治療存在的問題 1) 單克隆抗體的特異性 由于腫瘤特異性抗原較少，缺乏對腫瘤有嚴格特異性的單抗，對正常組織有交叉反應(yīng)
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