化驗(yàn)技術(shù)協(xié)會(huì)第八期培訓(xùn)資料-在線瀏覽
2024-08-23 21:48本頁面
【正文】 下，抽濾已濾清的水約500ml，計(jì)算出每lmin的濾速。細(xì)菌過濾法 常用的細(xì)菌為粘質(zhì)沙雷氏菌，將該菌的新鮮營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，177。℃培養(yǎng)24小時(shí),應(yīng)無菌生長(zhǎng)。 3 菌種及菌液制備 菌種的傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代；冷凍干燥的原始菌種開啟后轉(zhuǎn)種，為第一代)。并在相應(yīng)的菌種接收登記表上記錄所有關(guān)于菌種的信息?！妫?8～24小時(shí)；℃177。)渾濁說明菌種復(fù)活生長(zhǎng)，在應(yīng)用前，還應(yīng)確認(rèn)菌種的純度和特性。培養(yǎng)后觀察是否具有典型的菌落形態(tài)，然后挑取單一的純菌落，進(jìn)行革蘭染色、鏡檢，觀察其染色特性及菌形。對(duì)已通過確認(rèn)鑒定后的菌種可以使用或傳代保藏。常用的有甘油冷凍管保藏法、斜面低溫保藏法等，此類方法簡(jiǎn)單易行。斜面低溫保藏法 將工作用菌種的典型菌落接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待菌生長(zhǎng)充分以后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種管用牛皮紙包好，轉(zhuǎn)移至4℃左右冰箱保存，如菌種保藏管的塞子是橡膠塞，并采用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，則可以保存時(shí)間較長(zhǎng)。 菌種(1)金黃色葡萄球菌(Staphylococcu aureus)[CMCC(B)26003](2)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501](3)大腸埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102](4)銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104](5)生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941](6)白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001](7)黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003] 菌液制備制備的菌液，一般當(dāng)日使用?！媾囵B(yǎng)18～24小時(shí)；白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，℃177。將黑曲霉菌斜面的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，℃177。加入3～5ml ％無菌氯化鈉溶液，用玻棒或白金餌輕輕振搖將孢子洗脫。以上菌液在供試驗(yàn)的同時(shí)，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌用營養(yǎng)瓊脂，白色念球菌和黑曲霉用改良馬丁培養(yǎng)基注皿(1m1)或平板涂布()，按規(guī)定條件培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)。 培養(yǎng)基的pH值應(yīng)符合規(guī)定，否則必須校正。2℃，調(diào)節(jié)pH值可用無菌的lmol／L(1N)氫氧化鈉或10％碳酸鈉溶液、lmol／L鹽酸溶液或15%冰醋酸溶液。 新鮮配制的培養(yǎng)基，應(yīng)按中國藥典規(guī)定的處方，對(duì)培養(yǎng)基的原材料要進(jìn)行挑選，化學(xué)藥品均需用CP試劑規(guī)格。用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，～，煮沸，用棉(紙)漿減壓抽濾或以脫脂棉，濾紙等濾材過濾，使培養(yǎng)基澄清。分裝，裝量不宜超過容器的2／3，以免滅菌時(shí)溢出。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的顏色不得超過培養(yǎng)基深度的l／5，否則，須經(jīng)100℃水浴或流通蒸汽加熱至粉紅色消失(不超過20分鐘)，迅速冷卻。 滅菌應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序進(jìn)行。固體培養(yǎng)基使用前的融化，不宜使用蒸汽滅菌柜融化瓊脂培養(yǎng)基，宜選用沸水浴融化培養(yǎng)基。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃避光的環(huán)境，有條件置冰箱4℃～8℃冷藏儲(chǔ)存較好。 培養(yǎng)基的裝量 對(duì)于采用直接接種法檢查的液體樣品，培養(yǎng)基的裝量與供試品的裝量相關(guān)，供試品的裝量小于20ml的樣品，培養(yǎng)基裝量15ml；供試品的裝量大于或等于20ml小于50ml的樣品，培養(yǎng)基裝量40ml；供試品的裝量大于或等于50ml小于100ml的樣品，培養(yǎng)基裝量80ml； 對(duì)于采用直接接種法檢查的固體樣品(含藥品及外科用輔料棉花及紗布)，培養(yǎng)基的裝量均為100ml；對(duì)于縫合線、一次性醫(yī)用材料及醫(yī)療器具，如果醫(yī)療器具體積過大，培養(yǎng)基的裝量可在2000ml以上，以將其完全浸沒為準(zhǔn)。 培養(yǎng)基的適用性檢查培養(yǎng)基的檢查包括無菌檢查和靈敏度檢查；符合規(guī)定者方可用于供試品的無菌檢查。培養(yǎng)基的靈敏度檢查應(yīng)對(duì)購進(jìn)的每個(gè)批號(hào)的脫水培養(yǎng)基進(jìn)行靈敏度檢查，檢查合格后方可使用，但當(dāng)培養(yǎng)基的配制方法和滅菌程序發(fā)生變更時(shí)，應(yīng)再次對(duì)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行檢查。 培養(yǎng)基靈敏度檢查的操作及結(jié)果判定取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，每支接種菌量為lml(含菌小于100cfu)，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種白色念珠菌、黑曲霉各2支，每支接種菌量為lml(含菌小于100cfu)，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5天，逐日觀察結(jié)果。對(duì)于配制后的選擇性培養(yǎng)基的靈敏度檢查試驗(yàn)同上。當(dāng)建立藥品的無菌檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)供試品在該實(shí)驗(yàn)條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計(jì)。針對(duì)藥品的無菌檢查試驗(yàn)，在確定產(chǎn)品的無菌檢查試驗(yàn)方法時(shí)或建立新的檢查方法時(shí)，或當(dāng)試驗(yàn)條件(包括培養(yǎng)條件)發(fā)生變更時(shí)，都必須要對(duì)新的或變更后的檢驗(yàn)方法加以驗(yàn)證，以確認(rèn)供試品在該實(shí)驗(yàn)條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計(jì)。驗(yàn)證時(shí)，按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定及下列
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1