【正文】 精杯（樣品杯）100/case354013Falcon 1ml移液管1000/case357521Falcon 2ml移液管1000/case357507Falcon 10ml移液管200/case357551Falcon四孔板100/case353654NUNC四孔板120/case176740SIGMA巴氏吸管25/caseS6143德國HIGENBERG吸管26/caseParafilm封口膜1/case1337416Millipore針頭濾器加藤冷凍葉片10個(gè)/包 玻璃化冷凍載桿冷凍用鋁支架MTG16965/6000冷凍套管MTG16912/0133PALL氣瓶濾器 4251HUMAGEN injection針10/盒MIC3530HUMAGEN holding 針10/盒MPHMED30COOK ICSI 針10/盒COOK holding 針10/盒BD 1ml注射器100/case300771三、 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急預(yù)案(一) 實(shí)驗(yàn)室火、電應(yīng)急預(yù)案實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)配置滅火器。(二) 設(shè)備緊急故障1. CO2培養(yǎng)箱：至少三臺(tái)備用，每日監(jiān)測(cè)，一旦出現(xiàn)故障，立即報(bào)修，并暫時(shí)以正常運(yùn)行的培養(yǎng)箱替代故障培養(yǎng)箱。3. 顯微鏡：準(zhǔn)備燈泡與保險(xiǎn)絲的備件，出現(xiàn)故障時(shí)及時(shí)更換。4. 液氮罐：應(yīng)始終備有狀態(tài)良好的備用液氮罐。5. CO2鋼瓶：定期檢測(cè)氣壓，及時(shí)更換。6. 冰箱：每日監(jiān)測(cè)，一旦出現(xiàn)故障，立即報(bào)修，并立即轉(zhuǎn)移冰箱內(nèi)物品。(四) 一次性耗材按常規(guī)進(jìn)行質(zhì)控，一旦出現(xiàn)異常，立即更換批號(hào)。2. 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員應(yīng)在衛(wèi)生部批準(zhǔn)的人類輔助生殖技術(shù)培訓(xùn)基地進(jìn)修至少3個(gè)月。4. 實(shí)踐練習(xí)：練習(xí)拉管、裝針、模擬拾卵、吹打去除顆粒細(xì)胞、少弱精子的分離處理。5. 獨(dú)立工作：在本中心上級(jí)技師督導(dǎo)下完成新人培訓(xùn)計(jì)劃，上級(jí)技師考核達(dá)標(biāo)，方可獨(dú)立工作。（2） 精液需經(jīng)手淫法收集到一次性無菌無毒的干燥容器內(nèi)，強(qiáng)調(diào)樣本收集必須完整，確認(rèn)是否取精困難，并告訴患者如何運(yùn)送精液標(biāo)本。（4） 待患者取好精液后，護(hù)士與患者丈夫當(dāng)面留取精斑樣本于基因卡上，并填好相關(guān)信息，患者丈夫按指模并在《接受助孕夫婦取精認(rèn)證書》簽名確認(rèn)后，護(hù)士把標(biāo)本、基因卡及《接受助孕夫婦取精認(rèn)證書》交給實(shí)驗(yàn)室人員。（6） 中心任何工作人員發(fā)現(xiàn)患者身份可疑，必須停止接收，重新核實(shí)患者身份，不能同時(shí)接收2份或以上標(biāo)本，如懷疑標(biāo)本混亂，必須停止接收。（2） 給患者以明確的書面或口頭形式的有關(guān)精液樣本采集和轉(zhuǎn)運(yùn)指導(dǎo)說明，應(yīng)強(qiáng)調(diào)采集樣本必須完整，（3） 將已標(biāo)記患者姓名和病歷號(hào)的容器交給患者，應(yīng)在采集后1小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。3. 用避孕套采集樣本（1） 對(duì)于通過手淫法采集精液困難者，則采用特制的避孕套通過性交法獲取精液。精液標(biāo)本不能暴露在過高或過低的溫度中，運(yùn)送途中樣本應(yīng)該保持在20℃~37℃的環(huán)境中。（2） 精液液化延遲的處理，如果60分鐘內(nèi)精液仍未液化，加入等量的含有蛋白的GIVF再機(jī)械吹打以幫助液化，至精液完全液化再進(jìn)行常規(guī)分析和處理。（2） 如有紅細(xì)胞，精液可呈現(xiàn)紅褐色，病人如有黃疸或服用某些維生素，精液可呈現(xiàn)黃色。（2） 觀察精液的粘液絲，精子的凝集及非精子細(xì)胞（包括上皮細(xì)胞，圓形細(xì)胞及斷裂的精子頭或尾部）（3） 評(píng)估精子的密度（4） 評(píng)估精子的活力和活率（WHO第5版SOP）(三) 精液處理操作常規(guī)1. 精液的參數(shù)和來源決定應(yīng)該選擇何種精子制備方法精子特征處理方法射出精液濃度≥5106/ml且PR精子≥15%雙層梯度離心+洗滌后上游法1106/ml≤濃度≤5106/ml濃度≥5106/ml且PR精子≤15%雙層梯度離心法附睪取出精，精子數(shù)≥1106/ml且PR精子≥15%微量梯度離心法射出精液濃度＜1106/ml附睪取出精＜1106/ml睪丸精子標(biāo)本直接離心洗滌法2. 密度梯度法參數(shù)可以根據(jù)不同標(biāo)本的特征來修改是方法發(fā)到最優(yōu)化，如：減少梯度體液體體積即減少精子需要移動(dòng)的距離從而可以提高獲得正常精子的數(shù)量；對(duì)于高粘度的標(biāo)本，可以增加離心和和離心時(shí)間。準(zhǔn)備90%密度梯度離心液、45%密度梯度離心液各1ml，使用前配好并在1小時(shí)內(nèi)使用。4. 根據(jù)選擇的方法，準(zhǔn)備試劑和耗材進(jìn)行精液樣本處理。（2） %密度梯度離心液于45%密度梯度離心液底部，保持兩種液體的界面。（4） 去上清，將其加入3ml GIVF Plus中吹打混勻。（6） 棄上清。置37℃、6% CO2培養(yǎng)箱待用。（2） 去上清，打散混勻。（4） 取上層液體，顯微鏡下觀察并記錄處理后的精子濃度、活力，松開蓋子，置37℃、6% CO2培養(yǎng)箱待用。%密度梯度離心液于45%密度梯度離心液底部，保持兩種液體的界面。加精液時(shí)應(yīng)慢慢沿著管壁滴入，精液避免與梯度離心液混合，和梯度液之間要有明顯分層。（4） 去上層液體，加入適量GIVF Plus重懸沉淀，顯微鏡下觀察并記錄處理后的精子濃度、活力，松開蓋子，置37℃、6% CO2培養(yǎng)箱待用。（2） 以1：2（精液：培養(yǎng)液）的體積比例，稀釋精液標(biāo)本。（4） 300g，離心10分鐘。（6） 把精子混懸液分散在1ml的培養(yǎng)液中。（8） 再次棄去上層液體。（10） 顯微鏡下觀察并記錄處理后的精子濃度、活力，松開蓋子，置37℃、6% CO2培養(yǎng)箱待用。1. 試劑和耗材準(zhǔn)備 QUEENS’精液冷凍保護(hù)劑復(fù)溫至室溫，精液冷凍支架，巴斯德吸管在火焰上滅菌，再把吸管尖燒成圓鈍，冷卻后待用；2. 步驟（1） 患者按照精液樣本的采集方法留取精液后，置37℃培養(yǎng)箱中液化。（3） 將精液加入試管中，按照1：1的比例緩慢加入復(fù)溫的冷凍保護(hù)劑，邊加邊混勻，充分混勻精液與冷凍保護(hù)劑。（5） 將冷凍支架放置在距離液氮面15cm的液氮蒸氣中，保持10~20分鐘。（7） 將精液冷凍患者的信息，精液分析結(jié)果，及冷凍位置及編號(hào)詳細(xì)記錄于精液冷凍登記本。（2） 將精液標(biāo)本放置于提前加熱的37攝氏度水浴鍋中15分鐘左右。（4） 根據(jù)復(fù)蘇后精子的活動(dòng)力和精子密度，選擇相應(yīng)的處理方法。（六）逆行射精病人的尿液處理操作常規(guī)1. 一些患者在射精過程中精子會(huì)逆行到膀胱里，從而導(dǎo)致了無精子癥或者沒有明顯射精現(xiàn)象。當(dāng)藥物治療不能達(dá)到目的時(shí)，有必要從尿液中提取精子。常用劑量是每天4次，每次4片（1g/片）。3. 在取卵的當(dāng)天早上，患者應(yīng)該在起床排空尿后，在取精的前23小時(shí)，再服用小蘇打片2片（1g/片）喝5001000ml水，如此能夠最大限度降低尿液的滲透壓。5. 用手淫的方法往精液杯子內(nèi)射精。精液和尿液樣本都需要進(jìn)行分析。7. 離心后的逆行射精樣本若有精子，按照《射出精液處理操作規(guī)程》進(jìn)行。準(zhǔn)備90%密度梯度離心液、45%密度梯度離心液各1ml，使用前配好并在1小時(shí)內(nèi)使用。3. 把巴斯德吸管在酒精燈上滅菌，再把吸管尖燒成圓鈍，冷卻后待用，并連同15ml錐形離心管、5ml圓底試管一起標(biāo)上患者的姓名。5. 附睪穿刺手術(shù)中，實(shí)驗(yàn)室人員用移液器吸取少量送檢的附睪抽吸液涂于無菌Falcon3001培養(yǎng)皿，在顯微鏡下觀察是否有精子；如發(fā)現(xiàn)有活精子，精子數(shù)目足夠ICSI，通知男科醫(yī)生結(jié)束手術(shù)；如未見足量精子，重復(fù)上述操作。7. 精子數(shù)目≥1106，PR精子≥15%的附睪穿刺液，可以用微量梯度離心法進(jìn)行處理。9. 完成相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室記錄和病歷。2. 術(shù)前，為臨床醫(yī)生準(zhǔn)備2個(gè)加3ml GIVF Plus 的Falcon3001皿，2個(gè)1ml的注射器。4. 用無菌巴斯德吸管在火焰上滅菌，再把吸管尖燒成圓燉，冷卻后待用，并連同15ml、5ml的圓底試管標(biāo)上患者的姓名。準(zhǔn)備兩個(gè)1ml的注射器和兩個(gè)小皿，加入2ml的GIVF Plus。用平衡好的GIVF Plus至少洗滌一次后，將曲細(xì)精管移在另一有GIVF Plus的Falcon3001皿中，在體視鏡下，用兩個(gè)注射器針頭，劃開曲細(xì)精管，在倒置顯微鏡下觀察是否有精子。7. 將有精子標(biāo)本的Falcon3001皿置室溫培養(yǎng)箱孵育2h。9. 完成相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室記錄和病歷。2. 卵泡沖洗培養(yǎng)液（GMOPSTM）：取GMOPSTM10ml放入圓底試管（Falcon 2001）中，加入肝素300IU/100ml，緊蓋后置37℃培養(yǎng)箱中平衡過夜，備用。4. 洗卵液的準(zhǔn)備：吸取3mlGIVF Plus培養(yǎng)基放入圓底試管（Falcon 2001）中，每個(gè)患者準(zhǔn)備2管，置37℃、6% CO2培養(yǎng)箱平衡。6. 如為ICSI授精方式，準(zhǔn)備卵裂液培養(yǎng)皿：用G1 Plus做成10個(gè)微滴，每滴25ml，每個(gè)患者準(zhǔn)備數(shù)目參照四孔板數(shù)，置于37℃、6% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)平衡。2. 檢查實(shí)驗(yàn)室記錄單上患者的姓名，并與患者和臨床醫(yī)生當(dāng)面核對(duì)，確保無誤。4. 收集在試管內(nèi)的卵泡液倒入Falcon 3003培養(yǎng)皿內(nèi)，形成一薄層液體，輕輕振蕩，迅速掃描卵冠丘復(fù)合物（OCCC）的存在，用巴斯德吸管吸起后在解剖顯微鏡下確認(rèn)。在體視鏡下（2050倍）觀察，確診粘液團(tuán)內(nèi)是否有卵母細(xì)胞存在，如有OCCC附于血凝塊上，可