蠟樣芽孢桿菌突變體關(guān)于分泌淀粉酶的研究畢業(yè)論文-在線瀏覽
2024-08-08 21:08本頁面
【正文】 注和致謝的地方外，不包含其他人或組織已經(jīng)發(fā)表或公布過的研究成果，也不包含我為獲得 及其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或?qū)W歷而使用過的材料。作 者 簽 名： 日 期： 指導(dǎo)教師簽名： 日 期： 使用授權(quán)說明本人完全了解 大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的規(guī)定，即：按照學(xué)校要求提交畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)校可以采用影印、縮印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；在不以贏利為目的前提下，學(xué)?？梢怨颊撐牡牟糠只蛉?jī)?nèi)容。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在固體淀粉培養(yǎng)基、30℃、24h培養(yǎng)的條件下，突變體338號(hào)菌產(chǎn)生淀粉酶的能力遠(yuǎn)大于對(duì)照組，突變體594號(hào)菌產(chǎn)生淀粉酶的能力遠(yuǎn)小于對(duì)照組。 關(guān)鍵詞：盧戈氏碘液染色法 轉(zhuǎn)座 蠟樣芽胞桿菌09 1 前言生物防治包括以蟲治蟲和以菌治蟲。是人類依靠科技進(jìn)步同病蟲草害做斗爭(zhēng)的重要措施之一。它是利用昆蟲的病原微生物殺死害蟲。 生物防治的意義長(zhǎng)期以來，主要通過化學(xué)農(nóng)藥來防治植物病害，雖然這種方法能夠較快地防治疾病，但是也引起了植物病原抗藥性、農(nóng)藥殘留等問題，造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染和生態(tài)破壞。當(dāng)前制約生防菌利用的關(guān)鍵因素是抑菌活性不夠強(qiáng)，生防菌在自然環(huán)境中定殖能力差，形不成優(yōu)勢(shì)生態(tài)菌群來阻止病原菌的侵染。 增強(qiáng)宿主競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)的作用競(jìng)爭(zhēng)作用是內(nèi)生芽孢桿菌在寄主體內(nèi)發(fā)揮作用的重要機(jī)制之一，主要通過內(nèi)生菌與病原菌相互競(jìng)爭(zhēng)位點(diǎn)來奪取營養(yǎng)物質(zhì)，從而抑制植物病害的發(fā)生。研究表明，芽孢桿菌進(jìn)入植物體內(nèi)的途徑和方式與病原菌基本相似[1]，進(jìn)入寄主體內(nèi)以后，芽孢桿菌會(huì)優(yōu)先占據(jù)病原菌的入侵點(diǎn)，與病原菌爭(zhēng)奪營養(yǎng)，可有效降低該病原菌及其毒素的積累。芽孢桿菌能夠分泌多種抗真菌和細(xì)菌作用的拮抗物質(zhì)，它們對(duì)病原菌具有直接的抑制作用。關(guān)于抑菌機(jī)制各國學(xué)者有不同的看法，有待深入研究。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生芽孢桿菌能產(chǎn)生或誘導(dǎo)植物產(chǎn)生生長(zhǎng)素 (IAA)、赤霉素 (GA3)、玉米素 (ZR4) 等，這些生長(zhǎng)激素能促進(jìn)植物生長(zhǎng)。此外，一些菌株能合成嗜鐵素、有機(jī)酸等物質(zhì)，促進(jìn)寄主植物對(duì)氮、磷等營養(yǎng)元素的吸收。 幫助宿主誘導(dǎo)植物抗性的作用 芽孢桿菌能夠誘導(dǎo)寄主植物產(chǎn)生一些物理結(jié)構(gòu)上的抗性（例如形成生物膜等形式），從而限制病原菌進(jìn)一步侵入。在病菌企圖侵入部位大量沉積木質(zhì)和酚類物質(zhì)，使這些部位的細(xì)胞胞壁得到加厚，有效阻止了病菌的侵入。蠟樣芽孢桿菌便能分泌超氧化物歧化酶 (SOD)，使植物產(chǎn)生對(duì)病原菌的抗病性。關(guān)于內(nèi)生菌對(duì)病原菌的抑制作用、增強(qiáng)宿主植物抗逆性作用機(jī)制的研究報(bào)導(dǎo)較少，多為推論性或者是間接性的[6]；對(duì)于內(nèi)生菌在植物體內(nèi)定植規(guī)律的研究尚處于探索階段，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，熒光標(biāo)記技術(shù)、電鏡免疫膠體金技術(shù)、酶聯(lián)免疫反應(yīng)技術(shù)和基因標(biāo)記等技術(shù)被應(yīng)用于內(nèi)生菌的定殖規(guī)律研究[710]，但由于宿主植物生活環(huán)境多樣性以及內(nèi)生菌與宿主植物關(guān)系的復(fù)雜性，加之植物內(nèi)生菌起源演化的問題尚無定論，目前對(duì)于內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)入植物的途徑、在植株體內(nèi)的定殖傳導(dǎo)方式、內(nèi)生細(xì)菌與寄主植物的互作用、生物學(xué)功能作用機(jī)制等不是很清楚[11]?！ ?產(chǎn)胞外淀粉酶的菌株對(duì)生防的作用 胞外淀粉酶的檢測(cè)方法 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶類的總稱。淀粉與盧戈氏碘液產(chǎn)生反應(yīng)生成藍(lán)色物質(zhì)，而被淀粉酶水解過生成的物質(zhì)不會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)。故可以利用透明圈的大小來判斷菌體產(chǎn)生淀粉酶的能力差異。在萌發(fā)期間小麥會(huì)產(chǎn)生大量的淀粉酶將其儲(chǔ)存的淀粉水解，以供萌發(fā)使用。但是這種芽孢桿菌由于營養(yǎng)和空間的限制不能很好的定植于小麥根部，故起到的防護(hù)作用不是很大。 09菌株 蠟樣芽孢桿菌，革蘭陽性桿菌，兩端鈍園，一般從短鏈到長(zhǎng)鏈，培養(yǎng)6h后即可形成芽胞，芽胞位于菌體中央，橢圓形，不膨出。能運(yùn)動(dòng)。生長(zhǎng)時(shí)需氧或兼性厭氧，在普通瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)旺盛，形成較大、灰白色、表面粗糙似融蠟狀菌落，因此而得名；在復(fù)雜培養(yǎng)基中能呈厭氧生長(zhǎng)，葡萄糖和硝酸鹽可促進(jìn)厭氧生長(zhǎng)；生長(zhǎng)溫度范圍為530℃，10℃以下停止繁殖。最適生長(zhǎng)溫度為2835℃。 蠟樣芽孢桿菌09菌株是1株從健康小麥植株中分離獲得的有益芽孢桿菌，為小麥內(nèi)生細(xì)菌，屬革蘭氏陽性蠟樣芽胞桿菌，運(yùn)動(dòng)性強(qiáng)，具有產(chǎn)生葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶和蛋白酶等真菌細(xì)胞壁降解酶和鐵載體的能力。 利用生防菌株09抗利福平（Rifampicin，Rif）標(biāo)記法，得到300株抗Rif菌株?！ ?研究背景及意義 芽孢桿菌對(duì)馬鈴薯瘡痂病、蘋果紅癌病、赤霉病等許多土傳病害以及地上部病害具有生防的效果。隨著枯草芽孢桿菌作為革蘭氏陽性代表菌株基因組被測(cè)序以來，同枯草芽孢桿菌有關(guān)的研究，特別是有關(guān)生化分析、分子生物學(xué)等方面基礎(chǔ)理論研究持續(xù)展開。芽孢桿菌殺菌劑克服了傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥污染環(huán)境、危害人畜、易產(chǎn)生抗性等缺點(diǎn)，具有選擇性強(qiáng)、安全、原料簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在微生物殺菌劑市場(chǎng)中初露頭角?！ ≡谏缿?yīng)用中，讓菌體能很好定植是一個(gè)很重要的問題。那么我們的迫
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