【正文】 至100mL，搖勻后備用。⑷ 75%的乙醇溶液：取實(shí)驗(yàn)室的無(wú)水乙醇75 mL，放入100 mL容量瓶中，向容量瓶中加水至刻度線，搖勻后備用。他包括完全隨機(jī)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)和拉丁方的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。但是采用這種方式進(jìn)行試驗(yàn)是，當(dāng)因素與位級(jí)增加時(shí)，試驗(yàn)次數(shù)急劇增加。此試驗(yàn)應(yīng)用一套正規(guī)化的正交表來(lái)安排實(shí)驗(yàn)和用一種程序化的計(jì)算方法來(lái)分析試驗(yàn)結(jié)果，由于這種方法的試驗(yàn)次數(shù)少、分析方法簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、可靠性高并適用面廣，因而在世界范圍內(nèi)迅速普及，成為試驗(yàn)設(shè)計(jì)的重要工具。23型全面試驗(yàn)，即因素為A、B、C各取2水平，共需進(jìn)行23=8次 ，如表31所示。表31 23型全面試驗(yàn)表實(shí)驗(yàn)號(hào)因素ABC11112112312141225211621272218222 紫外可見(jiàn)吸收光譜紫外可見(jiàn)吸收光譜（UVVis）[15]是研究物質(zhì)在紫外見(jiàn)光波區(qū)(190nm～1100nm) 的分子吸收光譜的一種常用分析方法。利用這一特性可以對(duì)無(wú)機(jī)化合物、有機(jī)化合物及生物大分子進(jìn)行定性和定量分析，繼而出出現(xiàn)了紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。比爾—朗伯定律數(shù)學(xué)表達(dá)式：A=log(1/T)=Kbc （31）A：吸光度；T：透射比，是透射光強(qiáng)度(I0)比上入射光強(qiáng)度(It)；K:摩爾吸收系數(shù)；b：吸收層厚度，一般以cm為單位；c：吸光物質(zhì)的濃度。但是為了提高測(cè)定的靈敏度，需要準(zhǔn)確控制顯色時(shí)間和顯色劑用量[16]。具有較大的表面積，有很強(qiáng)的吸附性能，能在它的表面上吸附氣體、液體或膠狀固體，常用于氣體的吸附、分離和提純，溶劑的回收和油脂、甘油、藥物的脫色劑。~3%（w/v），脫色時(shí)間一般為30~60min，使用溫度在75~80℃比較好。另外，有色雜質(zhì)雖可溶于沸騰的溶劑中，但當(dāng)冷卻析出結(jié)晶體時(shí)部分雜質(zhì)又會(huì)被結(jié)晶吸附，使得結(jié)晶帶色，所以用活性炭脫色要等固體物質(zhì)完全溶解后再加。結(jié)果見(jiàn)圖31。事先配制好需要測(cè)吸光度的提取液10mL：稀釋好的穿心蓮內(nèi)酯提取液1mL，加入1%3,5二硝基苯甲酸2 mL，,60%乙醇溶液4 mL，靜置15s后用60%乙醇定容至10 mL，搖勻，在紫外可見(jiàn)分光光度儀上226nm出比色，測(cè)定吸光度。⑵ 測(cè)量：精密量取標(biāo)準(zhǔn)液0、,分別加入10mL容量瓶中，依次標(biāo)號(hào)7。以1號(hào)管為對(duì)照，分別在分光光度計(jì)上226nm處測(cè)量吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 單因素試驗(yàn) 取穿心蓮的干燥莖干為原料，挑去雜質(zhì)，粉碎后備用。計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯的相對(duì)含量。震蕩結(jié)束后依次抽濾，再加入活性炭30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標(biāo)號(hào)，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。⑶ 以料液比為單因素變量 精確稱取5g穿心蓮粉6份，分別加入250mL錐形瓶，在各瓶中加入25mL、50mL、75mL、100mL、125ml、150ml75%乙醇，設(shè)置超聲功率100瓦，超聲溫度40℃，然后放置于超聲波清洗器中震蕩20min。計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯的相對(duì)含量。震蕩結(jié)束后依次抽濾，再加入活性碳30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標(biāo)號(hào)，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。⑸ 以反應(yīng)溫度為單因素變量精確稱取5g穿心蓮粉6份，分別加入250mL錐形瓶，再加入50mL 75%乙醇，設(shè)置超聲功率100瓦，溫度設(shè)置為450、560、65℃，置于超聲波清洗器中震蕩20min，震蕩結(jié)束后依次抽濾，再加入活性碳30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標(biāo)號(hào)，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。 正交試驗(yàn)在以上單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，選擇對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取濃度影響較大的各主要因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。表32 正交試驗(yàn)因子水平表因素Factors水平A超聲震蕩時(shí)間/minB超聲功率/wC料液比/mLD提取溶劑1401001:2075%乙醇2601201:25乙酸乙酯3801401:30石油醚 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)精確稱取5g穿心蓮粉3份，分別加入250mL錐形瓶，設(shè)置溫度為60℃，超聲功率140w，超聲震蕩60min，依次用真空抽濾，再加入活性炭，30℃水浴10min脫色，抽濾，將濾液標(biāo)號(hào)并用75%乙醇定容至250mL。 穿心蓮內(nèi)酯的鑒別⑴ 物理常數(shù)：~232℃。⑶顯色反應(yīng)：① 亞硝酰鐵氰化鈉堿液反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許放在放在比色板上（白色具穴磁板）上，%亞硝酰鐵氰化鈉溶液2滴，10%氫氧化鈉溶液2滴。4 結(jié)果與討論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制，、于226nm測(cè)定吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。見(jiàn)圖41。 以超聲功率為單因素變量表43 不同超聲功率對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響超聲功率80w100w120w140w160w180w吸光值(Abs)圖43 不同超聲功率對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響由表格和圖片可知，超聲功率在100、1140w時(shí)穿心蓮內(nèi)含子提取濃度較高，在140w時(shí)是最高的。 以不同溶劑為單因素變量表45 不同溶劑對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響不同溶劑水75%乙醇乙酸乙酯石油醚吸光值(Abs) 圖45 不同溶劑對(duì)穿心蓮內(nèi)酯提取的影響由表格和圖片可知，用乙酸乙酯提取時(shí)穿心蓮內(nèi)酯濃度最高，75%乙醇和石油醚次之。 正交試驗(yàn)結(jié)果 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，對(duì)超聲振蕩時(shí)間(A)、超聲功率(B)、料液比(C)、提取溶劑(D)4個(gè)參數(shù)進(jìn)行了L9(34)的正交試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表47。表48 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果吸光值(Abs)平均吸光值(Abs)123 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論⑴ 超聲振蕩時(shí)間的不同在其他條件相同的情況下，改變超聲振蕩的時(shí)間，設(shè)置6個(gè)變量，分別是60、80、100、120min，提取液抽濾后經(jīng)配制，測(cè)得不同吸光值。可以說(shuō)明在40～60min時(shí)提取效率較好，在此基礎(chǔ)上延長(zhǎng)時(shí)間不能提高提取率，同時(shí)考慮到節(jié)約能源等方面，我們選擇的最佳時(shí)間是40min。通過(guò)圖43和表43可以看出在80～140w這一區(qū)域中，吸光度一直是上升趨勢(shì)，在140w處達(dá)到最高后吸光度下降得非?？欤瑥臄?shù)據(jù)可以看出。⑶ 料液比不同 75%的乙醇能較好的提取穿心蓮內(nèi)酯。選擇了料液比分別為1:1:1:11:1:21:30，其他條件不變，超聲振蕩后提取液抽濾后經(jīng)配制，測(cè)得不同吸光值，結(jié)果可見(jiàn)表44和圖44。另外，在1:15和1:20之間的斜率是最大的，之后上升的趨勢(shì)逐漸減小，說(shuō)明料液比再增大時(shí)吸光度值的增加將不會(huì)太明顯。⑷ 不同溶劑 在其他條件相同