農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法的概述-在線瀏覽
2024-08-07 08:27本頁面
【正文】 r基因成簇排布于vir區(qū)。 發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium其侵染植物是將其Ri質(zhì)粒上的TDNA插入到宿主植物基因組中，這一點(diǎn)與Ti質(zhì)粒相類似。發(fā)根農(nóng)桿菌由于宿主植物損傷部位產(chǎn)生的酚類化合物而附著在植物的細(xì)胞壁上，virA的產(chǎn)物是一種跨膜蛋白，進(jìn)一步激活virG的產(chǎn)物。TR區(qū)可進(jìn)行改造，這樣Ri通過農(nóng)桿菌細(xì)胞膜特定“孔道”進(jìn)入宿主植物細(xì)胞核，進(jìn)而使TDNA整合到植物基因組中。其轉(zhuǎn)化過程[68]如下：細(xì)菌在植物傷口處附著，使受傷的植物組織產(chǎn)生酚類化合物，誘導(dǎo)Ti質(zhì)粒內(nèi)vir基因的表達(dá)．如乙酰丁香酮（As）。另一類誘導(dǎo)化合物是組成植物細(xì)胞壁的一些特異單糖，As和單糖可協(xié)同誘導(dǎo)Ti質(zhì)粒上vir區(qū)基因的表達(dá)。VirA蛋白是一種結(jié)合在膜上的化學(xué)受體蛋白，可直接對植物產(chǎn)生的酚類化合物感應(yīng)，其感應(yīng)部位可能位于胞質(zhì)區(qū)域。自身被磷酸化激活后，使VirG蛋白活化。蛋白是DNAvirC、virD、virE參與TDNA復(fù)合體的形成和轉(zhuǎn)移．ChvE可結(jié)合一些單糖，也可直接與VirA周質(zhì)區(qū)相互作用，的內(nèi)切酶活性，它可以識別TDNA底鏈邊界重復(fù)序列上的特定位點(diǎn)，并在底鏈24切開TDNA后，VirD2蛋白與T一鏈的5’端共價結(jié)合，避免核酸外切酶降解T一鏈．新的TDNA底鏈以此鏈為模板，從右端產(chǎn)生的DNA缺口處以5’3’方向進(jìn)行合成。此外，VirD2作為一個導(dǎo)向蛋白，可以指導(dǎo)整個TDNA復(fù)合體從農(nóng)桿菌進(jìn)入到植物細(xì)胞核。TDNA整合進(jìn)入植物基因組并表達(dá)產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)．TDNA在寄主細(xì)胞染色體上的整合是隨機(jī)的，但對轉(zhuǎn)錄活化區(qū)域有所偏好。3轉(zhuǎn)化方法 目前農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化單子葉植物最常用的方法是共培養(yǎng)法。共培養(yǎng)前農(nóng)桿菌感染愈傷組織的方式有：①將整塊愈傷組織浸泡于菌液中靜置培養(yǎng)。③將菌液加至愈傷組織上。葉盤法它是雙子葉植物較為常用也較為簡單有效的方法。它是一種簡便、快速、可靠而且不需要經(jīng)過組織培養(yǎng)階段即可獲得大量轉(zhuǎn)化植株的基因轉(zhuǎn)移方法，具有良好的研究與應(yīng)用前景。 在原生質(zhì)培養(yǎng)的早期，將攜帶外源目的基因的農(nóng)桿菌與原生質(zhì)體共同培養(yǎng)，農(nóng)桿菌的Ti或Ri就會隨著外源信號分子的誘導(dǎo)而導(dǎo)入原生質(zhì)體的核內(nèi)，TDNA就可能整合在受體基因組上。此外，作為載體法，新的轉(zhuǎn)基因方法有：基于Ac/Ds轉(zhuǎn)座系統(tǒng)建立的轉(zhuǎn)化載體；利用噬菌體P1Crelox位點(diǎn)的特異性重組系統(tǒng)；利用酵母線粒體IScel核酸內(nèi)切酶特異性誘導(dǎo)植物DNA雙鏈斷開引起的同源重組系統(tǒng)；利用雙鏈細(xì)菌人造染色體載體系統(tǒng)等，能夠提高轉(zhuǎn)化率或轉(zhuǎn)基因位點(diǎn)質(zhì)量。研究現(xiàn)狀關(guān)于禾谷類單子葉植物農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，早期的研究多采用其幼胚來評估不同條件下被農(nóng)桿菌侵染的可能性。在此基礎(chǔ)上，人們利用大量實(shí)驗(yàn)去測試不同谷類植物的不同外植體對農(nóng)桿菌侵染的反應(yīng)能力，以期獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化細(xì)胞或植株。streak以上研究工作得到的轉(zhuǎn)化頻率很低，且沒有足夠的分子和遺傳證據(jù)，這些研究成果很少為大家接受并承認(rèn)，卻是鼓舞人心的，為單子葉植物尤其是禾谷類作物轉(zhuǎn)基因研究的進(jìn)一步開展奠定了基礎(chǔ)。從此，農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的轉(zhuǎn)化范圍擴(kuò)展到了許多重要的單子葉植物，包括香蕉、玉米、大麥、
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