【正文】 ；小核RNAsnRNA參與hnRNA的剪接；小胞漿RNAscRNA/7SLRNA蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNAanRNA/micRNA對基因的表達起調(diào)節(jié)作用；核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA2．原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACATATAAT起始位點3510真核生物增強子GCCAATTATAA—5mGpp—起始位點11070253．對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導入效率，增加裝載量。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件4．舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。也可利用誘導的方法，篩選出誘導表達的基因。細胞融合物中包含：脾脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。氨基蝶呤對葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長。利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，3，雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。根據(jù)堿基配對原則，每當DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導致脫氧核苷酸鏈延長的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直至參入下一個ddNTP。方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。當大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動子的功能。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。主要表現(xiàn)以下二方面：①CAP通過改變啟動子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向,以便與10區(qū)結(jié)合，起到取代35區(qū)功能的作用。典型的DNA重組實驗通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。c、對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定?；蛭膸斓臉?gòu)建對重組子的篩選舉出3種方法并簡述過程。當質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。ES細胞的培養(yǎng)：分離胚泡的內(nèi)層細胞團進行培養(yǎng)。可以對ES進行基因操作，不影響它的分化功能可以定點整合，解決了隨機整合的問題。蛋白質(zhì)的生物合成(一)名詞解釋1．翻譯(translation)：以mRNA為模板，氨酰tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質(zhì)因子和酶的參與下，在核糖體上將mRNA分子上的核苷酸順序表達為有特定氨基酸順序的蛋白質(zhì)的過程。3．密碼的簡并性(degeneracy)：—個氨基酸具有兩個以上密碼子的現(xiàn)象。5．變偶假說(wobblehypothesis)：指反密碼子的前兩個堿基(3’端)按照標準與密碼子的前兩個堿基(5’端)配對，而反密碼子中的第三個堿墓則有某種程度的變動，使其有可能與幾種不同的堿基配對。7，同功受體(isoacceptor)：轉(zhuǎn)運同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。9．多核糖體(polysome)：mRNA同時與若干個核糖體結(jié)合形成的念珠狀結(jié)構(gòu)，稱為多核糖體。2．遺傳密碼是如何破譯的?提示：三個突破性工作(1)體外翻譯系統(tǒng)的建立；(2)核糖體結(jié)合技術(shù)；(3)核酸的人工合成。增加或刪除某個核苷酸會發(fā)生移碼突變。(3)密碼的簡并性：在密碼子表中，除Met、Trp各對應一個密碼外，其余氨基酸均有兩個以上的密碼，對保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義。(5)通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發(fā)現(xiàn)某些個別例外現(xiàn)象，如某些哺乳動物線粒體中的UGA不是終止密碼而是色氨酸密碼子。4．簡述三種RNA在蛋白質(zhì)生物合成中的作用。(2)tRNA：蛋白質(zhì)合成中氨基酸運載工具，tRNA的反密碼子與mRNA上的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的氨基酸順序是遺傳信息的轉(zhuǎn)換器。5．簡述核糖體的活性中心的二位點模型及三位點模型的內(nèi)容。(2)三位點模型大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個結(jié)合tRNA的位點，稱為E位，它特異地結(jié)合無負載的tRNA及無負載的tRNA最后從核糖體上離開的位點。(2)轉(zhuǎn)移在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸—AMP—酶復合物上轉(zhuǎn)移到相應的tRNA上，形成氨酰tRNA。蛋白質(zhì)合成可分四個步驟，以大腸桿菌為例：(1)氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成，由氨酰tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰tRNA。(3)肽鏈的延長：起始復合物形成后肽鏈即開始延長。(4)肽鏈合成終止，當核糖體移至終止密碼UAA、UAG或UGA時，終止因子RFRF2識別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P位肽酰tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。9．原核細胞和真核細胞在合成蛋白質(zhì)的起始過程有什么區(qū)別。(2)起始氨酰tRNA不同：原核為fMettRNAf，真核MettRNAi(3)核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體，分40S和60S兩種亞基10．蛋白質(zhì)合成后的加工修飾有哪些內(nèi)容?提示：(1)水解修飾；(2)肽鍵中氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾；(3)二硫鍵的形成；(4)輔基的連接及亞基的聚合。折疊是在自然條件下自發(fā)進行的，在生理條件下，它是熱力學上最穩(wěn)定的形式，同時離不開環(huán)境因素對它的影響。12．真核細胞與原核細胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的合成場所?原核細胞：70S核糖體由30S和50S兩個亞基組成；真核細胞：80S核糖體由40S和60S兩個亞基組成。，將正常的蛋白質(zhì)和突變體蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后，進行指紋圖分析。原核生物與真核生物的翻譯比較如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。(三)填空題1．蛋白質(zhì)的生物合成是以__ mRNA 為模板，以__ 2．生物界共有_____64____個密碼子，其中____61___個為氨基酸編碼，起始密碼子為___AUG ______；終止密碼子為___ UAA _、___ UAG _、__ UGA___。4．植物細胞中蛋白質(zhì)生物合成可在____核糖體____、____線粒體____和____葉綠體_______三種細胞器內(nèi)進行。6．原核生物中的釋放因子有三種，其中RF1識別終止密碼子_____UAA________、____UAG________；RF2識別_____UAA_____、_____UGA_______；真核中的釋放因子只有____RF_______一種。8．原核細胞的起始氨基酸是__甲酰甲硫氨酸___，起始氨酰tRNA是___甲酰甲硫氨酰tRNA___。l0．每形成一個肽鍵要消耗____4____個高能磷酸鍵，但在合成起始時還需多消耗____1____個高能磷酸鍵。12．肽鏈合成終止時，__終止因子_________進人“A”位，識別出___終止密碼子______，同時終止因子使__肽基轉(zhuǎn)移酶______的催化作用轉(zhuǎn)變?yōu)開__水解作用_________。、____Thr_______、___Tyr_______。①從C→N端②定點雙向進行③從N端、C端同時進行④從N→C端2．不能合成蛋白質(zhì)的細胞器是(③)。①EF—Tu②EF一2③EFG④EF一14．真核生物的釋放因子是(①)。①A、G②C、U③U④U、C、A6．蛋白質(zhì)合成所需能量來自(③)。①將一個氨基酸連接到另一個氨基酸上②把氨基酸帶到mRNA位置上③將mRNA接到核糖體上④增加氨基酸的有效濃度8．關(guān)于核糖體的移位，敘述正確的是(③)。①肽基轉(zhuǎn)移酶形成肽鍵②氨酰一tRNA與核糖體的“A，’位點結(jié)合③核糖體沿mRNA移動④fMet—tRNAf與mRNA的起始密碼子結(jié)合以及與大、小亞基的結(jié)合10．在真核細胞中肽鏈合成的終止原因是(④)。①UAA②UAU③UAC④UAG⑤UGA12．根據(jù)擺動假說，當tRNA反密碼子第1位堿基是I時，能夠識別哪幾種密碼子(①②⑤)①A②C③G④T⑤U13．下列哪些因子是真核生物蛋白質(zhì)合成的起始因子(③④⑤)。①氨基酸必須活化②需要消耗能量③每延長一個氨基酸必須經(jīng)過進位、轉(zhuǎn)肽、移位、稅落四個步驟④合成肽鏈由C端向N端不斷延長⑤新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質(zhì)15．下列哪些內(nèi)容屬于蛋白質(zhì)合成后的加工、修飾(②③④⑤)。①氨基酸分子的活化②70S起始復合物的形成③氨酰tRNA進入核糖體A位④肽鍵形成⑤核糖體移位17．原核生物的肽鏈延伸過程有下列哪些物質(zhì)參與(①②③⑤)。端富含嘧啶的互補順序④啟動基因的順序特征⑤以上都正確,可利用嘌呤霉素,這是因為它:(②)①使大小亞基解聚?、谑闺逆溙崆搬尫泞垡种瓢被RNA合成酶活性?、芊乐苟嗪颂求w形成⑤以上都正確：(④)①活化氨基酸的氨基②利用GTP作為活化氨基酸的能量來源③催化在tRNA的5’磷酸與相應氨基酸間形成酯鍵④每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應的tRNA⑤以上都不正確(五)是非題1．DNA不僅決定遺傳性狀，而且還直接表現(xiàn)遺傳性狀。(√)3．每—種氨基酸都有兩種以上密碼子。()5．線粒體和葉綠體的核糖體的亞基組成與原核生物類似。()7．大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時，才能與mRNA結(jié)合。(√)9．氨基酸活化時，在氨酰tRNA合成酶的催化下，由ATP供能，消耗—個高能磷酸鍵。(√)11．每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對應。(√)13．構(gòu)成密碼子和反密碼子的堿基都只是A、U、C、G。(√)15．核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亞基上。(√)核酸的生物合成(一)名詞解釋1．中心法則(centraldogma)：生物體遺傳信息流動途徑。2．半保留復制(簡稱復制)（semiconservativereplication)：親代雙鏈DNA以每條鏈為模板，按堿基配對原則各合成一條互補鏈，這樣一條親代DNA雙螺旋，形成兩條完全相同的子代DNA螺旋，子代DNA分子中都有一條合成的“新”鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保留復制。DNA聚合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，還具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。5．拓撲異構(gòu)酶(topoisomerase)：是一類引起DNA拓撲異構(gòu)反應的酶，分為兩類：類型I的酶能使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應無需供給能量，類型Ⅱ的酶能使DNA的兩條鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，當它引入超螺旋時，需要由ATP供給能量。它的功能在于穩(wěn)定DNA解開的單鏈，阻止復性和保護單鏈部分不被核酸酶降解。反應需要能量。大腸桿菌的引物酶單獨沒有活性，只有與其它蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成一個復合體，即引發(fā)體才有生物活性。10．復制眼θ結(jié)構(gòu)：在一段DNA上，正在復制的部分形成眼狀結(jié)構(gòu)