現(xiàn)代生物學(xué)方法論ppt課件-在線瀏覽
2025-06-29 12:28本頁(yè)面
【正文】 研制的藥物，以特異的基因?yàn)榘校? 并與之特異性互補(bǔ)結(jié)合的一段約 20個(gè)核苷酸組成的人工合成 的寡核苷酸?，F(xiàn)代生物學(xué)方法論 吉林大學(xué)分子酶學(xué)工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 核酸技術(shù) 盛永杰 核酸技術(shù) 用來研究核酸（ DNA和 RNA）的技術(shù) ? 純化 ? 定量 重量上的豐度：光譜定量 數(shù)量上的絕對(duì)豐度：定量 PCR 高通量相對(duì)豐度： DNA芯片 高通量絕對(duì)豐度：序列分析基因表達(dá)（ SAGE） 分子量大?。耗z電泳 ? 合成 從頭合成：寡聚核苷酸的合成 基因擴(kuò)增： PCR反應(yīng) 概述 ? 其他核酸技術(shù) 測(cè)序 基因的表達(dá)與克隆 印記雜交（ Southern與 Northern） 生物芯片 熒光原位雜交 啟動(dòng)子技術(shù) √ SELEX技術(shù) √ 反義技術(shù) √ RNAi技術(shù) √ 非編碼 RNA √ 核酸的生物信息學(xué) √ 概述 一、反義技術(shù) ? 反義技術(shù)的概念 ? 反義技術(shù)的分子機(jī)制 ? 反義核酸的設(shè)計(jì)及注意事項(xiàng) ? 核酶 ? 脫氧核酶 反義技術(shù)概述（ antisense technology) 反義技術(shù)是根據(jù)核酸雜交原理特異性抑制特定基因 (mRNA)表達(dá)的一種生物技術(shù)，包括反義 RNA、反義 DNA、核酶以及脫氧核酶。 反義技術(shù)的主要應(yīng)用方向： 1 通過抑制基因表達(dá)活性研究特定基因在生理、病理?xiàng)l件 下的生物學(xué)功能。 1998年 FDA批準(zhǔn)了第一個(gè)反義藥物 Vitravene (巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎） 反義技術(shù)分子機(jī)制的模型 1）僅由結(jié)合介導(dǎo)的機(jī)制 反義核酸與特定的序列結(jié)合，從而抑制該 RNA與蛋白、 其他核酸或其他因子的相互作用，最終影響 RNA的 代謝與功能。 通過反義結(jié)合，影響 RNA的穩(wěn)定性、 RNA加工、亞細(xì)胞定位 和轉(zhuǎn)運(yùn)等。 3 反義核苷酸的修飾 4 缺陷的避免 避免回文結(jié)構(gòu)以形成二聚體， GC含量不能太高避免產(chǎn)生高毒性和非特異性， GC 含量高的序列可用硫代磷酸型寡聚體。 1983年 Altman在研究 RNaseP時(shí)發(fā)現(xiàn)，該酶中的 RNA 分子單獨(dú)完成前體 tRNA加工。 自身剪切類核酶 共同特征： 1 分子小，一般為 35155個(gè)核苷酸。 3 催化機(jī)制都是一般酸堿催化，質(zhì)子的轉(zhuǎn)移是共同的。 錘頭核酶： 小分子自身分裂 RNA，自身分裂是順式（ cis)反應(yīng)，分子間分裂是反式（ trans)反應(yīng)。 ?II 類內(nèi)含子不富含高度保守的序列（結(jié)構(gòu)域 V和結(jié) 構(gòu)域 IV可讀框除外），但是采用高度保守的二級(jí)結(jié) 構(gòu)， 6個(gè)結(jié)構(gòu)域圍繞大的中心接合以特定的位置排列。 分類： 根據(jù) RNP酶中 RNA和蛋白質(zhì)分子對(duì)起結(jié)構(gòu)與功能的貢獻(xiàn) 是不同。 2 RNP酶：催化作用依賴于蛋白質(zhì)和 RNA的密切合作，端粒酶。 ? 核酶的應(yīng)用 1. 核酶在抗 HIV中的應(yīng)用 2. 核酶抗肝炎病毒的應(yīng)用 3. 核酶在抗生殖道感染的應(yīng)用 4. 核酶在抗白血病中的應(yīng)用 5. 核酶在抗移植排斥反應(yīng)中的應(yīng)用 脫氧核酶 （ Deoxyribozyme,catalytic DNA, DNA enzyme、 DNAzyme） ?單鏈 DNA和單鏈 RNA的區(qū)別 1 RNA中有 2’ OH， DNA則沒有 2 RNA中有尿嘧啶（ U)， DNA則是 5甲基尿嘧啶（ T) 3 糖環(huán)的折疊上， RNA的優(yōu)勢(shì)構(gòu)象是 C3’ endo，而 DNA 的優(yōu)勢(shì)構(gòu)象是 C2’ endo。 2 脫氧核酶具有與一般藥物相似的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，作用程序 和時(shí)間容易控制。 2 選擇靶位點(diǎn)靈活，能夠用任一靶 RNA形成 WatsonCrick堿基 配對(duì)，能夠在任一嘌呤和嘧啶之間分裂 RNA。 ? 脫氧核酶的應(yīng)用 a. 在抗腫瘤方面應(yīng)用 b. 抗 HIV病毒方面應(yīng)用 c. 其它針對(duì) mRNA的應(yīng)用 PCR技術(shù)上的應(yīng)用 根
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1