酵母表達(dá)系統(tǒng)ppt課件-在線瀏覽
2025-06-20 18:37本頁面
【正文】 基化，對蛋白質(zhì)的折疊、穩(wěn)定性及活性較重要。增加了免疫原性、對活性與藥代穩(wěn)定性均有影響。 畢赤酵母 （ Pichia pastoris) 漢森酵母 （ Hansenula ploymorpha) 假絲酵母 （ Candia boidinii) 甲醇 酵母與甲醇氧化酶啟動子 甲醇氧化酶 A、甲醇代謝關(guān)鍵酶，占可溶蛋白的 30%以上 B、名稱和拷貝數(shù)不同 畢赤酵母 /假絲酵母 漢森酵母 醇氧化酶 甲醇氧化酶 alcohol oxidase,AOX methanol oxidase,MOX AOX AOX2 MOX 甲醇 酵母與甲醇氧化酶啟動子 AOX1與 AOX2 *畢赤酵母和假絲酵母基因組存在二個 AOX基因 AOX AOX2 *AOX1與 AOX2基因 97%同源 *AOX1 占主導(dǎo)地位，負(fù)責(zé) AOX 99%以上活性 甲醇 酵母與甲醇氧化酶啟動子 甲醇氧化酶啟動子 A、目前已發(fā)現(xiàn)的、最強(qiáng)的真核啟動子 B、嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)控型啟動子 AOX1：葡萄糖和甘油脫阻遏、甲醇誘導(dǎo) MOX：葡萄糖阻遏、甘油脫阻遏、甲醇誘導(dǎo) 甲醇 酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點 A、表達(dá)水平高（最高水平的系統(tǒng)） B、產(chǎn)物可翻譯后修飾：糖基化、磷酸化、酰脂化 C、過糖基化程度比釀酒酵母少（ 815個 vs100150 個甘露糖） D、產(chǎn)物可正確折疊和高效分泌（最高分泌表達(dá)系統(tǒng)） E、可利用簡單無機(jī)鹽培養(yǎng)基高密度發(fā)酵，生物量大。 YIp型載體： A、在靶序列處線性化載體 DNA，誘導(dǎo)同源重組 B、有“插入”和“取代”二類整合模式 C、主要為單拷貝整合， 110%為多拷貝整合 畢赤 酵母系統(tǒng)模式表達(dá)載體 1） AOX1位點插入 宿主株 :GS11 KM71 可插入位點： 5’AOX1 3’AOX1 TT 轉(zhuǎn)化子：GS115:His+Mut+ KM71:His+Muts 2） His4位點插入 轉(zhuǎn)化子：GS115:His+Mut+ KM71:His+Muts 宿主株
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1