植物離體培養(yǎng)育種ppt課件-在線瀏覽
2025-06-18 02:17本頁面
【正文】 母液需制備新鮮的，并且采用過濾滅菌。 如為了促進芽器官的分化 ，應除去或降低生長素的濃度 ， 或者調(diào)整培養(yǎng)基中生長素與細胞分裂素的比例 。 適中 有利于根芽的分化 。 生長素 /細胞分裂素 生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的使用甚微，一般用 mg／ L表示濃度。 Growth medium is optimised for regeneration of plantlets No sucrose (0%) Sucrose reduced to 1% Sucrose increased to 5% The explant is pletely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface Very few shoots have developed on the explant. No roots and no callus. Shoots developed on edges of upper surface, and some root development has occured Shoots have developed over the surface of the explant, along with roots from the lower surface. The result is parable with the control medium tissue culture in the African Violet No BAP BAP reduced to mg. l1 No NAA Poor shoot development and no roots. Extensive callus generation Poor shoot development and no roots NAA reduced to mg. l1 More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant No BAP BAP reduced to mg. l1 No NAA Poor shoot development and no roots. Extensive callus generation Poor shoot development and no roots NAA reduced to mg. l1 More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant 有機物質(zhì) (Vitamins and amino acids) Vit B1 Vit B6 Vit B3 Vit B5 肌醇 CH LH ME YE 硫胺素 鹽酸吡哆醇 煙酸 泛酸鈣 水解酪蛋白 (casein hydrolysate) 水解乳蛋白 (lactoalbumin hydrolysate) 麥芽提取物 (malt extract) 酵母浸出物 (yeast extract) 促進細胞對培養(yǎng)基的反應 固化劑（ gelling agent） ?瓊脂 ?來于 seaweed ?對植物組織有一定的生理作用 ?用量一般為 710g/L，即 %（ W/V） ?太大，培養(yǎng)基過硬； ?太小，培養(yǎng)基不易凝固 ?不同品牌的瓊脂對外植體的反應也不一樣。 碳源 ?營養(yǎng)物質(zhì) ?滲透壓穩(wěn)定劑 類型 蔗糖 、 葡萄糖、果糖、山梨醇、麥芽糖、淀粉等 濃度 25%（ W/V） ?低濃度適合于原生質(zhì)體培養(yǎng) ?高濃度適合于胚和花藥培養(yǎng) 作用 蔗糖長時間高溫處理會發(fā)生焦糖化，形成 蛋白黑素，抑制細胞生長 pH計 培養(yǎng)基的 pH pH值： ~6 ?： the agar will not gel properly ?6： the gel may be too firm ?滅菌后 pH會降低 ?培養(yǎng)材料降低 pH：產(chǎn)生有機酸， N利用 測定方法 ?pH試紙 ?pH計 pH調(diào)整方法 ?1N的 HCl和 NaOH ?在加入 agar前調(diào) pH 培養(yǎng)基的選擇和配制 選擇 ?擇材料和種類而異 ?參考前人的研究 ?MS培養(yǎng)基最為基本： ?高濃度的 N、 K和 NH4+ ?自己試驗 配制 配母液（ Stock solution) 取樣 加成分 測 pH ok 母液的配制 ?大量元素 ?微量元素 ?濃縮 10倍（量加大 10倍） ?在配制 1L培養(yǎng)培養(yǎng)基時，只取 100ml ?濃縮 100倍（量加大 100倍） ?在配制 1L培養(yǎng)培養(yǎng)基時，只取 10ml 以 KNO3為例 1L培養(yǎng)基需要量為 19g。在母液中的濃度為 190g/L，即 在配制培養(yǎng)基時，取 10ml， 10ml 無菌室 培養(yǎng)室和接種室 室內(nèi)滅菌可用 2%新潔爾敏擦洗 75%乙醇噴霧 UV照射 20分鐘 培養(yǎng)基 滅菌方法 ?高溫高壓蒸氣滅菌 ?過濾滅菌 121176。 C時 1小時 外植體的滅菌原則 ? 充分滅菌，但不能損傷外植體 ? 不同外植體，滅菌要求不一樣 常用方法 ?75%乙醇 ?氯化汞（升汞） ?次氯酸鈉 表面殺菌，具濕潤和殺菌作用，浸 30秒 常用濃度 %處理 510分鐘，有殘毒 濃度 210%，時間 1530分鐘，對植物無害 培養(yǎng)所需環(huán)境條件 光照強度 ：一般而言，愈傷組織的形成并不需要光照； 培養(yǎng)前期 10004000lx，后期 10000 lx。 光質(zhì) ： 一般采用日光燈作為光源。 溫度 ： 一般習慣將培養(yǎng)物置于恒溫下，通常應用的溫度 為 2
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