【正文】 物堿、醇以及其它中性和堿性物質(zhì)。一般Ａ l2O3用量為樣品量的 5～２０倍 。國外的 Bio－ Rad公司生產(chǎn)的 HA有三種規(guī)格，分別適用于不同條件。 HA的 Ca2＋ 基團(tuán)和生物表面的負(fù)電荷基團(tuán)的相互反應(yīng) ，在用 HA分離生物分子過程中起著重要的作用。Date 23在使用 HA作為固定相基質(zhì)時(shí)，有幾點(diǎn)應(yīng)注意：i) HA系干粉末時(shí)，要先在蒸餾水中浸泡，使其膨脹度（水化后所占有的體積）達(dá)到 2～3mL/g后，再按 1:6體積加入緩沖液（如(磷酸鈉緩沖溶液 )， ）懸浮，以除去細(xì)小顆粒。Date 24iii)忌用檸檬酸緩沖液和 PH。iv)就操作容量來說，一般細(xì)顆粒 HA比粗的大；從分辨率比較，粗顆粒 HA也沒有細(xì)的好。參考書： 《 生物化學(xué)技術(shù)原理及其應(yīng)用 》 P45～P46Date 25（ 4）聚酰胺 由己內(nèi)酰胺聚合而成，層析用聚酰胺是白色多孔性的非晶形粉末， 對(duì)堿比較穩(wěn)定，對(duì)酸的穩(wěn)定性較差。各種化合物因其與聚酰胺形成氫鍵能力的不同，吸附能力也就不同，因此可以得到分離。 Date 27（ 5）吸附樹脂 吸附樹脂是由人工合成的具有大孔結(jié)構(gòu)和大表面積的吸附劑，可在 150℃ 以下使用，不溶于溶劑及酸堿。 吸附樹脂是一種親脂性物質(zhì)，由于其表面性質(zhì)不同，可吸附溶液中的不同有機(jī)物，它的作用力主要是范德華力，這種結(jié)合力比起靜電引力來要弱得多，所以說從吸附樹脂上把被吸附物解吸下來是比較容易的，只要改變其親水 疏水平衡即可。n 前處理工藝合格的指標(biāo)：醇洗脫液加水不顯渾濁；洗脫液蒸干后無殘留物。Date 33吸附樹脂的安全性　　　　　　　　　　化學(xué)穩(wěn)定性交聯(lián)三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)＝ 〉 機(jī)械穩(wěn)定性　　　　　　　　　　生物穩(wěn)定性有機(jī)殘留物總量小于５ ppmDate 34用于中藥成份的提取精制n 公開發(fā)表的用樹脂純化的成分近４０種；n 對(duì)生物堿、黃酮、皂苷及其它具有一定極性的成分吸附性較好，對(duì)糖類的吸附能力較差。n 在中藥質(zhì)量控制與分析中應(yīng)用。ADS21樹脂氫鍵型極性吸附樹脂，酰胺基聚苯乙烯結(jié)構(gòu)可與酚、多元酚、取代酚類和黃酮類化合物的羥基形成氫鍵。ADSF8樹脂凝膠氫鍵型極性吸附樹脂，對(duì)黃酮類、多元酚類有較高的吸附選擇性。 ADS7， 它為聚苯乙烯結(jié)構(gòu)、強(qiáng)極性吸附樹脂，用于吸附皂甙或其它甙類。吸附樹脂 洗脫液色素吸光度（ 420nm)甜菊甙純度(%)AB8 80ADS7 90Date 42不同樹脂對(duì)穿心蓮內(nèi)酯的提取效果吸附樹脂 ADS7 ADS16 ADS8穿心蓮總內(nèi)酯含量 (％) Date 43用于色層分離的選擇性吸附樹脂n 基于 “強(qiáng)吸附－弱吸附 ”的差別，以適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相使混合物中不同的成分先后流出樹脂柱外，得到純的單一物質(zhì)。n ADS13從氯仿溶液中吸附分離 長(zhǎng)春堿 ，作用原理是形成氫鍵的作用。n ADSM從有機(jī)溶劑中吸附 生物堿 類，作用原理是絡(luò)合作用。n 除去中藥提取物中的農(nóng)藥殘留。 n 解決實(shí)際應(yīng)用問題。Date 473．流動(dòng)相及其選擇 n 流動(dòng)相一般指洗脫吸附柱的溶液 ,它需要滿足以下要求 :n 穩(wěn)定性好 ,n 粘度?。?~） 10 3Pa Date 48 流動(dòng)相的洗脫作用實(shí)質(zhì)上是 流動(dòng)相分子與被分離的溶質(zhì)分子競(jìng)爭(zhēng)占據(jù)吸附劑表面活性中心的過程 。 Date 49 以聚酰胺為吸附劑時(shí) ,一般用 水 作流動(dòng)相。 原則：n 弱酸性物質(zhì)在酸性下吸附，堿性下洗脫；弱堿性物質(zhì)在堿性下吸附，酸性下洗脫。n 常用的流動(dòng)相按其極性增強(qiáng)順序排列為 :n 石油醚 環(huán)己烷 二硫化碳 四氯化碳 苯 甲苯 氯仿 乙醚 乙酸乙脂 丙酮 正丙醇 乙醇 甲醇 吡啶 酸。 Date 50表 1 各種溶劑的介電常數(shù)（ * 20℃ ，其他 25 ℃ ） 溶劑 介電常數(shù) 溶劑 介電常數(shù)n己烷 1． 89* 氯仿 4． 81石油醚 2． 0 乙酸丁酯 5． 01*環(huán)己烷 2． 02 乙酸已酯 6． 02四氯化碳 2． 23 吡啶 12． 3苯 2． 27 丙酮 20． 7甲苯 2． 38 乙醇 24． 3甲醇 32． 6 水 78． 5Date 51 在選擇洗脫劑時(shí) ,還可以由各種溶劑按不同配比配成混合溶劑作為流動(dòng)相； 因此流動(dòng)相的種類很多，流動(dòng)相的選擇也就比固定相的選擇更為復(fù)雜。在實(shí)踐中一般從極性小到極性大溶劑，通過實(shí)驗(yàn)來選擇。 在層析分離過程中，這兩種互不混溶的溶劑之一為 流動(dòng)相 ； 另一種是吸收在載體中的溶劑，這種溶劑是鍵合在載體中，在層析過程不流動(dòng)為 固定相 。Date 541．原理n 分配層析是根據(jù)欲分離組分在兩種互不混溶（或部分混溶）溶劑間溶解度的差異來實(shí)現(xiàn)的， 當(dāng)流動(dòng)相帶著試樣中的各種組分沿著層析方向流動(dòng)時(shí)，試樣中的各種組分就在流動(dòng)相和固定相兩種溶劑間進(jìn)行分配， 不同的組分分配系數(shù)有差異時(shí)，它們前進(jìn)的速度就不相同，于是得以分離。 Vs、 Vm分別為固定相和流動(dòng)相的體積， Cs、 Cm為溶質(zhì)在兩相中的濃度。n 常用的載體應(yīng)符合以下要求： n 具有多孔結(jié)構(gòu)，能保留較多的固定相，并且吸附或鍵合固定相能力較強(qiáng)，以防在洗脫過程中被流動(dòng)相帶走。n 良好的物理化學(xué)惰性。 Date 57分配層析中常用的載體有如下幾種：n 硅膠：n 在分配層析中用作載體的硅膠一般在 80℃ 左右活化，使其表面殘留一定量的水分作固定相。前者是由質(zhì)量較好的紙漿，經(jīng)干燥、粉碎后制得，纖維長(zhǎng)約 220um， 平均聚合程度為 400500；n 微晶纖維素是由棉花等較純的纖維素，加強(qiáng)酸一起加熱，部分水解后形成的微小晶體纖維素，平均聚合程度為 40~200。 Date 583．流動(dòng)相及其選擇 n 分配柱層析中的流動(dòng)相一般是與水不相混溶的有機(jī)溶劑如正丁醇、正戊醇等。n 為了防止某些被分離組分的離解，流動(dòng)相應(yīng)加入醋酸、氨水等弱酸、弱堿。這種層析是利用底物，抗體和抗原等之間的特異性親和力來選擇分離的。 酶與底物、酶與抑制劑、酶與變構(gòu)效應(yīng)劑、酶與輔酶、激素與細(xì)胞受體、維生素與結(jié)合蛋白、基因與核酸、抗體和抗原、外源凝聚素與紅學(xué)球表面上的抗原等等，都具有這種特異親合的關(guān)系。 [L0]表示固定化配體的初始濃度[E]表示游離的生物大分子的濃度。 KL的值大，生物大分子對(duì)其配體的親和力小，反之，則生物大分子對(duì)其配體的親和力就大。但是在下列兩種情況下，高的固定化配體是不適宜的： n 體系的親和力特別高，以至于不用強(qiáng)烈的洗脫條件便不能將吸附的大分子洗脫下來。 n 因?yàn)椋潭ɑ潴w濃度高，載體單位面積上固定化配體的密度就大，和其它雜蛋白之間同時(shí)形成的離子鍵的數(shù)目也就多，這種離子交換作用造成的非專一性吸附也就強(qiáng)烈。 n 配體和生物大分子結(jié)合后 ,在一定的條件下又能解 離 ,而且無損于生物大分子活性。 1）配體的選擇Date 68不溶于水又具有高度的親水性；n 化學(xué)惰性 ,極低的非特異性吸附 ,如物理