醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)-在線瀏覽
2025-05-22 23:15本頁面
【正文】 后流水沖洗。（3）結(jié)果判定：染成紫色者為革蘭陽性（G＋）菌，染成紅色者為革蘭陰性（G）菌。 三、作業(yè) 繪出示教鏡下細(xì)菌的基本形態(tài)（注意標(biāo)明菌名、形態(tài)、排列、染色性）。（2）、敘述革蘭氏染色的意義。 熟悉常用人工培養(yǎng)基的種類，實(shí)驗(yàn)室常用消毒和滅菌設(shè)備的原理及使用方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（—）常用培養(yǎng)基的制備方法 原理：培養(yǎng)基是用人工方法制備而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)制品。材料與方法：（1）肉湯培養(yǎng)基①成分：新鮮絞碎牛肉50g（），蛋白胨lg，蒸餾水100m1。加水100rnl，攪勻，置冰箱過夜，次日取出，煮沸半小時(shí)，用脫脂棉和紗布過濾，并補(bǔ)足水分至原來的量，即為牛肉浸液。（2）瓊脂培養(yǎng)基①固體培養(yǎng)基：在肉湯培養(yǎng)基中加人2％～3%瓊脂，～，分裝，高壓滅菌，在室溫下凝固即為固體培養(yǎng)基，有平板、斜面和瓊脂高層等數(shù)種。③血液瓊脂培養(yǎng)基：有些細(xì)菌營養(yǎng)要求比較高，在普通的瓊脂培養(yǎng)基上不能很好生長，需用血液瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。（二）細(xì)菌的培養(yǎng)技術(shù)（技術(shù)操作）材料：普通液體培養(yǎng)基、瓊脂平板培養(yǎng)基、斜面培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、大腸埃希菌與葡萄球菌混合菌液、大腸埃希菌斜面培養(yǎng)物、酒精燈、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱。常用的有以下幾種方法：（1）液體培養(yǎng)基接種法① 用滅菌接種環(huán)取細(xì)菌（鏈球菌、大腸埃希菌等）培養(yǎng)物少許。③接種完畢將試管置37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察上述細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長狀況。具體的方法有兩種：①平行劃線法：左手斜持平板底，右手持接種環(huán)。將平板轉(zhuǎn)180176。置37℃溫箱培養(yǎng)。將平板旋轉(zhuǎn)約90176。再作同樣劃線又占平板面積約1／4。將平板放在37℃溫箱內(nèi)，18～24小時(shí)后觀察各區(qū)細(xì)菌生長情況，有無單個菌落，以及菌落的顏色、形態(tài)等。（3）半固體接種法：左手持半固體培養(yǎng)管，右手持接種針，火焰滅菌冷卻后，挑取細(xì)菌（大腸埃希菌、痢疾桿菌等），垂直刺入半固體培養(yǎng)基中心，至近管底處，然后循原路退出。接種完畢，于37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察細(xì)菌生長情況。 （三）細(xì)菌生長現(xiàn)象（示教）觀察金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸埃希菌及痢疾志賀菌在各種培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象和特點(diǎn)。如枯草桿菌。如大腸埃希菌。如鏈球菌。觀察時(shí)要注意菌落的大小、形狀、表面性狀、邊緣是否整齊、透明度、顏色等，可作為鑒別細(xì)菌的依據(jù)之一。無鞭毛的細(xì)菌，因?yàn)椴荒苓\(yùn)動，接種后仍沿穿刺線生長，穿刺線與周圍界限清楚。 皮膚表面、水中細(xì)菌、75%乙醇消毒試驗(yàn)檢查（采用涂抹法） 在普通培養(yǎng)基上分區(qū)后，直接用手指在無菌平板表面輕輕涂按1處，之后用自來水洗手指在平板表面2處輕輕涂按，再用75%乙醇棉球擦拭手指后，手指在平板表面3處輕輕涂按，37℃培養(yǎng)24h后，取出觀察有無細(xì)菌生長。注意平板上菌落種類及是否溶血。打開平板蓋，蓋上中空紙片，使其半暴露于紫外線燈下30分鐘，距離為20－30Cm。藥物敏感試驗(yàn) （紙片法）（1）、材料：大腸桿菌培養(yǎng)液、普通瓊脂培養(yǎng)基、干燥藥物紙片。次日觀察結(jié)果，凡濾紙片周圍有抑菌圈的說明藥物對細(xì)菌的抑制作用，抑菌圈越大則藥物對細(xì)菌的抑制作用越強(qiáng)。濕熱滅菌法將菌種接種于兩個相同的液體培養(yǎng)基內(nèi)，其中一管放入沸水中約15分鐘，與未經(jīng)處理的一管共同放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。高壓蒸氣滅菌法（原理和使用注意事項(xiàng)）高壓蒸氣滅菌器是一種堅(jiān)固密閉的蒸鍋，鍋蓋上裝有壓力計(jì)、安全閥及排氣孔等。由于高壓蒸氣的溫度較高，放出潛熱多，熱力穿透能力較強(qiáng)，故其滅菌效能最好。使用時(shí)應(yīng)在加熱后先打開排氣閥，使滅菌器內(nèi)冷空氣完全排出，再關(guān)閉排氣閥，待壓力表顯示升至所需壓強(qiáng)（）,維持15~20分鐘。三、作業(yè)空氣中細(xì)菌的檢查（描述結(jié)果并分析結(jié)果）皮膚表面、水中細(xì)菌、75%乙醇消毒試驗(yàn)檢查（描述結(jié)果并分析結(jié)果）咽喉部細(xì)菌檢查（描述結(jié)果并分析結(jié)果）紫外線殺菌試驗(yàn)（描述結(jié)果并分析結(jié)果）藥物敏感試驗(yàn)（描述結(jié)果并分析結(jié)果）濕熱滅菌法（描述結(jié)果并分析結(jié)果）繪出示教鏡下細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（注意標(biāo)明菌名、特殊結(jié)構(gòu)、染色方法和放大倍數(shù)）。熟悉鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏菌及痢疾桿菌的形態(tài)染色特性。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）、油鏡下觀察（示教）：鏈球菌革蘭染色片、腦膜炎奈瑟氏菌革蘭染色片、痢疾桿菌革蘭染色片，注意觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列和染色。此菌株侵入機(jī)體后，產(chǎn)生的凝固酶使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白，導(dǎo)致血漿凝固。試管現(xiàn)象是游離血漿凝固酶的作用，玻片現(xiàn)象是結(jié)合于菌體上的凝固酶的作用。材料：新鮮兔血漿、生理鹽水、干凈玻片、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。（五）、腸道菌的分離與鑒別（講解并指導(dǎo)學(xué)生操作）腸道致病性細(xì)菌的分離鑒定程序：程序：糞便標(biāo)本─→形態(tài)學(xué)篩選─→生化反應(yīng)──→血清學(xué)反應(yīng)──→判斷結(jié)果①標(biāo)本的采集（采集要點(diǎn)）糞便標(biāo)
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