【正文】 上海司樂儀器有限公司 鶴壽一次性無菌注射器 常州悅康醫(yī)療器材有限公司 EL2022 電子天平 梅特勒 托利多儀器（上海）有限公司 57328U 型 PDMS 萃取頭 SUPELCO GC2022C A T F 日本島津有限公司 CBM102 GCsolution 工作站 日本島津有限公司 蜂蜜品牌 產(chǎn)地 生產(chǎn)日期 編號 暖民 四川成都 2022 年 02 月 10 日 Y1 雷允上 浙江寧波 2022 年 02 月 25 日 Y2 康思農(nóng) 湖北武漢 2022 年 07 月 27 日 Y3 蜂獻 安徽安慶 2022 年 12 月 11 日 Y4 葆豐 重慶渝北 2022 年 02 月 09 日 Y5 劉氏 安徽安慶 2022 年 01 月 29 日 Y6 越貢 浙江紹興 2022 年 01 月 13 日 Y7 丁氏 云南昆明 2022 年 02 月 17 日 Y8 精靈子 重慶云陽 2022 年 01 月 21 日 Y9 藏原蜜語 青海西寧 2022 年 10 月 16 日 Y10 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 4 實驗方法 以油菜花蜜為實驗對象，對別于市場購買 10種不同商家的油菜花蜜。萃取溫度為 30℃， 40℃， 50℃，60℃。第二階段為用優(yōu)化條件針對剩下的 9組樣品進行分析，這里每組樣品只需一組最優(yōu)數(shù)據(jù)。 頂空固相微萃取提取油菜花蜜揮發(fā)性成分方法 準(zhǔn)確稱取 蜂蜜樣品，加入容量瓶中；加入 1ml 的蒸餾水；加入氯化鈉，加入轉(zhuǎn)子，旋緊蓋子；用 250ml 的燒杯加入適量的水，放在磁力攪拌器上加熱，作為恒溫水??；用溫度計測量水溫，待水浴溫度恒定后，將 PDMS 萃取頭插入容量瓶至適當(dāng)位置，再將容量瓶放入恒溫水浴中，并用試管架固定好萃取器；調(diào)試磁力攪拌器的轉(zhuǎn)動速度，使得轉(zhuǎn)子穩(wěn)定轉(zhuǎn)動即可，伸出萃取頭，開始揮發(fā)性成分的采集，并記時；采集完成后，收起萃取頭，最后將提取好的萃取器插入氣相色譜儀中進行分析。 ? 控制面板打開程序文件。工作站點擊“采集參數(shù)”，“單次分析”，“樣品記錄”，設(shè)置數(shù)據(jù)存儲路徑。 ? 進樣，同時按下綠色按紐“ START”，同時點擊工作站“開始”和按下信號采集器的通道鍵，直到采集完成。 ? 點 擊 SYSTEM，關(guān)閉 GC。 ? 關(guān)工作站，關(guān)電腦，關(guān)信號采集器。 氣相色譜條件 氣 相色譜儀（日本島津 GC2022C） ，配有 FID 氫火焰離子檢測器、美國 Restek 毛細管柱 (30m ， m) ， 進樣口為雙填充 INJ+ ，以及 TCD 熱導(dǎo)檢測器 [15]。為縮短蜂 蜜中各揮發(fā)性組分的保留時間，提高分離度，同時降低峰寬，選擇程序升溫體系。 進樣口的溫度設(shè)定為 250℃ ，檢測器的溫度為 260℃ ，載氣為 % 高純度氮氣，載氣流速是 ，采樣時間為 5min。氣相色譜的具體操作可以參照 ，等工作站走完整個流程，得出氣相色譜圖，并且標(biāo)識上蜂蜜樣品的信息，便于 10 種蜂蜜的區(qū)分。所以就必須將這些色譜圖進行數(shù)字化，由此得到每個樣品圖譜的數(shù)字化信息數(shù)據(jù)， 得到的數(shù)字化信息就能夠用計算機進行分析比較，并將比較的結(jié)果進行量化表述，這樣來獲得不同蜂蜜樣品的共有峰，從而獲得油菜花蜂蜜的特征圖譜 [18]。在這樣的三個信息中，保留值和峰強度是判斷識別和鑒定油菜花蜂蜜樣品揮發(fā)性氣體中復(fù)雜組分的主要依據(jù)，是本論文數(shù)據(jù)分析的重要數(shù)據(jù)源，將樣品色譜圖中的保留值和峰強度進行數(shù)字化，之后得到的稱之為色譜特征譜 。 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 7 3 結(jié)果和討論 本論文研究中將保留值和峰強度進行數(shù)字化的最簡單的方法，就是直接用氣相色譜的保留時間的數(shù)值來表示保留值，用峰高或峰面積來表示峰強度 [18]。就是將色譜 條件，如柱溫、流動相的流速、流動相的組成，進樣量等等進行嚴(yán)格控制，但它們的一些微小變化也會影響保留值的變化，更何況一些無法控制的因素的變化，如柱料填充狀況的變化、室溫的變化、流動相中易揮發(fā)成分的揮發(fā)等等，都將使色譜保留值發(fā)生變化 [18]。 本論文研究中為了解決色譜保留值易受到很多因素的影響而發(fā)生波動，無法進行比較的缺陷，查閱文獻借鑒并引入了“相對保留值 （ relative retention volume） ”的概念 [18]。相對保留值可以消除各種因素對色譜保留值的影響，既便色譜保留值色譜保留值發(fā)生了波動，“相對保留值”也是不會隨其發(fā)生波動，其數(shù)值是穩(wěn)定的 [18]。由此可以看出，要將色譜特征圖譜數(shù)字化而得到可以進行比較的數(shù)字化色譜特征譜的關(guān)鍵是在色譜圖中如何選擇或者插入一個合適的參考峰 [18]。 表 3 萃取條件優(yōu)化結(jié)果 時間（ min） 峰個數(shù) 最大峰高（μV） * 溫度梯度（ ℃ ） 峰個數(shù) 最大峰高（μV） * Nacl 添加量（ g） 峰個數(shù) 最大峰高（μV） * 20 24 35548 30 21 51129 0 35 44961 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 8 25 31 39312 40 37 67495 31 41984 30 39 67495 50 31 36763 37 67495 40 31 29400 60 12 20765 33 52314 *峰高大于 1000μ V 計入峰個數(shù) 圖 1（ a） 萃取時間對峰數(shù)的影響 圖 1（ b） 萃取時間對最大峰強度的影響 由圖 1 可知道在萃取時間為 30min 時峰個數(shù)最多，最大峰 強度 最大，則表明 30min 為最適萃取時間，與文獻 [17]結(jié)果相同。 圖 3（ a） 萃取氯化鈉量對峰數(shù)的影響 圖 3（ b） 萃取氯化鈉量對最大峰強度的影響 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 9 由圖 3 可知當(dāng)氯化鈉的添加量為 時，峰個數(shù)最多，最大峰 強度 最大，則說明 為最佳添加量，與文獻 [17]結(jié)果相同。外 插參考峰用于成分的鑒定試驗，而且本論文油菜蜂蜜揮發(fā)性成分較多，選擇合適的內(nèi)標(biāo)物（內(nèi)標(biāo)物的色譜峰在進行色譜分離時能夠與待鑒定的色譜峰很好的分離、出現(xiàn)的位置要居中，并且能較清晰的分辨出）難度較大 [18]。此時，在10 組油菜蜂蜜揮發(fā)性成分色譜圖統(tǒng)一選擇一個適當(dāng)?shù)姆?，作為?nèi)參考峰，將保留值轉(zhuǎn)換 為相對保留值 [18]。 在工作站得到樣品 Y1Y10 揮發(fā)性成分的氣相色譜圖，肉眼觀察很難區(qū)分差別，所以本研究中需要數(shù)字化的圖譜信息，并作出篩選。為了能確定參考峰，本研究中選出了下面（表 4表 13）的數(shù)字信息供于分析。 相對保留值的處理結(jié)果 查閱文獻 [18]得知相對保留值的計算方法為： 相對保留值 =某一樣品某一峰號的保 留時間 /同種樣品中內(nèi)參考峰的保留時間 由表 4表 13 的保留時間得到下面的 10 種不同油菜蜜揮發(fā)性成分的氣相色譜圖譜的相對保留值（表 14表 23）。 表 14 樣品 Y1 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 10 19 2 11 20 3 12 21 4 13 22 5 14 23 6 15 24 7 16 25 8 17 26 9 18 27 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 14 表 15 樣品 Y2 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 8 16 表 16 樣品 Y3 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 12 23 2 13 24 3 14 25 4 15 26 5 16 27 6 17 28 7 18 29 8 19 30 9 20 31 10 21 11 22 表 17 樣品 Y4 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 5 9 2 6 10 3 7 11 4 8 表 18 樣品 Y5 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 15 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 23 8 16 24 表 19 樣品 Y6 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 17 33 2 18 34 3 19 35 4 20 36 5 21 37 6 22 38 7 23 39 8 24 40 9 25 41 10 26 42 11 27 43 12 28 44 13 29 45 14 30 46 15 31 47 16 32 48 表 20 樣品 Y7 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 16 7 15 23 8 16 24 表 21 樣品 Y8 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 6 11 2 7 12 3 8 13 4 9 14 5 10 15 表 22 樣品 Y9 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 8 16 表 23 樣品 Y10 中揮發(fā)性成分的相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 峰號 相對保留值 1 9 17 2 10 18 3 11 19 4 12 20 5 13 21 6 14 22 7 15 8 16 不同油菜花蜂蜜樣品的圖譜共有峰的分析 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 17 將表 14表 23 中的相對保留值和峰號數(shù)據(jù)對應(yīng)錄入到 Excel 表格軟件中，找出 10 中油菜花蜂蜜樣品中揮發(fā)性成分的氣相色譜分析圖譜的共有的相對保留值，查找結(jié)果在表 14表 23 中用字體加粗表示出來了，那么得到的共有峰有 10 個（ AJ 包括了內(nèi)參考峰），分別如表 24 所示。 在 內(nèi) 參 考 峰 選 取 是 有 提 到 內(nèi) 參 考 峰 的 范 圍 在 之 間 ， 對 于 源 數(shù) 據(jù) 精 確 內(nèi) 參 考 峰 的 范 圍 ， 可 得 到 為 ：。 表 25 共有峰的相對保留值與保留時間 共有峰 相對保留值 共有峰出峰保留時間范圍 （ min) 共有峰 相對保留值 共有峰出峰保留時間范圍 (min) 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 18 A F B G C H D I E J 油菜花蜂蜜中的揮發(fā)性成分色譜圖 圖 7 暖民蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 8 雷允上蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 9 蜂獻蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 10 葆豐蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 11 劉氏蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 12 越貢蜂蜜樣品的氣相色譜圖 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 19 圖 13 丁氏蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 14 精靈子蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 15 藏原蜜語蜂蜜樣品的氣相色譜圖 圖 16 康思農(nóng)蜂蜜樣品的氣相色譜圖 通過比較 10 組樣品的色譜圖和相對保留時間并對照參考峰，共得到 10 個共有峰。研究結(jié)果共有峰的峰號 (相對保留時間min)： 1（ ）， 2（ ）， 3（ ）， 4（ ），5（ ）， 6（ ）， 7（ ）， 8（ ）， 9（ ）， 10（ ） 。 在內(nèi)參考峰選取是有提到內(nèi)參考峰的范圍在 之間，對于源數(shù)據(jù)精確內(nèi)參考峰的范圍，可得 到為： 。共有峰的峰號 (相對保留時間 min)： 1（ ），2（ ）， 3（