【正文】 二倍體變成異倍體。 細(xì)胞轉(zhuǎn)化有四種主要途徑：①有些細(xì)胞在培養(yǎng)中自發(fā)轉(zhuǎn)化。③病毒轉(zhuǎn)化。 轉(zhuǎn)化細(xì)胞由于有無限壽命，在培養(yǎng)中更易生長，被廣泛用于生產(chǎn)生物制品，如重組蛋白藥物、病毒疫苗等。 腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞是來自于腫瘤組織的細(xì)胞或經(jīng)腫瘤細(xì)胞與其它細(xì)胞融合產(chǎn)生的細(xì)胞，如雜交瘤細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞有很好的增殖特性，生長速率高。 體外培養(yǎng)所需的一般條件 適宜的培養(yǎng)皿、血清成分、 370C 、 CO25％、 95～ 100％濕度 、 抗生素。由于近年來分離純化技術(shù)的進(jìn)步和對這些細(xì)胞致瘤性的深刻認(rèn)識，對其在生產(chǎn)中的應(yīng)用有所松動，如雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)的單克隆抗體已用于體內(nèi)治療， C127細(xì)胞生成重組蛋白的研究也形成了規(guī)模。一些正常的成纖維細(xì)胞系以 ~，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系以 ~。 溫度 低溫下 CO2溶解度增加，引起 pH變化。在攪拌條件下黏度大則細(xì)胞受損傷小。通常細(xì)胞培養(yǎng)用水的污染物標(biāo)準(zhǔn)可參考醫(yī)藥上注射用水標(biāo)準(zhǔn)，但原則上應(yīng)高于注射用水標(biāo)準(zhǔn)。細(xì)胞能用的糖主要是六碳糖，特別是葡萄糖。昆蟲細(xì)胞更偏愛蔗糖。使用谷氨酰胺最大的問題是它的自發(fā)降解，降解量與時間、溫度、血清和磷酸濃度有關(guān)，降解產(chǎn)物為氨，對細(xì)胞有毒性。不同種類的細(xì)胞對氨基酸的種類和濃度有不同的要求，但除了谷氨酰胺外，還有 12種氨基酸不能在細(xì)胞內(nèi)合成，必須依靠從培養(yǎng)基中攝取。非必須氨基酸含量低時常會增加必須氨基酸的消耗量。 （ 4）維生素 維生素是維持細(xì)胞正常生理狀態(tài)的一種重要生物活性化合物，在細(xì)胞中多形成酶的輔基或輔酶，對細(xì)胞的代謝過程有重要影響。 （ 6）脂類和磷脂前體 在使用血清的細(xì)胞培養(yǎng)中，脂類來自血清，在無血清培養(yǎng)中，有些細(xì)胞需要添加脂類，如膽固醇、脂肪酸、磷脂。 非營養(yǎng)性物質(zhì) （ 1）抗生素 細(xì)胞培養(yǎng)中，特別是原代細(xì)胞培養(yǎng)中，常使用抗生素抑制微生物的污染。 HEPES是緩沖能力很強(qiáng)的化合物，但由于它相當(dāng)昂貴，細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中很少使用。在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的細(xì)胞會受到機(jī)械攪拌和氣泡運(yùn)動所產(chǎn)生的剪切損傷，某些大分子化合物，如甲基纖維素、葡聚糖、PEG、聚乙烯吡咯烷酮、 Pluronic F6血清白蛋白，能夠減輕這種損傷。β－巰基乙醇在雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)中能刺激抗體分泌，并促進(jìn)半胱氨酸利用。最常用的是小牛血清。由于歷史原因，商業(yè)培養(yǎng)基大都是按添加血清來設(shè)計(jì)的，使用血清技術(shù)也很成熟，盡管使用血清有許多缺點(diǎn)，仍將其作為細(xì)胞培養(yǎng)最重要的添加劑普遍采用。因此，培養(yǎng)設(shè)施不能設(shè)在通風(fēng)場所。 血清：有些血清在生產(chǎn)時就已經(jīng)被支原體或病毒等污染，變成了污染。 動物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng) （一）培養(yǎng)環(huán)境 溫度 溫度是細(xì)胞在體外生存的基本條件之一，來源不同的動物細(xì)胞，其最適的生長溫度不同。 pH 大規(guī)模培養(yǎng)時影響培養(yǎng)液的 pH穩(wěn)定性的主要因素有三種：（ 1）緩沖液的緩沖能力及種類； （ 2）對流空間大??；（ 3）葡萄糖濃度。這種緩沖系統(tǒng)要求在培養(yǎng)液上面的對流空間加入 CO2以防止它的丟失及增加羥基離子。 HEPES生物緩沖劑也曾被加入NaHCO3/CO2緩沖系統(tǒng)中，這是由于 HEPES的 pK為 ， HEPES被加入后，其緩沖能力為～ 。 動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)時常有幾種方法來調(diào)節(jié)培養(yǎng)液中的 pH： （ 1）在培養(yǎng)基中添加 NaHCO3作為緩沖劑及通入含 CO2的空氣進(jìn)行調(diào)節(jié) （ 2）用 行調(diào)節(jié)。 通常通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中NaHCO3用量及通氣中 CO2濃度來控制發(fā)酵過程的 pH。通氣的目的有兩個：一是提供細(xì)胞代謝所需的足夠的氧；二是使發(fā)酵液處于均勻懸浮狀態(tài)，有利于傳質(zhì)過程。 滾瓶 也是一種重要的培養(yǎng)容器，培養(yǎng)時放在滾瓶機(jī)上緩慢滾動，但培養(yǎng)條件很接近于靜止培養(yǎng)。培養(yǎng)依賴性貼壁培養(yǎng)細(xì)胞時，需加入微載體以增加培養(yǎng)表面積。它有各種不同形式，容積可以從 1升到幾十立方米。微載體法培養(yǎng)動物細(xì)胞有很多好處：①可在反應(yīng)器中提供大的比表面積②可采用均勻懸浮培養(yǎng)，簡化了各種環(huán)境因素的檢測和控制，提高了培養(yǎng)系統(tǒng)的重演性③可用普通顯微鏡觀察細(xì)胞在微載體上的生長情況④容易放大⑤適合于多種貼壁依賴性細(xì)胞培養(yǎng)⑥容易收獲細(xì)胞。 懸浮培養(yǎng) 懸浮培養(yǎng)指細(xì)胞在培養(yǎng)容器中自由懸浮生長的過程，主要用于非貼壁依賴性細(xì)胞的培養(yǎng)，如雜交瘤細(xì)胞等。 目前，動物細(xì)胞培養(yǎng)用生物反應(yīng)器主要包括：轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)器、塑料袋增殖器、填充床反應(yīng)器、多層板反應(yīng)器、螺旋膜反應(yīng)器、管式螺旋反應(yīng)器、陶質(zhì)矩形通道蜂窩狀反應(yīng)器、流化床反應(yīng)器、中空纖維及其它膜式反應(yīng)器、攪拌反應(yīng)器、氣升式反應(yīng)器等。 存在問題：由于液體混合的能量唯一來自通入的氣體，因而通氣量大，泡沫多，而且氣泡破碎造成嚴(yán)重的細(xì)胞機(jī)械損傷。設(shè)計(jì)有多種形式的攪拌器，應(yīng)用最多的是籠式攪拌器。下部是通氣腔，上部的是消泡腔，之間有細(xì)管相通。在氣體鼓泡中形成的泡沫經(jīng)細(xì)管進(jìn)入消泡腔，經(jīng)絲網(wǎng)破碎分成氣液兩部分，既做到深層通氣，又避免泡沫在反應(yīng)器中積累。懸浮細(xì)胞或貼附有細(xì)胞的微載體的密度接近于培養(yǎng)基，被培養(yǎng)基所裹脅，反復(fù)循環(huán)，充分混合。 中空纖維生物反應(yīng)器 用途較廣，既可用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，又可用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。中空纖維是一種細(xì)微的管狀結(jié)構(gòu)，管壁為極薄的半透膜，富含毛細(xì)管，培養(yǎng)時纖維管內(nèi)灌流充以氧氣的無血清培養(yǎng)液，管外壁則供細(xì)胞黏附生長，營養(yǎng)物質(zhì)通過半透膜從管內(nèi)滲透出來供細(xì)胞生長；對于血清等大分子營養(yǎng)物，劃必須從管外灌入，否則會被半透膜阻隔不能被細(xì)胞利用；細(xì)胞的代謝廢物也可通過半透膜滲入管內(nèi)，避免了過量代謝物對細(xì)胞的毒害作用。 細(xì)胞生物反應(yīng)器的控制系統(tǒng) 由動物細(xì)胞的特性所決定，細(xì)胞培養(yǎng)不能沿用微生物發(fā)酵過程中常用的手段，安全而有效地方法是靠通入培養(yǎng)罐內(nèi)氣體中的氧氣和氮?dú)獾谋壤齺韺?shí)現(xiàn)控制溶氧值的目的； 采用二氧化碳 /碳酸氫鈉緩沖液系統(tǒng)來控制培養(yǎng)液的 pH值，它主要是靠預(yù)先加入培養(yǎng)液中適量的碳酸氫鈉和通過改變氣體流量中的二氧化碳含量來實(shí)現(xiàn)。 流加培養(yǎng) 流加培養(yǎng)是指先將一定量的培養(yǎng)液裝入反應(yīng)器，在適宜條件下接種細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞不斷生長，產(chǎn)物也不斷形成。到反應(yīng)終止時，取出整個反應(yīng)系。這是反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)液體積保持不變的操作方式。與分批培養(yǎng)和半連續(xù)培養(yǎng)不同，連續(xù)培養(yǎng)可以控制細(xì)胞所處的環(huán)境條件長時間的穩(wěn)定。 灌注培養(yǎng) 灌注培養(yǎng)是指細(xì)胞接種后進(jìn)行培養(yǎng)，一方面