松材線蟲、松墨天牛和松樹間的共生關(guān)系研究-研究生課程論-在線瀏覽
2025-02-23 03:19本頁面
【正文】 研究生課程論文 2022 ～ 20226 學(xué)年 第 二 學(xué)期 二 ○一六 年 六 月 課 程 號： 課程名稱： 論文題目： 學(xué)科專業(yè)： 森林保護(hù) 學(xué) 號： 3150462 姓 名： 王立超 任課教師： 黃麟 內(nèi)容 本文研究松材線蟲、松墨天牛和真菌在 松樹中的共生關(guān)系 實驗材料和方法 ： （ 1）真菌 小長喙霉 在 PDA 平板上、 25℃條件下培養(yǎng)一周，使用前在 5℃條件下保存。 灰葡萄孢在 10 mL 的大麥籽粒上培養(yǎng) 。 松材線蟲懸濁液包括成蟲和幼蟲，懸濁液濃度為 50000 條 /mL。 （ 4）松枝 2022 年六月采伐 兩顆 12 年生（胸徑分別為 和 ）的赤松和 兩顆 12 年生的黑松（胸徑分別為 和 ），分別在實驗 1和實驗 3 中使用。樹枝截為 15cm 一段，在樹枝的兩端用石蠟密封起來，每個實驗組樹枝的樹木特定的每組樹枝之間不存在顯著差異 (5)接種 使用鑿子和鑷子在離樹端 處從木質(zhì)部分離樹皮（面積 ），用刻刀在漏出的木質(zhì)部中間挖一個直徑 67mm 圓形刻槽用以放置松墨天牛幼蟲，一份帶有灰葡萄孢或則沒有灰葡萄孢的面積為 5 5mm 的 PDA 培養(yǎng)基放置在遠(yuǎn)離樹端、接近圓形刻槽的位置。兩個樹皮傷口最小距離平均為 ，兩個傷口接種后覆蓋原來的樹皮，用封口膜包起來， 即使不接種松墨天牛幼蟲，也挖一個小刻槽，實驗 4 中松樹枝條不用接種松材線蟲懸液或水，不會在樹皮上形成傾斜傷口。第二組枝條接種松材線蟲、松墨天牛和 PDA，第三組枝條接種松材線蟲和小喙長霉，第四組枝條接種松材線蟲和 PDA。 25℃ ， 16h 光照、 8h 黑暗， 相對濕度 100%條件下常溫培養(yǎng)，用純凈水保持濕度。 分別使用電子天平和游標(biāo)卡尺測量幼蟲體重和頭殼寬度，分別精確到 ，根據(jù)頭殼寬度確定幼蟲齡期： –,– , – – mm分別為一 齡 、二齡、三齡和四齡蟲 。方法和實驗一方法相同，培養(yǎng)條件 相同。沒有松墨天牛出現(xiàn)的松枝在接種 153164d 后分離，稱量幼蟲的鮮重和記錄頭寬、顏色、腸內(nèi)排泄物的有無以及幼蟲所在的位置。 實驗二 為研究韌皮部、木質(zhì)部和天牛幼蟲糞便中線蟲密度的不同， 剛孵化的松墨天牛、松材線蟲和小喙長霉菌接種在 10 個粗細(xì)相似的赤松枝條上，按照實驗一發(fā)法在各部位取樣，測定松材線蟲密度。每天觀察記錄松墨天牛成蟲出現(xiàn)情況，測定體重和鞘翅長度指標(biāo)。 實驗四 研究松墨天牛對小喙長霉菌 影響， 6 個赤松枝條接種松墨天牛和小灰長霉菌， 24 天后，在接種位置上剝離樹皮，從松樹枝條上取下幼蟲和幼蟲糞便， 取整個松樹枝條 四分之一到二分之一的樹皮（包括天牛取食過的樹皮 ，不包括石蠟覆蓋的樹皮 ） 去除外 層樹皮，韌皮部切成 12cm 寬的小塊，使用手鉆在接種松墨天牛和小喙長霉菌的位置取韌皮部包括髓，松墨天牛糞便、韌皮部和木質(zhì)部放在聚乙烯袋子里，20℃下保存，兩天后 ，在真空狀態(tài)下凍干。 結(jié)果 和結(jié)論 實驗一 在 接種 18 天后，解剖松樹枝條，在樹皮下發(fā)現(xiàn) 20 只活的天牛幼蟲和 4 只死的天牛幼蟲，活天牛幼蟲包括 1 個一齡幼蟲、 2 個二齡幼蟲和 17 個三齡幼蟲，平均體重 ，平均頭殼寬 ，在幼蟲腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)糞便。在未接種松墨天牛幼蟲的松樹枝條，木質(zhì)部和韌皮部的 分別分離到線蟲量為 和 ，在接種松墨天牛幼蟲的松樹枝條上，木質(zhì)部、韌皮部和糞便中分別分離到 、 和 松材線蟲。未接種松墨天牛幼蟲的松樹枝條線蟲密度大于接種松墨天牛幼蟲的松樹枝條線蟲密度。 實驗二 在接種剛孵化的松墨天牛幼蟲的赤松枝條中存在天牛糞便，解剖發(fā)現(xiàn) 9 個活的天牛和 1 個死亡的天牛幼蟲，活天牛幼蟲平均體重為，頭殼寬 ，表明活天牛為三齡幼蟲，死亡天牛頭殼寬為 ，說明此為二齡幼蟲，解剖實驗發(fā)現(xiàn)在 10 個松樹枝條的韌皮部存和 5 個松樹枝條的部分木質(zhì)部存在真菌。雙因素方差分析表明，線蟲密度受接種位置影響，但不受松樹枝條影響，松材線蟲密度最大為天牛糞便、其次為韌皮部和木質(zhì)部。方差分析表明成蟲的體重不受真菌接種實驗、線蟲接種、性別、樹皮面積和 彼此之間互作關(guān)系影響。雌天牛的鞘翅比雄天牛鞘翅長 。方差分析顯示接種天牛幼蟲后，天牛成蟲出現(xiàn)時間不受真菌、線蟲、樹皮面積和 天牛性別以及彼此之間互作關(guān)系的影響。天牛糞便的麥角固醇含量最大，其次為韌皮部和木質(zhì)部，方差分析顯示三 者之間存在極顯著差異。 不足之處 實驗中只考慮線蟲取食小喙長霉菌，沒有考慮線蟲取食松樹枝條活細(xì)胞的 實驗四研究松墨天牛對小喙長霉菌影響，實驗中在 6 個赤松枝條上均接種
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