對羧基苯硼酸-明膠納米微球制備及抗腫瘤療效研究-本科畢業(yè)論-在線瀏覽
2024-08-01 18:53本頁面
【正文】 明膠在耐水性和力學(xué)性能方面較差，且在陰暗潮濕的環(huán)境中比較容易受腐化等缺點，但是明膠含有多種 較高活性的 官能團 ， 它 們通過改進明膠的機能以此來滿足明膠在不同領(lǐng)域的運用 。 載藥納米微球的基本概述 根據(jù)微球的組成 材料不同，微球可以分為有機聚合物微球和無機微球。天然高分子 的 材料主要 是 蛋白 類和多糖類 ,它的特點是化學(xué)穩(wěn)定性、成球性、生物兼容性和生物降解性比較好，并且其降解的產(chǎn)物沒有毒副作 用，所以該材料是組成納米微球的首選材料。其一是就是明膠，明膠是目前應(yīng)用較多的一種天然載體材料，其最大的特點是具有生物相容性、生物降解性，生物活 性較高、無毒且無抗原性；其二是殼聚糖，殼聚糖經(jīng)羧甲基化后其生物性能大大 提高。合成高分子 的材料主要 有聚烯烴、聚多元醇類等，其具有無毒、成球性好、化學(xué)穩(wěn)定性高等優(yōu)點，可根據(jù)性能要求的不同，通過對材料進行調(diào)整和改變制備方式，制備我們所需要的載藥微球，且緩釋特性不易受外界環(huán)境影響，效果比較明顯。 納米微球是指應(yīng) 用天然 高分子材料構(gòu) 成的納米粒子，其粒徑大小一般在 101000 nm之間。納米微球粒徑小，不易被機體網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞清除，有效避免脾濾過效應(yīng)，通過增加滲透和滯留效應(yīng)增強靶 2 組織累 積的優(yōu)勢，尤其是在腫瘤部位能夠高效累積，這對于提高癌癥靶向作用具有很大價值 。手術(shù)是指用外科治療手段清 除局部瘤體的一種治療方法， 由于手術(shù)為局部治療法，只能清除原發(fā)瘤體及周圍淋巴結(jié)但它對其他部位如血液系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)里游離的癌細(xì)胞則無法 消滅 ，所以會有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和癌癥 復(fù)發(fā)的潛在危害 。放療是 利用局部高能 量放射線的照射來破壞癌細(xì)胞。化療是 運用化學(xué)藥物清除 腫瘤細(xì)胞 ， 但 是 它 沒有良好的分別系統(tǒng)的。中醫(yī)中藥是我國 特有 的傳統(tǒng)醫(yī)治方法 ， 通過用中藥改善腫瘤患者身體健康從而 提高患者免疫力 ， 但在抗腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移 上，缺乏科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，缺乏相關(guān)的臨床數(shù)據(jù)，作用并不明確且對腫瘤局部的控制作用較差。 由此可見，傳統(tǒng)治療腫瘤的方法還有很多的弊端，而載藥納米微球的研究應(yīng)用很可能突破這些傳統(tǒng)腫瘤治療的弊端。載藥納 米微球 包裹藥 物過程可以 延長藥物的生理活性 ,提高藥物穩(wěn)定性 ,并使藥物的釋放 和治療有了 的 成 效。 論文選題意義 近年來，高分子納米微球在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用 ,臨床上有很多藥物被限制使用，這些藥物需要用通過高分子材料來包埋從而得到治療使用。 本實驗在此基礎(chǔ)上選用明膠作為主要 材料制備納米微球，通過用 4羧基苯硼來酸修飾明膠納米微球 裝載 鹽酸阿霉素，研究該載藥納米微球在抗腫瘤方面的 運用 。 4羧基苯硼酸修飾納 米粒子制備（ NP2 ) 將 12 mg 的 4羧基苯硼酸溶解在 1 mL的二甲亞砜中，然后加入 mg 的 1乙基 （ 3二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽 （ EDC?HCl) 和 10 mg 的 N羥基琥珀酰亞胺（ NHS）對 4羧基苯硼酸的羧基進行活化；將活化后的 4羧基苯硼酸加入到 5 mL 上述NP1 分散液中，通過活化的羧基與 NP1 表面的氨基反應(yīng)得到修飾后的納米粒子。 NP1 和 NP2 的粒徑以及電位表征 通過動態(tài)光衍射（ DLS）粒徑儀檢測兩種納米粒子的粒徑分布以及表面電位，首先將納米粒子分散液的濃度調(diào)節(jié)到 1 mg/mL，然后通過 DLS 檢測并重復(fù) 3 次。 NP1 和 NP2 穩(wěn)定性檢測 為了了解兩種納米粒子的時間穩(wěn)定性以及在生理鹽水、 PBS、培養(yǎng)基、血清和不同pH 等條件中的穩(wěn)定性，于是我們通過 DLS 檢測兩種納米粒子在不同的條件下的粒 徑以及光強的變化。 NP1DOX和 NP2DOX的制備 分別將 3 mL的 NP1 和 NP2 分散液的 pH 值調(diào)節(jié)到 左右，然后加入 1 mg 的鹽酸阿霉素 (DOX) 于分散液中，避光攪拌過夜。上清為未被包載的阿霉素溶液，通過酶標(biāo)儀檢測上清的紫外吸光度，帶入阿霉素 吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線得出上清阿霉素濃度，從而得出未被包載的阿霉素的量。g/mL，然后分別取 1 mL 加 入到截留分子量為 14 kDa 的透析袋中并將透析袋加入到 50 mL 的離心管中，在離心管中加入不同 pH 值（ 、 和 ）磷酸緩沖液，然后將該離心管放在震蕩頻率為 100 rpm,溫度為 37℃ 的搖床中；最后在預(yù)先設(shè)定的時間點取出離心管中的緩沖液并加入新鮮緩沖液，通過酶標(biāo)儀檢測取出的緩沖液中阿霉素的含量。培養(yǎng)結(jié)束后，吸去每孔中的培養(yǎng)基，重新加入 180 181。L濃度為 5 mg/mL的 MTT 溶液，共培養(yǎng) 4 h后去除 96 孔板中的培養(yǎng)基，加入 150 181。 3 結(jié)果討論 NP1 和 NP2 的粒徑以及電位表征 圖 1. NP1（ 左 ）， NP2（右） 透射電子顯微鏡圖片 3 4 5 6 7 8 9 103 02 01 00102030 NP1 NP2 Zeta potential (mv)pH 圖 2. 兩種納米微球在不同 pH 值下表面電位變化 從 TEM 圖可以看出 NP1 和 NP2 的形狀規(guī)整，都為球形，粒徑分布均一，大部分分布在 100nm 左右，與 DLS 檢測結(jié)果（ 160nm 左右） 相比 有所減小，這是由于 電鏡樣品中 納米粒子 干燥 出現(xiàn)皺縮的結(jié)果。 6 NP1 和 NP2 穩(wěn)定性 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10050100150200Diameter (nm)Count rate (kcps) di ame te r C ount rate Ti m e ( day )01002003004005000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10050100150200Diameter (nm)Count rate (kcps) diamet er C ou nt rate T im e (da y )0100200300400 圖 3. NP1（ 左 ）， NP2（右） 在水溶液中保存一周，粒徑及光強變化 sal i ne P B S R P MI 164 0 F B S050100
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