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對羧基苯硼酸-明膠納米微球制備及抗腫瘤療效研究-本科畢業(yè)論-在線瀏覽

2024-08-01 18:53本頁面
  

【正文】 明膠在耐水性和力學(xué)性能方面較差,且在陰暗潮濕的環(huán)境中比較容易受腐化等缺點(diǎn),但是明膠含有多種 較高活性的 官能團(tuán) , 它 們通過改進(jìn)明膠的機(jī)能以此來滿足明膠在不同領(lǐng)域的運(yùn)用 。 載藥納米微球的基本概述 根據(jù)微球的組成 材料不同,微球可以分為有機(jī)聚合物微球和無機(jī)微球。天然高分子 的 材料主要 是 蛋白 類和多糖類 ,它的特點(diǎn)是化學(xué)穩(wěn)定性、成球性、生物兼容性和生物降解性比較好,并且其降解的產(chǎn)物沒有毒副作 用,所以該材料是組成納米微球的首選材料。其一是就是明膠,明膠是目前應(yīng)用較多的一種天然載體材料,其最大的特點(diǎn)是具有生物相容性、生物降解性,生物活 性較高、無毒且無抗原性;其二是殼聚糖,殼聚糖經(jīng)羧甲基化后其生物性能大大 提高。合成高分子 的材料主要 有聚烯烴、聚多元醇類等,其具有無毒、成球性好、化學(xué)穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn),可根據(jù)性能要求的不同,通過對材料進(jìn)行調(diào)整和改變制備方式,制備我們所需要的載藥微球,且緩釋特性不易受外界環(huán)境影響,效果比較明顯。 納米微球是指應(yīng) 用天然 高分子材料構(gòu) 成的納米粒子,其粒徑大小一般在 101000 nm之間。納米微球粒徑小,不易被機(jī)體網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞清除,有效避免脾濾過效應(yīng),通過增加滲透和滯留效應(yīng)增強(qiáng)靶 2 組織累 積的優(yōu)勢,尤其是在腫瘤部位能夠高效累積,這對于提高癌癥靶向作用具有很大價值 。手術(shù)是指用外科治療手段清 除局部瘤體的一種治療方法, 由于手術(shù)為局部治療法,只能清除原發(fā)瘤體及周圍淋巴結(jié)但它對其他部位如血液系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)里游離的癌細(xì)胞則無法 消滅 ,所以會有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和癌癥 復(fù)發(fā)的潛在危害 。放療是 利用局部高能 量放射線的照射來破壞癌細(xì)胞?;熓?運(yùn)用化學(xué)藥物清除 腫瘤細(xì)胞 , 但 是 它 沒有良好的分別系統(tǒng)的。中醫(yī)中藥是我國 特有 的傳統(tǒng)醫(yī)治方法 , 通過用中藥改善腫瘤患者身體健康從而 提高患者免疫力 , 但在抗腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移 上,缺乏科學(xué)標(biāo)準(zhǔn),缺乏相關(guān)的臨床數(shù)據(jù),作用并不明確且對腫瘤局部的控制作用較差。 由此可見,傳統(tǒng)治療腫瘤的方法還有很多的弊端,而載藥納米微球的研究應(yīng)用很可能突破這些傳統(tǒng)腫瘤治療的弊端。載藥納 米微球 包裹藥 物過程可以 延長藥物的生理活性 ,提高藥物穩(wěn)定性 ,并使藥物的釋放 和治療有了 的 成 效。 論文選題意義 近年來,高分子納米微球在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用 ,臨床上有很多藥物被限制使用,這些藥物需要用通過高分子材料來包埋從而得到治療使用。 本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上選用明膠作為主要 材料制備納米微球,通過用 4羧基苯硼來酸修飾明膠納米微球 裝載 鹽酸阿霉素,研究該載藥納米微球在抗腫瘤方面的 運(yùn)用 。 4羧基苯硼酸修飾納 米粒子制備( NP2 ) 將 12 mg 的 4羧基苯硼酸溶解在 1 mL的二甲亞砜中,然后加入 mg 的 1乙基 ( 3二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽 ( EDC?HCl) 和 10 mg 的 N羥基琥珀酰亞胺( NHS)對 4羧基苯硼酸的羧基進(jìn)行活化;將活化后的 4羧基苯硼酸加入到 5 mL 上述NP1 分散液中,通過活化的羧基與 NP1 表面的氨基反應(yīng)得到修飾后的納米粒子。 NP1 和 NP2 的粒徑以及電位表征 通過動態(tài)光衍射( DLS)粒徑儀檢測兩種納米粒子的粒徑分布以及表面電位,首先將納米粒子分散液的濃度調(diào)節(jié)到 1 mg/mL,然后通過 DLS 檢測并重復(fù) 3 次。 NP1 和 NP2 穩(wěn)定性檢測 為了了解兩種納米粒子的時間穩(wěn)定性以及在生理鹽水、 PBS、培養(yǎng)基、血清和不同pH 等條件中的穩(wěn)定性,于是我們通過 DLS 檢測兩種納米粒子在不同的條件下的粒 徑以及光強(qiáng)的變化。 NP1DOX和 NP2DOX的制備 分別將 3 mL的 NP1 和 NP2 分散液的 pH 值調(diào)節(jié)到 左右,然后加入 1 mg 的鹽酸阿霉素 (DOX) 于分散液中,避光攪拌過夜。上清為未被包載的阿霉素溶液,通過酶標(biāo)儀檢測上清的紫外吸光度,帶入阿霉素 吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線得出上清阿霉素濃度,從而得出未被包載的阿霉素的量。g/mL,然后分別取 1 mL 加 入到截留分子量為 14 kDa 的透析袋中并將透析袋加入到 50 mL 的離心管中,在離心管中加入不同 pH 值( 、 和 )磷酸緩沖液,然后將該離心管放在震蕩頻率為 100 rpm,溫度為 37℃ 的搖床中;最后在預(yù)先設(shè)定的時間點(diǎn)取出離心管中的緩沖液并加入新鮮緩沖液,通過酶標(biāo)儀檢測取出的緩沖液中阿霉素的含量。培養(yǎng)結(jié)束后,吸去每孔中的培養(yǎng)基,重新加入 180 181。L濃度為 5 mg/mL的 MTT 溶液,共培養(yǎng) 4 h后去除 96 孔板中的培養(yǎng)基,加入 150 181。 3 結(jié)果討論 NP1 和 NP2 的粒徑以及電位表征 圖 1. NP1( 左 ), NP2(右) 透射電子顯微鏡圖片 3 4 5 6 7 8 9 103 02 01 00102030 NP1 NP2 Zeta potential (mv)pH 圖 2. 兩種納米微球在不同 pH 值下表面電位變化 從 TEM 圖可以看出 NP1 和 NP2 的形狀規(guī)整,都為球形,粒徑分布均一,大部分分布在 100nm 左右,與 DLS 檢測結(jié)果( 160nm 左右) 相比 有所減小,這是由于 電鏡樣品中 納米粒子 干燥 出現(xiàn)皺縮的結(jié)果。 6 NP1 和 NP2 穩(wěn)定性 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10050100150200Diameter (nm)Count rate (kcps) di ame te r C ount rate Ti m e ( day )01002003004005000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10050100150200Diameter (nm)Count rate (kcps) diamet er C ou nt rate T im e (da y )0100200300400 圖 3. NP1( 左 ), NP2(右) 在水溶液中保存一周,粒徑及光強(qiáng)變化 sal i ne P B S R P MI 164 0 F B S050100
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