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核酸分析技術ok(1)-在線瀏覽

2025-07-15 01:01本頁面
  

【正文】 ? 電泳 ? 染色 ? 結果觀察 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 1. 凝膠制備 濃 度 ( %) 標 準 (kb) 高強度(kb) 低熔點(kb) 低黏度低溶點(kb) 1~50 ~25 ~15 ~10 ~10 ~12 ~8 ~8 ~6 ~7 ~7 ~4 ~4 ~4 ~3 ~3 ~1 ~1 ~ ~0.1 瓊脂糖類型 凝結溫度 /℃ 熔化溫度 / ℃ 標準瓊脂糖 35~38 90~95 不同廠家生產的不同商品其凝結溫度和熔化溫度有一定差異 40~42 85~90 高強度瓊脂糖 34~43 85~95 修飾的低熔點 / 凝點瓊脂糖 25~35 63~65 35 65 超低熔點 8~15 40~45 低黏性低熔點瓊脂糖 25~30 70 38 85 30 75 不同類型瓊脂糖的性質 電泳緩沖液 ? 常用三種緩沖液 Tris硼酸 (TBE)、 Tris乙酸 (TAE)、 Tris磷酸 (TPE) ? TBE與 TPE: 緩沖容量高, DNA分離效果好,但 TPE在DNA片段回收時含磷酸鹽濃度高,容易使 DNA沉淀 ? TAE: 緩沖容量低,但價格較便宜,因而推薦選用 TAE。緩沖液中的 EDTA 可螯合二價陽離子,從而抑制 DNA酶的活性,防止 PCR擴增產物降解 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 加熱后 加熱前 1. 凝膠制備 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 2. 上樣 三個作用: 1)增加樣品密度保證 DNA沉入加樣孔內; 2)使樣品帶有顏色便于簡化上樣過程; 3)其中的染料在電場中以可以預測的泳動速率向陽極遷移。 4 凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠 溴化乙錠( EB)插入雙鏈 DNA造成其負電荷減
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