【正文】 準(zhǔn)和質(zhì)控 室內(nèi)質(zhì)控 符合《 輸血科 室內(nèi)質(zhì)控程序》的要求。 試劑： 科華公司 HBsAg 診斷試劑盒 (ELISA) 。C冰箱冷藏。C)條件下不超過(guò) 8小時(shí)。 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。 3．樣本 血清或血漿 樣品類型為受見(jiàn)檢者血清或血漿。 58 項(xiàng)目名稱 XX大學(xué) XX醫(yī)院輸血科 文件編號(hào) ZNYXXXX/MYXM302 版次 /修改 第 2版 /第 0次修 改 ELISA 乙肝表面抗體 (HBsAb)操作規(guī)程 編制 /時(shí)間 XXX/ 審核 /時(shí)間 XXX/ 審批 /時(shí)間 XXX/ 1．目的 規(guī)范檢測(cè)“ HBsAb” 過(guò)程。 BIOCELL 酶標(biāo)儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序。 HBsAg 試劑盒說(shuō)明書(shū)。 10．引用文件 輸血科 室內(nèi)質(zhì)控程序。是診斷 HBV 感染最常用的指標(biāo)。 8．參考范圍 陰性， S/CO。 保養(yǎng)儀器，關(guān)機(jī)。 核對(duì)結(jié)果，打印、簽發(fā)報(bào)告。 先觀察室內(nèi)質(zhì)控是否在控，判斷結(jié)果的可信性，將數(shù)據(jù)處理、計(jì)算、并儲(chǔ)存，導(dǎo)入數(shù)據(jù)庫(kù)。 每反應(yīng)孔加終止 液 50ul（或 1 滴），混勻。 每孔加顯色劑 A、 B 各 50ul（或 1 滴），混勻，密封， 37℃避光顯色 15分鐘。 每孔再加酶標(biāo)結(jié)合物 50ul（或 1 滴）（空白對(duì)照除外），輕微振蕩 5 分鐘后，置 37℃水浴箱中孵育 30 分鐘。 儀器和試劑準(zhǔn)備 根據(jù)樣本多少準(zhǔn)備試劑，增加 3 孔，分別 設(shè)置空白對(duì)照、陰性對(duì)照和臨界質(zhì)控；檢測(cè)儀器按《酶標(biāo) 儀作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 》和《 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 》操作。認(rèn)真檢查檢驗(yàn)?zāi)康?、病人姓名、性別、科室、床號(hào)，血液量 3ml。 6．操作步驟： 樣本編號(hào)→樣本分離、檢測(cè)儀器準(zhǔn)備、試劑準(zhǔn)備→樣本測(cè)定、錄入資料→分析質(zhì)控 /結(jié)果→打印檢驗(yàn)結(jié)果→簽發(fā)報(bào)告單。 測(cè)定波長(zhǎng) 450nm。 判斷標(biāo)準(zhǔn) 陽(yáng)性 ： S/CO。 CUTOFF 值計(jì)算公式 MAX[,MW(NEG)]。 5．標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控 室內(nèi)質(zhì)控 符合《 輸血科 室內(nèi)質(zhì)控程序》的要求。 試劑： 科華公司 HBsAg 診斷試劑盒 (ELISA) 。C冰箱冷藏。C)條件下不超過(guò) 8小時(shí)。 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。 3．樣本 血清或血漿 樣品類型為受見(jiàn)檢者血清或血漿。 55 項(xiàng)目名稱 XX大學(xué) XX醫(yī)院輸血科 文件編號(hào) ZNYXXXX/MYXM301 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 ELISA 乙肝表面抗原 HBsAg 操作規(guī)程 編制 /時(shí)間 XXX/ 審核 /時(shí)間 XXX/ 審批 /時(shí)間 XXX/ 1．目的 規(guī)范檢測(cè)“ HBsAg”過(guò)程。 BIOCELL 酶標(biāo)儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序。 5．參考文獻(xiàn) 乙肝兩對(duì)半檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)。 臨床意義 乙肝病毒是一種部分雙鏈的 DNA病毒，感染人后寄生在肝臟，造成急性或慢性病毒性肝炎，長(zhǎng)期的潛伏感染可造成肝硬化甚至導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。 使用試劑 科華生物工程公司乙肝兩對(duì)半 ELISA試劑盒。 4．參考范圍 HBsAg、 HBsAb、 HBeAg 陰性： S/CO值 0. 99； 陽(yáng)性： S/CO值 。 S/CO 值 =Sample OD/Cutoff。 控制品使用水平和頻率 質(zhì)控水平 : 衛(wèi)生部臨界值血清 , 每板一次。 11) 檢驗(yàn)完畢后，清理其桌面，血清樣本放入專用樣本貯存冰箱內(nèi)，質(zhì)控血清盤放入冰箱；填寫操作記錄使用記錄本。單項(xiàng)陽(yáng)性樣本必須復(fù)查；“灰區(qū)”結(jié)果必須復(fù)查；罕見(jiàn)模式必須復(fù)查。 54 8) 終止后在 10 分鐘內(nèi)完成判讀，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定。顯色時(shí)間從開(kāi)始加第一滴顯色液 B 開(kāi)始計(jì)時(shí)。 5) 用洗板機(jī)洗滌 6 次，拍干。 3) 用微量加樣器取 50ul 相應(yīng)樣品及質(zhì)控品、陰陽(yáng)性對(duì)照品加入對(duì)應(yīng)各孔，空白對(duì)照不加。（ 28 度保存大約可穩(wěn)定一周）。 操作步驟直至報(bào)告結(jié)果 1) 打開(kāi)儀器（包括酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、電腦等），查看是否正常，從冰箱中取出相應(yīng)試劑，置室溫中平衡 30 分鐘。 5） 如果 8小時(shí)內(nèi)不能完成檢測(cè)即應(yīng)將標(biāo)本放入 2到 8176。 4） 儲(chǔ)存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。 2） 用真空采樣管采集受檢者血液標(biāo)本 4～ 5ml。 完成時(shí)間 上午 8∶ 30 以前收到的標(biāo)本，中午 12∶ 00 前完成報(bào)告；隨后送檢的標(biāo)本按標(biāo)本的保存和安全處置程序妥善 保存。 53 項(xiàng)目名稱 XX 大學(xué) XX醫(yī)院輸血科 文件編號(hào) ZNYXXXX/MYXM300 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 乙肝標(biāo)志物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn) 操作規(guī)程 （ ELISA） 編制 /時(shí)間 XXX/ 審核 /時(shí)間 XXX/ 審批 /時(shí)間 XXX/ 1． 原理 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA）。 2． 職責(zé) 責(zé)任人 輸血全套相應(yīng)崗位上當(dāng)班工作人員。 3． 工作流程 標(biāo)本接收和處理： 1） 樣品類型為受見(jiàn)檢者血清或血漿。 3） 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。C)條件下不超過(guò) 8小時(shí)。C冰箱冷藏。配制洗滌液備用。 2) 稀釋血清（ HBcAb(G)檢測(cè)，樣本先做 1： 50稀釋，即 10ul 樣本＋ 500ul 生理鹽水）。 4) 每孔再加酶標(biāo)結(jié)合物 50ul（或 1 滴）（空白對(duì)照除外），輕微振蕩 5 分鐘后，置37℃水浴箱中孵育 30 分鐘。 6) 每孔加顯色劑 A、 B 各 50ul（或 1 滴），混勻，密封， 37℃避光顯色 15 分鐘。 7) 每反應(yīng)孔加終止液 50ul（或 1 滴），混勻。 9) 先觀察室內(nèi)質(zhì)控是否在控，判斷結(jié) 果的可信性，將數(shù)據(jù)處理、計(jì)算、并儲(chǔ)存，導(dǎo)入數(shù)據(jù)庫(kù)。 10) 核對(duì)結(jié)果，打印、簽發(fā)報(bào)告。 12) 保養(yǎng)儀器，關(guān)機(jī)。 計(jì)算方法 系統(tǒng)軟件自動(dòng)計(jì)算病人結(jié)果。 cutoff 值＝ (NC,)(HBsAg、 HBsAb、 HBeAg)或 （ HBcAb， HBeAb）。 HBcAb， HBeAb 陰性： S/CO值 ； 陽(yáng)性： S/CO值 0. 99。 使用儀器、型號(hào) 奧地利 BIOCELL酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。我國(guó)為乙肝高感染區(qū)域，因此乙肝表面標(biāo)幟 物的檢測(cè)對(duì)于判斷乙肝的感染模式，確定肝炎類型有著重要意義。 6．引用表格和文件 標(biāo)本采集、接收、保存操作程序。 洗板機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。 2．原理 HBsAg 的檢測(cè)采用雙抗體夾心 ELISA 法，即用抗 HBsAg 抗體包被聚苯乙烯微孔，樣本中的 HBsAg 與之交連后再與酶標(biāo)記的抗 HBsAg 抗體結(jié)合，經(jīng)顯色劑作用后呈現(xiàn)有色反應(yīng)。 用真空采樣管采集受檢者血液標(biāo)本 4～ 5ml。 儲(chǔ)存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。 如果 8小時(shí)內(nèi)不能完成檢測(cè)即 應(yīng)將標(biāo)本放入 2到 8176。 4．設(shè)備試劑 檢測(cè)儀器： Biocell Int 酶標(biāo)儀， DEMIII 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。濃縮洗滌液按 1/20 比例以蒸餾水稀釋備用。 質(zhì)控品 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供 , 濃度 1ng/ml。 校驗(yàn)公式 POS 。 陰性： S/CO 。 參考波長(zhǎng) 630nm。 56 樣本編號(hào) 按順序?qū)⑸暾?qǐng)單和樣本一一對(duì)應(yīng)編號(hào)。 樣本分離 將已編號(hào)的樣本配平離心， 3000r/min 5min。 樣本檢測(cè) 用微量加樣器取 50ul 相應(yīng)樣品及質(zhì)控品、陰陽(yáng)性對(duì)照品加入對(duì)應(yīng)各孔，空白對(duì)照不加。 用洗板機(jī)洗滌 6 次，拍干。顯色時(shí)間從開(kāi)始加第一滴顯色液 B 開(kāi)始計(jì)時(shí)。 終止后在 10 分鐘內(nèi)完成判讀，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定。單項(xiàng)陽(yáng)性樣本必須復(fù)查；“灰區(qū)”結(jié)果必須復(fù)查；罕見(jiàn)模式必須復(fù)查。 檢驗(yàn)完畢后，清理