【正文】 HBsAb)操作規(guī)程 編制 /時(shí)間 XXX/ 審核 /時(shí)間 XXX/ 審批 /時(shí)間 XXX/ 1．目的 規(guī)范檢測(cè)“ HBsAb” 過程。 2．原理 HBsAb 的檢測(cè)采用雙抗原夾心 ELISA 法，即用純化 HBsAg 包被聚苯乙烯微孔，樣本中的 HBsAb 與之交連后再與酶標(biāo)記的 HBsAg 結(jié)合，經(jīng)顯色劑作用后呈現(xiàn)有色反應(yīng)。 3．樣本 血清或血漿 樣品類型為受見檢者血清或血漿。 用真空采樣管采集受檢者血液標(biāo)本 4～ 5ml。 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。 儲(chǔ)存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。C)條件下不超過 8小時(shí)。 如果 8小時(shí)內(nèi)不能完成檢測(cè)即應(yīng)將標(biāo)本放入 2到 8176。C冰箱冷藏。 4．設(shè)備試劑 檢測(cè)儀器： Biocell Int 酶標(biāo)儀， DEMIII 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。 試劑： 科華公司 HBsAg 診斷試劑盒 (ELISA) 。濃縮洗滌液按 1/20 比例以蒸餾水稀釋備用。 5．標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控 室內(nèi)質(zhì)控 符合《 輸血科 室內(nèi)質(zhì)控程序》的要求。 質(zhì)控品 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提 供 , 濃度 1ng/ml。 CUTOFF 值計(jì)算公式 MAX[,MW(NEG)]。 校驗(yàn)公式 POS 。 判斷標(biāo)準(zhǔn) 陽性： S/CO。 陰性： S/CO。 測(cè)定波長 450nm。 參考波長 630nm。 6．操作步驟： 樣本編號(hào)→樣本分離、檢測(cè)儀器準(zhǔn)備、試劑準(zhǔn)備→樣本測(cè)定、錄入資料→分析質(zhì)控 /結(jié)果→打印檢驗(yàn)結(jié)果→簽發(fā)報(bào)告單。 樣本編號(hào) 按順序?qū)⑸暾?qǐng)單和樣本一一對(duì)應(yīng)編號(hào)。認(rèn)真檢查檢驗(yàn)?zāi)康?、病人姓?、 59 性別、科室、床號(hào)，血液量 3ml。 樣本分離 將已編號(hào)的樣本配平離心， 3000r/min 5min。 儀器和試劑準(zhǔn)備 根據(jù)樣本多少準(zhǔn)備試劑，增加 3 孔，分別設(shè)置空白對(duì)照、陰性對(duì)照和臨界質(zhì)控；檢測(cè)儀器按《酶標(biāo) 儀作業(yè)指導(dǎo)書 》和《 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)作業(yè)指導(dǎo)書 》操作。 樣本檢測(cè) 用微量加樣器取 50ul 相應(yīng)樣品及質(zhì)控品、陰陽性對(duì)照品加入對(duì)應(yīng)各孔，空白對(duì)照不加。 每孔再加酶標(biāo)結(jié)合物 50ul（或 1 滴）（空白對(duì)照除外），輕微振蕩 5 分鐘后，置 37℃水浴箱中孵育 30 分鐘。 用洗板機(jī) 洗滌 6 次，拍干。 每孔加顯色劑 A、 B 各 50ul（或 1 滴），混勻，密封， 37℃避光顯色 15分鐘。顯色時(shí)間從開始加第一滴顯色液 B 開始計(jì)時(shí)。 每反應(yīng)孔加終止液 50ul（或 1 滴），混勻。 終止后在 10 分鐘內(nèi)完成判讀，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測(cè)定。 先觀察室內(nèi)質(zhì)控是否在控，判斷結(jié)果的可信性，將數(shù)據(jù)處理、計(jì)算、并儲(chǔ)存，導(dǎo)入數(shù)據(jù)庫。單項(xiàng)陽性樣本必須復(fù)查；“灰區(qū)”結(jié)果必須復(fù)查；罕見模式必須復(fù)查。 核對(duì)結(jié)果，打印、簽發(fā)報(bào)告。 檢驗(yàn)完畢后，清理其桌面，血清樣本放入專用樣本貯存冰 箱內(nèi)，質(zhì)控血清盤放入冰箱；填寫操作記錄使用記錄本。 保養(yǎng)儀器，關(guān)機(jī)。 7． 控制品使用水平和頻率 質(zhì)控水平：衛(wèi)生部臨界值血清 , 每板一次 。 8．參考范圍 陰性， S/CO。 9. 臨床意義 HBsAb 是主動(dòng)接受 HBV 疫苗注射或 HBV 感染康復(fù)后所產(chǎn)生的具有保護(hù)性作用的中和抗體。一般在接種 HBV疫苗前后均應(yīng)檢測(cè)以判斷是否需要接種并了解預(yù)防效果。 輸血科 室內(nèi)質(zhì)控程序。 輸血科 預(yù)防措施程序。 HBsAb 試劑盒說明書。 標(biāo)本采集、接收、保存操作程序。 60 BIOCELL 酶標(biāo)儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序 。 洗板機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。 61 項(xiàng)目名稱 XX大學(xué) XX醫(yī)院輸血科 文件編號(hào) ZNYXXXX/MYXM303 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 ELISA 乙肝 e 抗原 (HBeAg)操作規(guī)程 編制 /時(shí)間 XXX/ 審核 /時(shí)間 XXX/ 審批 /時(shí)間 XXX/ 1．目的 規(guī)范檢測(cè)“ HBeAg” 過程。 2．原理 HBeAg 的檢測(cè)采用雙抗體夾心 ELISA 法，即用抗 HBeAg 抗體包被聚苯乙烯微孔，樣本中的 HBeAg 與之交連后再與酶標(biāo)記的抗 HBeAg 抗 體結(jié)合，經(jīng)顯色劑作用后呈現(xiàn)有色反應(yīng)。 3．樣本 血清或血漿 樣品類型為受見檢者血清或血漿。 用真空采樣管采集受檢者血液標(biāo)本 4～ 5ml。 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。 儲(chǔ)存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。C)條件下不超過 8小時(shí)。 如果 8小時(shí)內(nèi)不能完成檢測(cè)即應(yīng)將標(biāo)本放入 2到 8176。C冰箱冷藏。 4．設(shè)備試劑 檢測(cè)儀器： Biocell Int 酶標(biāo)儀， DEMIII 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。 試劑： 科華公司 HBsAg 診斷試劑盒 (ELISA) 。濃縮洗滌液按 1/20 比例以蒸餾水稀釋備用。 5．標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控 室內(nèi)質(zhì)控 符合《 輸血科 室內(nèi)質(zhì)控程序》的要求。 質(zhì)控品 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供 , 濃度 1ng/ml。 CUTOFF 值計(jì)算公式 MAX[,MW(NEG)]。 校驗(yàn)公式 POS 。 判斷標(biāo)準(zhǔn) 陽性： S/CO。 陰性： S/CO。 測(cè)定波長 450nm。 參考波長 630nm。 6．操作步驟： 樣本編號(hào)→樣本分離、檢測(cè)儀器準(zhǔn)備、試劑準(zhǔn)備 →樣本測(cè)定、錄入資料→分析質(zhì)控 /結(jié)果→打印檢驗(yàn)結(jié)果→簽發(fā)報(bào)告單。 62 樣本編號(hào) 按順序?qū)⑸暾?qǐng)單和樣本一一對(duì)應(yīng)編號(hào)。認(rèn)真檢查檢驗(yàn)?zāi)康?、病人姓名、性別、科室、床號(hào)，血液量 3ml。 樣本分離 將已編號(hào)的樣本配平離心， 3000r/min 5min。 儀器和試劑準(zhǔn)備 根據(jù)樣本多少準(zhǔn)備試劑，增加 3 孔，分別設(shè)置空白對(duì)照、陰性對(duì)照和臨界質(zhì)控；檢測(cè)儀器按《酶標(biāo) 儀作業(yè)指導(dǎo)書 》和《 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)作業(yè)指導(dǎo)書 》操作。 樣本檢測(cè) 用微量加樣器取 50ul 相應(yīng)樣品及質(zhì)控品、陰陽性對(duì)照品加入對(duì)應(yīng)各孔， 空白對(duì)照不加。 每孔再加酶標(biāo)結(jié)合物 50ul（或 1 滴）（空白對(duì)照除外），輕微振蕩 5 分鐘后，置 37℃水浴箱中孵育 30 分鐘。 用洗板機(jī)洗滌 6 次，拍干。 每孔加顯色劑 A、 B 各 50ul（或 1 滴），混勻，密封， 37℃避光顯色 15分鐘。顯色時(shí)間從開始加第一滴顯色液 B 開始計(jì)時(shí)。 每反應(yīng)孔加終止液 50ul（或 1 滴），混勻。 終止后在 10 分鐘內(nèi)完成判讀，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測(cè)定。 先觀察室內(nèi)質(zhì)控是否在控，判斷結(jié)果的可信性，將數(shù)據(jù)處理、計(jì)算、并儲(chǔ)存，導(dǎo)入數(shù)據(jù)庫。單項(xiàng)陽 性樣本必須復(fù)查；“灰區(qū)”結(jié)果必須復(fù)查；罕見模式必須復(fù)查。 核對(duì)結(jié)果，打印、簽發(fā)報(bào)告。 檢驗(yàn)完畢后，清理其桌面，血清樣本放入專用樣本貯存冰箱內(nèi)，質(zhì)控血清盤放入冰箱；填寫操作記錄使用記錄本。 保養(yǎng)儀器，關(guān)機(jī)。 7． 控制品使用水平和頻率 質(zhì)控水平：衛(wèi)生部臨界值血清 , 每板一次 。 8．參考范圍 陰性， S/CO。 9．臨床意義 HBeAg 是 HBV 病毒感染的主要標(biāo)志物之一，是 HBV 的核心部分，目前認(rèn)為其與 HBV 的復(fù)制、傳染及致病性密切相關(guān)。也是臨床治療的重要依據(jù)之一。 10．引用文件 輸血科 室內(nèi)質(zhì)控程序。 輸血科 預(yù)防措施程序。 63 HBeAg 試劑盒說明書 ()。 標(biāo)本采集、接收、保存操作程序。 BIOCELL 酶標(biāo)儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序。 洗板機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。 64 項(xiàng)目名稱 XX大學(xué) XX醫(yī)院輸血科 文件編號(hào) ZNYXXXX/MYXM304 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 ELISA 乙肝 e 抗體 (HBeAb)操