20xx年醫(yī)學(xué)專題—淋巴細(xì)胞標(biāo)志檢測-展示頁
2024-11-11 20:36本頁面
【正文】 ds） 流式細(xì)胞術(shù)分離 (FCM),第十三頁，共七十頁。i)（尼龍纖維(xiānw233。n)）,第十二頁，共七十頁。 ERFC The sueface of T lymphocyte contains the receptor (CD2) of sheep erythrocyte ,which is called E receptor for short . T lymphocytes can form E rosette with sheep erythrocytes by its E receptor. Lymphocytes + sRBC , centrifugation T lymphocytes(底) / B lymphocytes（界面(ji232。)： 淋巴細(xì)胞不同亞群其細(xì)胞表面標(biāo)志（ specific membrane molecule/surface marker） 淋巴細(xì)胞不同亞群其細(xì)胞分化抗原（antigen of cluster differentiation ；CD） 分離方法： ,第十一頁，共七十頁。,淋巴細(xì)胞亞群的分離(fēnl237。,人外周血淋巴細(xì)胞(亞群)的分純(purificcation),人外周血單個核細(xì)胞（PBMC）主含淋巴細(xì)胞, 但混有 單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板等。,Percoll混懸液(處理過的硅膠顆粒(kēl236。)人外周血淋巴細(xì)胞以密度為1.077177。ng)泛影葡胺(ficollhypaque),(1.077177。,聚蔗糖(zh232。)對倍稀釋的血液樣本,水平式離心(l237。,人外周血單個核細(xì)胞(x236。nɡ chu224。),一、原理(principle)： 紅細(xì)胞/白細(xì)胞比例不同（600～1000）：1，密度不同，沉降速度不同。)細(xì)胞分離技術(shù) (Separation of immunocytes),第五頁，共七十頁。)細(xì)胞(immune cells),指:所有參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)(yǒuguān)的細(xì)胞 包括T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及其他細(xì)胞,第四頁，共七十頁。 MHC) 細(xì)胞因子(Cytekine) 白細(xì)胞分化抗原和粘附分子(Leukocyte Differentiation Antigen and Adhesion molecule),第三頁，共七十頁。,免疫系統(tǒng)(Immune system),免疫器官(q236。,一、免疫(miǎny236。細(xì)胞(x236。bāo)免疫學(xué)檢測 （cellular immunoassay） 一、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測 (Assay of membran molecules for lymphocytes）,第一頁，共七十頁。)細(xì)胞分離技術(shù) (Technic of separation for immunocyte) 二、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志檢測技術(shù) （Assay of membran molecules for ～ ） 三、免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù) （Assay for Immunocyte Tuntion ） 四、細(xì)胞因子與黏附分子檢測技術(shù) （Assay for Cytokine and Adhesion molecule）,第二頁，共七十頁。guān)(Immune Organs) 免疫細(xì)胞(Immunocyte)★ 免疫球蛋白(Immunoglobulin) 主要組織相容性復(fù)合體 (Major Histocompatibility Complex。,免疫(miǎny236。,免疫(miǎny236。,人外周血(peripheral blood )白細(xì)胞分離(fēnl237。 二、方法(method)： 自然沉降法 （直立靜置RT30～60min，緊貼紅細(xì)胞層上的白膜層） 聚合物加速沉降法 （加某些高分子物使RBC凝集成串(ch233。n)加速沉降，如明膠）,第六頁，共七十頁。bāo)（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）的分離,加入(jiār249。xīn)20min時結(jié)果,第七頁，共七十頁。t225。0.001g/L),分離(fēnl237。0.001/g/L,第八頁，共七十頁。)) 原液密度(density)為1.135g/L+等量PBS, 高速離心 (centrifugation) 由下而上的逐減的連續(xù)密度梯度(density gradient) 淋巴細(xì)胞純度98%, 單核細(xì)胞純度78% 流程長, 步驟繁, 成本高,第九頁，共七十頁。淋巴細(xì)胞的分純： （一）紅細(xì)胞的去除（0.83%氯化銨、蒸餾水） （二）血小板的去除（離心、洗滌） （三）單核、粒細(xì)胞的去除（黏附去除，羰基(tānɡ jī)鐵粉吞噬） （四）淋巴細(xì)胞亞群的分離★,第十頁，共七十頁。),分離依據(jù)(yīj249。,Precipitation of E rosette,Erythrocyte Rosette forming cell。mi224。,黏著性（理化）： B淋巴細(xì)胞易黏附聚酰胺纖維(xiānw233。i)）表面，而T淋巴細(xì)胞則不易附著～ （例）尼龍棉柱分離 — 直接流出的是T淋巴細(xì)胞。,第十四頁，共七十頁。x236。 磁性微珠上既可標(biāo)記針對某種細(xì)胞表面抗原的特異性抗體(k224。 也可標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體(k224。,正選（positive selection）法： 磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得(hu242。)的細(xì)胞 負(fù)選（negtive selection）法： 磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞 一般而言，負(fù)選法比正選法的磁珠用量大,第十六頁，共七十頁。 ②與FACS 相比，本方法操作(cāozu242。 ③另外連續(xù)兩次過柱分選可進(jìn)一步提高分選細(xì)胞純度，通?？蛇_(dá)95－99％。,注意事項(xiàng)（Attent
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