【正文】 。 （ 3） R型：注射小白鼠，活。 （ 1） S型：注射小白鼠，死亡。 基因概念的提出 1910年以后， Man 傳規(guī)律，染色體遺傳理論發(fā)展為 《 細(xì)胞遺傳學(xué) 》 連鎖遺傳規(guī)律的提出 1941年， Beadle ，提出了“一個基因一個酶”的假說 一個基因一個酶 一般認(rèn)為 1973年是基因工程誕生的元年 上世紀(jì) 40年代 —— 70年代初 分子生物學(xué)領(lǐng)域 理論上的三大發(fā)現(xiàn) 和技術(shù)上的三大發(fā)明 對于基因工程的誕生起到了決定性的作用 。 ? 基因工程，樓士林等編著，科學(xué)出版社 《 基因工程 》 第一章 導(dǎo) 論 第二章 基因操作的工具酶 第三章 基因克隆的載體 第四章 基因克隆的策略 第五章 克隆基因的表達(dá) 第六章 基因工程的基本技術(shù) 第一章 導(dǎo) 論 第一節(jié) 基因工程的誕生 第二節(jié) 基因工程的研究內(nèi)容 第三節(jié) 基因工程的成就和前景展望 細(xì)胞的發(fā)現(xiàn) 1859年 《 物種起源 》 進(jìn)化論的提出 Mendel . (18221884). 18561864豌豆雜交實(shí)驗(yàn)。 ? 基因工程原理，徐晉麟，陳淳，徐沁主編，科學(xué)出版社?；蚬こ? 華中師范大學(xué) 陳明清 參考書： ? 基因工程原理，吳乃虎編著，科學(xué)出版社 ? 基因工程，彭銀祥，李勃，陳紅星，華中科技大學(xué)出版社。 ? 基因工程概論，張惠展編著，華東理工大學(xué)出版社。 ? 分子克隆實(shí)驗(yàn)指南， J. Sambtook, EF Frish, T Maniatis, 金冬雁，黎孟楓等譯，科學(xué)出版社。 Mendel 和遺傳規(guī)律的研究 1900年 Mendel遺傳規(guī)律被重新發(fā)現(xiàn) 遺傳學(xué)的元年1866年發(fā)表論文，提出分離規(guī)律和獨(dú)立分配規(guī)律 1909年Yohannsen . (18591927) 發(fā)表了“純系學(xué)說”首先提出了“基因”的概念，代替了 Mendel “遺傳因子” 的 概念。 第一節(jié) 基因工程的誕生 1944年， Avery DNA是遺傳物質(zhì)被證實(shí) 40年代，證實(shí) DNA是遺傳物質(zhì) 早在上世紀(jì) 20年代，已經(jīng)知道染色體由 DNA和組蛋白構(gòu)成，但組成蛋白的 氨基酸有 20種 ，而組成 DNA的 核苷酸只有 4種 ，什么是遺傳物質(zhì)？ 1928年，英國微生物學(xué)家 F. Griffith著名的肺炎雙球菌感染小白鼠實(shí)驗(yàn)。 （ 2） S型， 65℃ 加熱：注射小白鼠，活。 （ 4） 65℃ 加熱 S型 +R型：注射小白鼠，死亡。 40年代， DNA是遺傳物質(zhì)被證實(shí) 1944年，美國洛克菲勒研究所的 Oswald Avery等公開發(fā)表了改進(jìn)的肺炎雙球菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 （ 3）經(jīng) 胰蛋白酶 處理的 S型菌無細(xì)胞提取物仍有轉(zhuǎn)化作用。 Watson 和 Crick DNA雙螺旋模型的提出 50年代， DNA的雙螺旋模型的提出 和 DNA復(fù)制機(jī)理的闡明 DNA是遺傳物質(zhì)已被證實(shí)，但是 DNA是怎樣攜帶并傳遞遺傳信息的？在細(xì)胞增殖過程中， DNA是怎樣復(fù)制的？因此，對于 DNA結(jié)構(gòu)的研究成為了當(dāng)時生物學(xué)家研究的熱點(diǎn)。 隨后， DNA的 半保留復(fù)制 和 半不連續(xù) 復(fù)制機(jī)理也被闡明，為基因工程的誕生奠定了堅實(shí)的理論基礎(chǔ)。 原核生物的基因調(diào)控操縱子模型 1961年， Jacques Monod和 Fancois Jacob提出了原核基因調(diào)控的 操縱子模型 （ operon model）。 第一節(jié) 基因工程的誕生 Smith等分離并純化了限制性核酸內(nèi)切酶 Hind II， 1972年，Boyer等相繼發(fā)現(xiàn)了 Ｅ coR I 一類重要的限制性內(nèi)切酶。 工具酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用 1970年， Baltimore等和 Temin等各自發(fā)現(xiàn)了反轉(zhuǎn)錄酶，完善了中心法則，使真核基因的制備成為了可能。 這一年被定為基因工程誕生的元年。 上世紀(jì) 40年代 —— 70年代初 分子生物學(xué)領(lǐng)域 理論上的三大發(fā)現(xiàn) 和 技術(shù)上的三大發(fā)明 對于基因工程的誕生起到了決定性的作用 。 所以，植物的無性繁殖（如馬鈴薯的生產(chǎn)）、細(xì)菌的無性繁殖以及重組 DNA分子通過工程菌的繁殖等過程都是一個克隆的過程。 基因工程研究的基本步驟 從生物體中分離得到目的基因（或 DNA片段） 在體外，將目的基因插入能自我復(fù)制的載體中得到 重組 DNA分子。 選擇得到含有重組 DNA分子的細(xì)胞克隆，并進(jìn)行大量 繁殖，從而使得目的基因得到擴(kuò)增。比如， 序列分析、表達(dá)載體構(gòu)建、原核表達(dá)以及轉(zhuǎn)基因研究 和利用等。 Itakara等，化學(xué)合成的激素抑制素基因和大腸桿菌 ?半乳糖（苷）激酶基因插入到 PBR322中得到重組質(zhì)粒，并通過大腸桿菌生產(chǎn)出含有激素抑制素的嵌合型蛋白，經(jīng)溴化氰處理后釋放出了有生物活性的激素抑制素。用價值幾美元的 9升培養(yǎng)液生產(chǎn)出 50毫克的生物活性物質(zhì)，這相當(dāng)于 50萬頭羊腦的提取量。 1979年， Goeddel等，又在大腸桿菌中成功表達(dá)了 人生長激素 基因。 1981年， 用遺傳工程菌生產(chǎn)的生物制劑包括動物 口蹄疫 疫苗、 乙型肝炎 病毒表面抗原及核心抗原、 牛生長激素 等。 1983年， 基因工程生產(chǎn) 狂犬病疫苗 取得突破型進(jìn)展。 1. 對環(huán)境的影響 2. 新型病毒的出現(xiàn) 重新組合一種在自然見尚未發(fā)現(xiàn)的的生物性狀有可能給現(xiàn)有的生態(tài)環(huán)境帶來不良影響。 4. 人造生物擴(kuò)散 新組成的重組 DNA生物體的意外擴(kuò)散可能會出現(xiàn)不同程度的潛在危險。 1974年美國國立衛(wèi)生研究院（ NIH）考慮到重組 DNA的潛在危險，提請 Paul Berg博士組成一個重組 DNA咨詢委員會。 2. 專家的態(tài)度 1976年 6月 23日， NIH正式公布了 “ 重組DNA研究的安全準(zhǔn)則 ” 。 1979年、 1981年、 1989年 NIH又做了多次修改，放寬了許多限制。 （ 1）實(shí)驗(yàn)室的物理安全 4. 基因工程的安全措施 一般裝備良好的普通微生物實(shí)驗(yàn)室。 全負(fù)壓 的實(shí)驗(yàn)室，同時裝備安全操作柜。 具有最高安全防護(hù)措施。 （ 2）實(shí)驗(yàn)室的生物安全 分 3 級（大腸桿菌）： EK1— EK3級。 ② EK2EK3級大腸桿菌 第一個“安全”菌株是 K12（ 1976年），很不實(shí)用，已淘汰。 不會自動從“安全”的菌株轉(zhuǎn)移到“不安全”的菌株中。如 pMB9， pBR322等。 （ 1）提高 CO2的固定率 改變光能交換系統(tǒng)的分子的基因結(jié)構(gòu)。 2. 提高豆科植物的固氮效率 是農(nóng)業(yè)生物技術(shù)的主要內(nèi)容。 3. 轉(zhuǎn)基因植物 世界各國轉(zhuǎn)基因作物大田釋放情況（ ） 轉(zhuǎn)基因作物特性 批準(zhǔn)項(xiàng)數(shù) 所占比例 抗除草劑 1297 % 抗蟲 1046 % 產(chǎn)品質(zhì)量高 886 %