分離工程第八章ppt課件-展示頁(yè)
2024-09-26 18:21本頁(yè)面
【正文】 圍 ? 7. 5%凝膠 10kD~1000kD ? %凝膠 1000kD~5000kD ?瓊脂糖或瓊脂糖 與聚丙烯酰胺混合物 5000kD ?孔徑從小到大。 ?聚丙烯酰胺（丙烯酰胺）單體是神經(jīng)毒素，可積累。 ? 凝膠中的大分子分離取決于它的 電荷 、 尺寸 和 形狀 ? 凝膠的這種用于分離不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸篩分能力（ Size sieving capacity），這種現(xiàn)象被稱為 分子篩效應(yīng) （ molecular sieving effect） 分子篩效應(yīng) 圖中 A， B， C均為陽(yáng)離子，在直流電場(chǎng)作用下電泳情況示意圖 分子量大小依次為 MA=MBMC，所帶電荷量相同 QA=QB=QC。 ?凝膠電泳：凝膠過(guò)濾作用（分子篩作用）電泳淌度正比于 電荷數(shù)（電荷效應(yīng)） ?單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的運(yùn)動(dòng)速度稱為離子淌度或遷移率。 ?多孔介質(zhì)稱為載體，應(yīng)用最普通的是以濾紙或凝膠為載體故稱為紙電泳法或凝膠電泳法。 ?（ 2）區(qū)帶電泳：在支持物上電泳時(shí)蛋白質(zhì)混合物被成若干區(qū)帶。 / c m )E(V ( c m / s )伏特電場(chǎng)強(qiáng)度泳動(dòng)速度泳動(dòng)度（遷移率） ??缺點(diǎn)：電泳中因通電發(fā)熱等原因而引起的對(duì)流，?；厥挂逊蛛x的溶質(zhì)重新混合，為防止對(duì)流，可將電泳在多孔介質(zhì)中進(jìn)行，稱為區(qū)帶電泳。 ?瑞典管內(nèi)蛋白質(zhì)溶液和緩和液間有清晰可見(jiàn)界面，然后加一電場(chǎng)，由于界面處存在濃度梯度因而產(chǎn)生折射梯度，利用適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)系統(tǒng)可以觀察到界面的移動(dòng)。 ? 20世紀(jì)初，電泳法用于蛋白質(zhì)的分離，20世紀(jì) 70年代，電泳多用于分析目的。 ?電泳：是荷電溶質(zhì)在電場(chǎng)作用下發(fā)生定向泳動(dòng)的現(xiàn)象。第八章 電泳 本章主要知識(shí)點(diǎn) ? 電泳的概念 ? 電泳的基本原理 ? 電泳技術(shù)的分類 ? 常用的凝膠電泳技術(shù)有哪些？ ? 電泳裝置的基本組成 ? 聚丙稀酰胺凝膠電泳的一般過(guò)程 ? SDSPAGE電泳的基本原理及過(guò)程 ? 瓊脂糖電泳的特點(diǎn)及其應(yīng)用 ? 等電聚焦電泳的基本原理 ? 雙相電泳的概念及其特點(diǎn) 電泳的簡(jiǎn)單原理 ? 蛋白質(zhì)、核酸、多糖等常以顆粒分散在溶液中，它們的凈電荷取決于介質(zhì)的 H+濃度或與其它大分子的相互作用。 ? 帶電粒子在電場(chǎng)中的遷移方式主要依據(jù)分子尺寸大小 和 形狀 、 分子所帶電荷 或 分子的生物學(xué)與化學(xué)特性 。 ?電泳分離是利用荷電溶質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度的差別進(jìn)行分離的方法。 ?（ 1）自由電泳：是最早的一種電泳形式，目前已很少使用。 ?在電泳過(guò)程中，每個(gè)移動(dòng)的界面相當(dāng)于某一特定的蛋白質(zhì)，通過(guò)一定計(jì)算可得其泳動(dòng)度。 ?區(qū)帶電泳：應(yīng)用支持介質(zhì)的電泳，它表示在一個(gè)電場(chǎng)的作用下，在某一支持物上能將一個(gè)樣品組成徹底分離成若干條區(qū)帶的過(guò)程。 ?根據(jù)支持物物理性質(zhì)的不同可分為 4類： ?濾紙電泳和薄膜電泳，粉末電泳，細(xì)絲電泳，凝膠電泳。 第一節(jié) 凝膠電泳法 ?凝膠電泳的作用是基于凝膠過(guò)濾作用（分子篩作用）和電泳淌度的雙重機(jī)理，所以它能獲得較高的分辨率。 聚丙烯酰胺凝
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