【正文】 H EA L T H Co l u m b i a U n i ver s it yPhotocleavable linker and spacer MS sensitivity enhancer Variable mass unit DETECTION OF 58 DIFFERENT MASS TAGS BY APCIMS T H E J E R O M E L . AN D D A W N G R EE N EIN FE C T IO U S D ISE A SE L AB O RA T O R YMAILMA N S C H OO L OF P U B L I C H EA L T H Co l u m b i a U n i ver s it y目前，建立在此技術上的有呼吸道病原體檢測模塊（包括 19個病毒和 3種細菌），流感病毒亞型檢測模塊，出血熱病原體檢測模塊，痘疹病毒檢測模塊和腦炎腦膜炎病原體檢測模塊。 優(yōu)點：由于使用光敏感的分子量標簽，增強了multiplex PCR引物設計的適應性和靈活性，使檢測通量有大幅度的提高。 Electronmicrographs Adenovirus Rotavirus (courtesy of Linda Stannard, University of Cape Town, .) 免疫熒光檢測 Positive immunofluorescence test for rabies virus antigen. (Source: CDC) (Virology Laboratory, YaleNew Haven Hospital) 細胞病變效應 (cpe) ? Some viruses kill the cells in which they replicate, often easily visible as cpe, other viruses produce little or no cpe ? Typically rounding or detaching of cells and cell fusion (syncytia) From Principles of Virology , Flint et al ASM press From Principles of Virology , Flint et al ASM press 實 驗 動 物 Laboratory animals animal models of human infection. Historically the only way to study viruses was from animal to animal. ? Problems 1) inconvenient and expensive, 2) not a defined system leads to generation of virus mutants, 3) animal welfare issues, ? Advantages 1) some viruses can only be studied in this way, 2) gives unique insight into virus pathogenesis ? Embryonated eggs From Principles of Virology , Flint et al ASM press 核酸診斷的發(fā)展史 ? 核酸分子雜交 ? 聚合酶鏈反應（ PCR） ? 核酸定量分析 核酸的直接檢測 核酸擴增檢測 (PCR) 定性 PCR 定量 PCR ?核酸分子雜交 (nucleic acid molecula hybridization) genome probe 32P 35S 3H 125I 生物素 地高辛 酶 genome genome genome probe probe probe 檢測方法：放射自顯影 底物顯色 化學發(fā)光 常用核酸分子雜交技術 斑點雜交（ spot blot hybridization) 凝膠電泳印跡轉(zhuǎn)移雜交（ Southern blot hybridization) 原位雜交（ insitu hybridization) 聚合酶鏈反應（ PCR） 基本步驟和原理 變性（高溫） 退火（低溫） 延伸（適溫） 每一循環(huán) 模 板 引物 引物 dATP dGTP dTTP dCTP Taq酶 PCR原理和步驟 定量 PCR 熒光實時定量 PCR ? Taqman水解探針法 ? 雜交雙探針法 ? 分子信標（環(huán)性探針）法 ? Amplisensor能量轉(zhuǎn)換法等 新發(fā)傳染病的病原體？？？ 病原學發(fā)現(xiàn)的 “科赫三定律” 一、每種傳染病必定能發(fā)現(xiàn)其病原體； 二、能培養(yǎng)出該病原體的純種； 三、以培養(yǎng)出的純種病原體接種于動物可以產(chǎn)生相同的病變。 ? 抗原成分檢測 (ELISA,免疫熒光等 )。 ? 影像學檢查 . 傳統(tǒng)的和常規(guī)的病原學 診斷 ? 分離培養(yǎng) (細胞 ,組織動物 )。 ? 免疫學檢查 。 ? 生化檢查 。其中，及時正確診斷最為關鍵，是有效治療的基礎，也是制定預防策略的依據(jù)。 特效藥物的出現(xiàn) 。 人類與傳染病較量中的四方面重大突破 隔離檢疫制度的建立 。 ? 一個典型例子是艾滋病毒，最初原是在非洲猿猴身上發(fā)現(xiàn)的一種病毒，其后傳播至人類身上，更演變成世紀絕癥。 新發(fā)傳染?。瓌游飩鞑? 與人類行為及環(huán)境的改變有關 ? 過去 25年來曾出現(xiàn) 38種新病原體襲擊人類，其中四分三為源自動物的疾病，包括艾滋病、馬爾堡出血熱、 SARS及禽流感等。 ?前所未有的速度產(chǎn)生突變，并傳給人類，就如艾滋病、馬爾堡出血熱、 SARS以及現(xiàn)正肆虐全球的禽流感等難抗病毒。傳染病病原體的診斷技術 上海市（復旦大學附屬）公共衛(wèi)生中心 應急檢測實驗室 胡蕓文 Friend or Foe? Rotavirus Ebola virus Bacterium Algae Protozoan Virus 1973年以來部分新發(fā)的傳染病 ? 1973 輪狀病毒 嬰兒腹瀉的主要病因 ? 1975 細小病毒 B19 5號病，慢性溶血性貧血的再障危象 ? 1976 隱孢子蟲 隱孢子蟲病，急性小腸結腸炎 ? 1977 埃博拉病毒 埃博拉出血熱 ? 1977 嗜肺軍團菌 軍團病 ? 1977 漢坦病毒 腎綜合征出血熱 ? 1977 空腸彎曲桿菌 空腸彎曲菌腸炎 ? 1977 丁型肝炎病毒 丁型肝炎 ? 1980 嗜人 T細胞病毒 I型 T細胞淋巴瘤／白血病 ? 1981 金黃色葡萄球菌產(chǎn)毒株 中毒性休克綜合征 ? 1982 大腸埃希菌 O157： H7 出血性結腸炎 ? 1982 嗜人 T細胞病毒 11型 毛細胞白血病 ? 1982 伯氏疏螺旋體 萊姆病 ? 1983 人類