【正文】 放在單位寬度的比 色皿中的吸光度。 （ 2）朗伯 比爾定律的數(shù)學表達式為： n A=? κ ibci i=1 κ表示物質(zhì)分子對某一波長的光的吸收本領，稱為 吸收 系數(shù) 。 3. 影響對比度的因素 對比度的大小與 顯色劑的結(jié)構(gòu) 、 反應 條件 、 金屬離子的性質(zhì) 及 絡合物的組成 有 關。 如果顯色反應的對比度較小，此時 測定 波長 決 定于 ?MeR?/?HnR?的比值或 ?MeR??HnR? 的差值。 如果顯色反應的對比度大，則過量試劑 對測定的影響較?。环粗?，對比度小，則試 劑對測定的影響就比較大。 一般要求顯色劑與有色化合物的對比度 ??在 60nm以上。 ? 分光光度法的對比度 1. 對比度的概念 在光度法中， 對比度 是指顯色劑與金屬離 子所形成絡合物（ MeR）的最大吸收峰波長 （ ?MeRmax）與顯色劑本身（ HnR）最大吸收峰波長（ ?HnRmax） 之間的差值。 電荷遷移吸收帶的譜帶較寬，吸收強度 大，最大波長處的摩爾吸收系數(shù) ?max可大于 104 L? cm1?mol1。 特點 ：電荷轉(zhuǎn)移吸收光譜的最大特點 是：吸收強度大，摩爾吸收系數(shù) ?一般超過 104L/ (mol ?cm)。 ii) 金屬 ?配位體的電荷轉(zhuǎn)移 產(chǎn)生這種電荷轉(zhuǎn)移的 必要條件 是：金屬 離子 容易被氧化（處于低氧化態(tài)）；而配位 體容易被還原，配位體具有空的反鍵軌道， 可接受從金屬離子轉(zhuǎn)移出來的電子 。 機理 ： 在這一吸收過程中，實際上是 發(fā)生了一個電子從體系的一部分（稱為： 電子給予體 ）轉(zhuǎn)移到體系的另一部分（稱 為： 電子接受體 ）的過程，因而這樣獲得 的吸收光譜稱為電荷轉(zhuǎn)移吸收光譜。 特點 ： 配位體場吸收光譜通常位于可見 光區(qū)；強度弱，摩爾吸收系數(shù) ?約為 ~100 L/(mol ?cm) 。 當過渡金屬絡合物吸收了可見或紫外區(qū)的某部 分波長的光時， d電子或 f電子就可以從較低的 能級躍遷到較高的能級，稱為 d→ d躍遷或 f→ f 躍遷。 （ 1） 配位體場吸收光譜 概念 ： 配位體場吸收譜帶指的是過渡金 屬水合離子或過渡金屬離子與顯色劑（通常 是有機化合物）所形成的絡合物在外來輻射 作用下，由于吸收了適當波長的可見光（有 時是紫外光），從而獲得的相應吸收光譜。 ４ . 無機化合物的紫外 可見吸收光譜 在溶液中無機絡合物的紫外 可見吸收光 譜，其吸收帶往往寬而少。 （ 4） E吸收帶 ：在苯環(huán)結(jié)構(gòu)中三個乙烯鍵的 環(huán)狀共軛系統(tǒng)中， ?→ ?*躍遷所產(chǎn)生的芳香 族化合物的特征吸收帶，稱為 E帶。 苯的 B帶吸收在 230~270nm呈精細的振 動結(jié)構(gòu)。cm1），含 共軛生色基的化合物的紫外譜都有這種吸收 帶。 其特點是強度高（ ?max104L ? 隨著溶劑的 極性增大，會產(chǎn)生紫移。 ? 一般 ?max100L/(mol （ 1） R吸收帶 ： R帶由 n→ ?*的躍遷引起的吸 收帶。 綜上所述： 發(fā)生在電磁光譜的紫外和可 見光區(qū)內(nèi)的，由于電子的躍遷或轉(zhuǎn)移而引起 的吸收光譜共有以上 八種 價電子躍遷類型。cm）； ?隨著溶劑極性的增加， ?→ ?*躍遷所產(chǎn)生的 吸收峰紅移， n→ ?*躍遷所產(chǎn)生的吸收峰藍移。 n→ ?*、 ?→ ?*躍遷 區(qū)別 ： ?n→ ?*（ ?， 10~ 100L/mol ?其中 ?→ ?*、 ?→ ?*、 ?→ ?*三種躍遷需要 能量較大，吸收峰小于 200nm，位于真空紫 外區(qū)。 （ 1）根據(jù)分子軌道理論，此三種電子的能級 高低次序是： ??n?*?*。 (b) 雙鍵 ?電子 。 2. 紫外 可見吸收光譜中價電子躍遷的類型 在有機物中，有幾種不同的價電子。 ?玻璃器皿及有關光學元件不適合作紫外分 析之用，是由于玻璃對波長小于 300nm的電 磁波產(chǎn)生強烈吸收的緣故。 （ 2） 紫外 可見光譜區(qū)域范圍： ?紫外 可見光譜區(qū)域范圍： 10~400nm稱為 紫外區(qū)， 400~780nm為可見光區(qū)。 分子的總能量可寫為： E=En + Et + Ee+ Ev+ Er 由 于 En在一般化學實驗條件下不發(fā)生變 化，分子的平動能 Et又比較小，因此當分子 能級發(fā)生躍遷時，能量的改變?yōu)椋? ?E=?Ee + ?Er +?Ev ? E（總） = ? Ee + ? Ev + ? Er ? ? ? 1~20eV ~1eV ? ? ? 相當于紫外 相當于紅 相當于紅外光 可見光能量 外光能量 甚至微波的能量 電子能級躍遷時伴隨振動能級和轉(zhuǎn)動能 級的躍遷，因此電子光譜（也稱：紫外 可見 吸收光譜），得到的也是由許多譜線聚集而 成的譜帶。雙波長分光光度計迅速 發(fā)展和商品化。 20世紀 60年代，雙光束自動記錄光度計 問世。 20世紀 30年代，光電比色計和分光光度 計才被引入實驗室。 最初，比色測定是在比色管中進行的。 在經(jīng)典光度法的基礎上，又發(fā)展了雙波 長分光光度法、動力學分光光度法等，使光 度分析的內(nèi)容和應用范圍進一步擴大。 硫氰酸鹽法和亞鐵氰化物法測定鐵， Nessler法測氨，硫氰酸鹽法測鉬，都是 19世 紀中葉就已提出來的分析方法。 1833年， Brewster在提取葉綠素及胡蘿卜 素的研究中，注意到有機化合物的吸收光譜。第二章 紫外 可見分光光度法 （ UltravioletVisible Spectrophotometry） 紫外 可見分子吸收光譜法 （ UltravioletVisible Molecular Absorption Spectrometry） ? 分光光度分析法發(fā)展簡史 1729年， Bouguer首先發(fā)現(xiàn)溶液對光的吸 收與液層厚度之間的關系。 1760年 ， Lambert就此基本定律進行了數(shù) 學運算，確定了相應的關系式。 然而某些作者認 為比色法起始于 1852年， 因為在這一年， Beer參考了 Bouguer和 Lambert 的早期著作，提出了比色法的基本定律。 隨著對光度分析方法的不斷研究和深 入，人們對分析方法的靈敏度和選擇性也提 出了更高的要求。 近年來，隨著有機試劑的迅猛發(fā)展，使 大量的有機試劑應用到分析測試領域，靈敏 度、選擇性得到不斷提高。 19世紀末，開始使用帶濾光片的目視比 色計。 20世紀初期的分光光度計多為單光束手 控型。 20世紀 70年代開始，微處理機控制的分 光光度計不斷出現(xiàn)。 ? 分子吸收光譜概述 1．分子吸收光譜產(chǎn)生的本質(zhì) 在分子中，除了原子的核能 En，質(zhì)心在 空間的平動能 Et外，還有電子運動能 Ee，原 子之間的相對振動能 Ev，以及分子轉(zhuǎn)動能 Er 等。 （ 1）紫外 可見吸收光譜產(chǎn)生的本質(zhì) ： 紫外 可見吸收光譜產(chǎn)生的 本質(zhì) 是由物質(zhì) 分子中價電子的能級躍遷所產(chǎn)生的。 ? 10~200nm稱為遠紫外區(qū)， 200~400nm稱為 近紫外區(qū)。所以，作紫外分 析時，一般采用石英制件。 以甲醛為例： 例： HC=O： (a) 單鍵 ?電子 。 H (c)未成對的獨對 (孤 )電子－