【正文】 步目的。 ? 舉例：過濾分離法、密度梯度離心法、 膜洗脫（常用）等。 ? 此法可在不影響微生物代謝的情況下獲得同步培養(yǎng)物。 獲得微生物同步生長的方法 ? 選擇法 ? 誘導(dǎo)法 同步生長的細(xì)胞經(jīng)過 2~3個(gè)分裂周期后會喪失同步性。通過分析此群體在各階段的生物化學(xué)特性變化，來間接了解單個(gè)細(xì)胞的相應(yīng)變化規(guī)律。簡單地說，生長就是有機(jī)體的細(xì)胞組分與結(jié)構(gòu)在量方面的增加。 通常對單細(xì)胞微生物來說 ，既可測定細(xì)胞數(shù)目 ， 又可測定生長量；而對多細(xì)胞微生物 (尤其是絲狀真菌 )， 則常以菌絲生長的長度等作為生長指標(biāo) 。因此 ， 在微生物學(xué)的研究和應(yīng)用中 ， 通常是測定群體的增加量 ， 即群體的生長 。 對一些生理類型比較特殊的微生物 ， 為了提高分離機(jī)率 ， 往往在涂布分離前先進(jìn)行富集培養(yǎng) ， 其目的是提供一個(gè)特別設(shè)計(jì)的培養(yǎng)環(huán)境 ， 以幫助所需的特殊生理類型的微生物的生長 ， 而不利于其他類型微生物的生長 。 利用這些特性 ，便可配制成適合于某種微生物生長而限制其他微生物生長的各種選擇性培養(yǎng)基 ， 以達(dá)到純種分離的目的 。 有些微生物生長適于酸性環(huán)境 ， 有些則適于堿性環(huán)境 。 此法需要非常熟練的操作人員 ， 多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究中采用 。 單細(xì)胞挑取法 ? 這種方法是從待分離的材料中挑取一個(gè)細(xì)胞來培養(yǎng) ， 從而獲得純培養(yǎng) 。 用其他工具如彎形玻璃代替接種環(huán) ， 在培養(yǎng)基表面涂布 ， 亦可得到同樣結(jié)果 。 由于連續(xù)劃線 ， 微生物逐漸減少 ， 劃到最后 ， ?？尚纬蓡蝹€(gè)孤立的菌落 。 劃線法 ? 將已熔化的培養(yǎng)基倒入無菌平皿 ， 冷卻凝固后 ，用接種環(huán)沾取少許待分離的材料 ， 在培養(yǎng)基表面進(jìn)行平行劃線 、 扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線 ， 微生物將隨著劃線次數(shù)的增加而分散 ，經(jīng)保溫培養(yǎng)形成菌落 。 如果稀釋得當(dāng) ， 平皿上就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落 ， 這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)胞繁殖形成的 。 最常用的方法有稀釋平板法 、 劃線法 、 單細(xì)胞挑取法及利用選擇培養(yǎng)基分離法等 。 微生物學(xué)中將在實(shí)驗(yàn)室條件下從一個(gè)細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代稱為純培養(yǎng) 。第六章 微生物的生長及其控制 ? 第一節(jié) 微生物生長的測定 ? 第二節(jié) 微生物的生長規(guī)律 ? 第三節(jié) 影響微生物生長的主要因素 ? 第四節(jié) 微生物培養(yǎng)法概論 ? 第五節(jié) 微生物生長的控制 第一節(jié) 微生物生長的測定 一、 微生物的純培養(yǎng) 二、 微生物生長的測定 （一）微生物細(xì)胞數(shù)目的測定 （二）微生物生長量的測定 （三）絲狀微生物菌絲長度的測定 一、微生物的純培養(yǎng) ? 微生物在自然界中不僅分布很廣 ， 而且都是混雜地生活在一起 。 要想研究或利用某一微生物 ， 必須把混雜的微生物類群分離開來 ，以得到只含一種微生物的培養(yǎng) 。 純培養(yǎng)的分離 ，是研究和利用微生物的第一步 ， 是微生物工作中最重要的環(huán)節(jié)之一 。 純培養(yǎng)的分離方法 稀釋倒平板法 劃線法 選擇培養(yǎng)基分離法 單細(xì)胞挑取法 稀釋倒平板法 （ 傾注法（混菌法）、涂布法 ） ? 這是最常用的純種分離法 ， 先將待分離的材料作一系列的稀釋 (如 1： 1： 100、 1：1000、 1： 10， 000…… )， 然后分別取不同稀釋液少許 ， 與已熔化并冷卻至 45℃ 的瓊脂培養(yǎng)基相混合 ， 搖勻后 ， 傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中 ， 待瓊脂凝固后 ， 保溫培養(yǎng)一定時(shí)間即可出現(xiàn)菌落 。 隨后挑取該單個(gè)菌落 ，或重復(fù)以上操作數(shù)次 ， 便可得到純培養(yǎng) 。 劃線開始的部分細(xì)菌分散度小 ， 形成的菌落往往連在一起 。 這種單個(gè)菌落可能由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來 ， 故可獲得純培養(yǎng) 。 此法較為簡便 。 具體方法是將顯微鏡挑取器裝置在顯微鏡上 ， 把一滴菌懸液置于載玻片上 ， 用安裝在顯微鏡挑取器上的極細(xì)的毛細(xì)吸管 ， 在顯微鏡下對準(zhǔn)某一個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞挑取 ， 再接種到培養(yǎng)基上培養(yǎng) 。 利用選擇培養(yǎng)基分離法 ? 不同微生物需要不同的營養(yǎng)物質(zhì) 。 各種微生物對不同的化學(xué)試劑如消毒劑 (酚 )、 染料 (結(jié)晶紫等 )、 抗生素及其他物質(zhì)等具有不同的抵抗能力 。另外 ， 也可以將待分離的樣品先進(jìn)行適當(dāng)處理 ， 以消除不希望分離到的微生物 。 選擇培養(yǎng)基分離法 sample 1 ml 9 ml 10 100 1000 104 105 106 107 牛肉膏培養(yǎng)基 土豆培養(yǎng)基 高氏培養(yǎng)基 ?微生物純培養(yǎng)分離方法的比較 稀釋平板法 既可定性，又可定量，用途廣泛 平板劃線法 方法簡便，多用于分離細(xì)菌 單細(xì)胞挑取法 局限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究 利用選擇培養(yǎng)基法 適用于分離某些生理類型 較特殊的微生物 二、微生物生長的測定 ? 微生物特別是單細(xì)胞微生物 ， 體積很小 ， 個(gè)體的生長很難測定 ， 而且也沒有什么實(shí)際應(yīng)用價(jià)值 。 ? 測定不同種類 、 不同生長狀態(tài)微生物的生長情況 ，需要選用不同的指標(biāo) 。 （一）微生物細(xì)胞數(shù)目的測定 －－適用于單細(xì)胞微生物或絲狀微生物的孢子 ? 直接計(jì)數(shù)法 －－總菌計(jì)數(shù) 計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法（常用） 比例計(jì)數(shù)法 ? 間接計(jì)數(shù)法 －－活菌計(jì)數(shù) 平板菌落計(jì)數(shù)法 液體稀釋法 厭氧菌菌落計(jì)數(shù) ? 其他計(jì)數(shù)法 比濁法 膜過濾法 血球計(jì)數(shù)板 各種型號的全自動血球計(jì)數(shù)儀 活菌計(jì)數(shù)的一般步驟 （二）微生物生長量的測定 －－適用于一切微生物 ? 直接法 測體積法 稱重法 ? 間接法 含氮量測定法 DNA含量測定法 其他生理指標(biāo)法 （三）絲狀微生物菌絲長度的測定 ? 培養(yǎng)基表面菌體生長速率測定法 ? 培養(yǎng)料中菌體速率測定法 ? 單個(gè)菌絲頂端生長速率測定法 第二節(jié) 微生物的生長規(guī)律 一、微生物的個(gè)體生長和同步生長 二、單細(xì)胞微生物的典型生長曲線 三、微生物的連續(xù)培養(yǎng) 四、微生物的高密度培養(yǎng) 一、微生物的個(gè)體生長和同步生長 ? 微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷地吸收營養(yǎng)物質(zhì)，并按照自己的代謝方式進(jìn)行代謝活動，如果同化作用大于異化作用，則細(xì)胞質(zhì)的量不斷增加，體積得以加大，于是表現(xiàn)為生長。 ? 同步培養(yǎng)技術(shù)： 是指設(shè)法使某一群體中的所有個(gè)體細(xì)胞盡可能都處于同樣細(xì)胞生長和分裂周期的一種培養(yǎng)方式。 ? 同步生長 ：通過同步培養(yǎng)的手段而使細(xì)胞群體中各個(gè)體處于分裂步調(diào)一致的生長狀態(tài)的一種生長方式。 離心分離法 過濾分離法 膜洗脫法 控制溫度 控制培養(yǎng)基成分 抑制 DNA合成法 選擇法 ? 又稱機(jī)械篩選法，是通過物理學(xué)方法從隨機(jī)、不同步群體中選擇出同步的群體。 ? 若微生物在相同發(fā)育階段大小不一，則不適宜用此法。 誘導(dǎo)法 ? 誘導(dǎo)因子：不影響微生物生長，可特異性抑制細(xì)胞分裂，