菌種的復蘇傳代及保存標準程序-展示頁
2025-07-24 02:50本頁面
【正文】 瓊脂或改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基或適宜的液體培養(yǎng)基。：已解凍的凍存管不可再凍存。（細菌在30~35℃恒溫培養(yǎng)1824小時，真菌在23~28℃恒溫培養(yǎng)2448小時，黑曲霉*培養(yǎng)5~7天）?；蛴媒臃N環(huán)取菌懸液劃線接種于瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基上。%酒精棉球擦拭菌種凍存管外壁，稍干。：，室溫下放置使其自然解凍。②培養(yǎng)基：根據(jù)菌種的特性選擇適宜的液體培養(yǎng)基（如營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基10ml、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基12ml或改良馬丁培養(yǎng)基10ml等）、瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基。，可用接種環(huán)直接刮取第1代凍存菌懸液復蘇后轉(zhuǎn)種至瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基上生長的純菌落，再接種至細菌凍存液中。標明菌名、編號及凍存日期等。~，將凍干菌復溶后，吸取菌懸液加入到細菌凍存液中，混勻。 ：①凍存保護液（40%無菌甘油）及滅菌凍存管。如發(fā)現(xiàn)菌型不典型，可進行平板分離單菌落。（一般細菌在30~35℃，真菌在23~28℃）培養(yǎng)24h。，在火焰旁吸取適用液體培養(yǎng)基少許，加至菌種管底部，將凍干菌攪動促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，接種至液體培養(yǎng)基內(nèi)。，將菌種安瓿的封口一端在火焰上灼燒紅熱，用滅菌滴管吸取液體培養(yǎng)基少許，滴在灼熱的菌種安瓿封口一端，使其驟冷而炸裂。：、滅菌滴管、滅菌雙碟及鑷子、培養(yǎng)基移入工作臺。②培養(yǎng)基：根據(jù)菌種的性質(zhì)選擇合適的液體培養(yǎng)基（營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基）、營養(yǎng)瓊脂（或改良馬丁瓊脂）斜面數(shù)支。使用前需將其復蘇。操作中使用過的滴管、吸管及菌種管等均需放入消毒液中浸泡，試驗結束后經(jīng)121℃30分鐘高溫滅菌處理。職責：質(zhì)管部生物測定人員對本規(guī)程的實施負責。菌種的復蘇傳代及保存標準程序目的：建立菌種的復蘇、傳代及保存標準程序。范圍：適用于檢定用菌種的復蘇、傳代及保存的操作。內(nèi)容：菌種的復蘇與傳代操作均應在生物檢定室陽性對照間或?qū)Ｓ贸瑑艄ぷ髋_內(nèi)進行。檢定用標準菌種，由中國藥品生物制品檢定所提供，為冷凍干燥菌種(0代)。：①用具：滅菌1ml滴管、滅菌雙碟、滅菌鑷子、砂輪、酒精燈、接種環(huán)。③消毒液：75%酒精、碘酒、%新潔爾滅或84消毒液等。，再75%酒精棉擦凈菌種管外壁，放在滅菌雙碟內(nèi)待干。，在火焰旁，將炸裂的管口打開后，把菌種安瓿放入滅菌雙碟內(nèi)。用接種環(huán)取菌液劃線接種于瓊脂斜面培養(yǎng)基上。 取出培養(yǎng)物（第1代），仔細觀察菌苔形態(tài)、有無雜菌，必要時涂片、革蘭氏染色鏡檢，若呈典型菌落即可應用。 為保證工作用菌株的傳代次數(shù)不超過5代，并減少購買凍干菌種的次數(shù)，可在對凍干菌種復蘇的同時制備部分菌懸液（第1代）冷凍保存，并將此凍存菌液復蘇后的第2代
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