dbs45023-20xx食品安全地方標準水牛乳及其制品中摻入牛屬乳的定性檢測pcr法-展示頁
2024-07-29 22:38本頁面
【正文】 性引物，擴增水牛12S rRNA基因片段大小為220bp ，擴增牛屬牛12S rRNA基因片段大小為346bp。陰性質控對照在PCR擴增時，用雙蒸水代替模板，其它操作相同。 陽性摻入對照從生水牛乳與生牛屬乳比例為1：：，經電泳檢測會在220bp和346bp位置各出現一條電泳條帶。由“熱變性→復性→延伸”三步反應組成一個PCR循環(huán)，經過多次循環(huán)反應，使目標DNA得以大量擴增。水牛乳制品以生水牛乳為原料，經過相應工藝加工制成的液態(tài)乳、發(fā)酵乳和干酪等各種產品的總稱。GB/T —2004 轉基因產品檢測實驗室技術要求GB/T 6682—2008 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3 術語和定義水牛乳水牛屬動物（Bubalus bubalis ）乳腺分泌產生的乳白色液體物質。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。10水牛乳及其制品中摻入牛屬乳的定性檢測 PCR法1 范圍本標準適用于水牛乳及其制品中摻入牛屬乳的 PCR 定性檢測。本標準起草單位：廣西壯族自治區(qū)水牛研究所、廣西壯族自治區(qū)分析測試研究中心。ICS?點擊此處添加ICS號點擊此處添加中國標準文獻分類號?????DBS45廣西壯族自治區(qū)地方標準DBS 45/023—20154?????食品安全地方標準 水牛乳及其制品中摻入牛屬乳的定性檢測PCR法???（報批稿）??（審定稿報批稿）2014 2015 －XX 03 －XX05發(fā)布2014 2015 －XX 04 －XX05實施?????廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生計生委廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā)布????????發(fā)布????? DBS 45/023—20154前??言本標準按照GB/T －2009的格式編寫。本標準由廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會提出。本標準起草人：曾慶坤、林波、黎穎、李玲、盧安根、杜寒春、巫堅、黎德全、黃麗、劉永強。 2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。牛屬乳牛屬動物（Bos taurus），包括荷斯坦和娟姍牛乳腺分泌產生的乳白色液體物質及其制品。PCR(聚合酶鏈反應)聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction, PCR）是一種在體外快速擴增特定基因或DNA片段的方法。特異性引物針對特定模板 DNA 片段設計的兩段與模板兩端分別互補的一對寡核苷酸序列，在PCR反應中與模板 DNA 兩端分別特異性結合。 陰性摻入對照從生水牛乳中按照6..1..1的操作提取得到的總DNA，電泳檢測僅在220bp位置出現一條電泳條帶。4 方法原理采用DNA提取試劑或試劑盒，提取樣品中的DNA，以提取的DNA為模板進行PCR擴增，擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳，對比DNA標準分子量條帶，檢驗PCR產物是否有大小為220bp的水牛特異性條帶或346bp的牛屬特異性條帶，特異性條帶的核苷酸序列信息見附錄A，從而對水牛乳或水牛乳制品中是否摻入牛屬乳進行檢驗和判斷。引物序列見附錄 ，使用前先用滅菌雙蒸水稀釋，引物稀釋后分裝成小劑量置于 20 ℃保存?zhèn)溆??！?DNA抽提試劑酚氯仿異戊醇法抽提DNA試劑如下:消化緩沖液（10 mmol/L TrisCl，；2 mmol/L EDTA，pH ；% SDS；75 mmol/L NaCl）；20mg/mL 蛋白酶K；Tris飽和苯酚；氯仿；3 mol/L 乙酸鈉；無水乙醇；異丙醇；75%乙醇；TE緩沖液(10 mmol/L
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