【正文】 的存在。生存指數(shù)＝實(shí)驗(yàn)管內(nèi)精子活動(dòng)率/對(duì)照管內(nèi)精子活動(dòng)率。作為對(duì)照管。（5） 不同批號(hào)的耗材需要通過精子存活試驗(yàn)后方可使用。（3） 對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有疑問時(shí)，立即停止使用并報(bào)告質(zhì)控科。（2） 使用前必須檢查有效期和包裝是否完好無損，不使用過期用品及包裝破損用品。（4） 保質(zhì)期：礦物油及培養(yǎng)基在有效期內(nèi)使用。（3） 使用前準(zhǔn)備：培養(yǎng)液使用前必須過夜平衡。（2） 保存：所有培養(yǎng)液在規(guī)定條件下保存至有效期。(十) 培養(yǎng)基、耗材管理試劑和耗材的訂購應(yīng)選擇國(guó)內(nèi)同行公認(rèn)的有資質(zhì)的公司和品牌。4. 儀器設(shè)備一旦出現(xiàn)異?；虬l(fā)生故障，使用人員應(yīng)立即關(guān)機(jī)觀察，防止事故擴(kuò)大，及時(shí)向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人或中心負(fù)責(zé)人匯報(bào)，然后通知修理人員組織維修。2. 保存各種設(shè)備的使用說明文件。℃。(八) 熱臺(tái)的質(zhì)量控制專人管理，每天操作前檢測(cè)并予以記錄。(七) 冰箱的質(zhì)量控制專人管理，每天檢測(cè)并予以記錄。如果壓差＜5Pa，應(yīng)查找原因，及時(shí)檢修和維護(hù)。如遇特殊情況，及時(shí)更換。2. 在有胚胎的情況下不能關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室凈化空調(diào)系統(tǒng)。(六) 實(shí)驗(yàn)室層流系統(tǒng)的質(zhì)量控制1. 體外受精實(shí)驗(yàn)室溫度維持在24177。2. 超凈工作臺(tái)應(yīng)于每天工作前提前30分鐘開啟，臺(tái)面溫度應(yīng)穩(wěn)定于設(shè)定的溫度。4. 液氮罐應(yīng)每3年進(jìn)行一次校驗(yàn)。2. 液氮運(yùn)輸罐需專人更換。(三) UPS的質(zhì)量控制重要儀器如培養(yǎng)箱、顯微鏡、冰箱等必須連接到UPS上，每日觀察UPS工作狀態(tài)，如有異常及時(shí)找工程師維修。CODA過濾器應(yīng)定期更換，根據(jù)供氣量，每36個(gè)月更換一次。每天記錄氣瓶的壓力，定期檢查氣瓶有無漏氣并更換培養(yǎng)箱外氣體過濾器。(二) 培養(yǎng)用氣體的質(zhì)量控制1. 使用有合法資格的氣體供應(yīng)廠家，氣瓶使用前需檢查是否有合格證標(biāo)簽。培養(yǎng)箱內(nèi)壁以75%酒精和超純水分別擦拭。5. 消毒清潔：每隔3個(gè)月消毒培養(yǎng)箱。培養(yǎng)箱內(nèi)的水盤使用超純水，根據(jù)不同培養(yǎng)箱要求定期更換，換水當(dāng)天培養(yǎng)箱不放卵子或胚胎；4. 培養(yǎng)箱顯示器溫度與培養(yǎng)箱內(nèi)溫度計(jì)的溫度應(yīng)一致。%；2. 溫度的控制：37℃177。13. 所有丟棄的體液和用后的一次性物品必須按污染物品處理。例如離心時(shí)必須用帶蓋的試管。10. 在實(shí)驗(yàn)室體液操作中必須使用機(jī)械抽吸裝置，禁止用口吸。8. 接觸配子和胚胎的耗材必須使用一次性用品。6. 離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)，脫掉實(shí)驗(yàn)室衣服，不能穿著出入公開場(chǎng)所或餐廳。5. 當(dāng)接觸體液或盛放體液的容器時(shí)，應(yīng)帶一次性無粉橡膠或塑料手套。3. 特別小心不要被那些受體液污染的儀器或設(shè)備意外損傷。1. 所有體液樣本（精液、血液、卵泡液等）必須視同潛在污染源，所有的供體組織和體液應(yīng)有適當(dāng)?shù)膫魅静”O(jiān)測(cè)。附件601 胚胎實(shí)驗(yàn)室操作手冊(cè)第一節(jié) 胚胎實(shí)驗(yàn)室每日工作流程第二節(jié) 胚胎實(shí)驗(yàn)室安全與質(zhì)量控制一、 實(shí)驗(yàn)室安全與感染控制實(shí)驗(yàn)室必須有完善的安全制度和防患措施，必須有關(guān)于火、電意外引起緊急情況時(shí)的應(yīng)急方案，實(shí)驗(yàn)室人員必須了解災(zāi)情中的救援措施。為避免停電影響設(shè)備正常運(yùn)轉(zhuǎn)，應(yīng)備有雙重供電系統(tǒng)，或不間斷電源（UPS），以確保二氧化碳培養(yǎng)箱和顯微鏡等關(guān)鍵設(shè)備在意外停電時(shí)滿足正常工作。2. 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)清楚乙肝疫苗的必要性并接受乙肝疫苗接種。4. 避免將體液濺到眼中。離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)，將手套脫下丟掉，決不可重復(fù)使用。7. 被體液沾染時(shí)，必須馬上用消毒液或肥皂清洗。9. 因體液溢出污染實(shí)驗(yàn)室設(shè)備時(shí)，應(yīng)在操作完成后用75%酒精消毒。11. 所有操作步驟和體液處理應(yīng)小心，盡量減少浮滴和煙霧生成。12. 實(shí)驗(yàn)室中嚴(yán)禁吃東西、吸煙等。二、 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制(一) 培養(yǎng)箱的質(zhì)量控制專人管理，每日確認(rèn)以下各項(xiàng)內(nèi)容并予以記錄：1. CO2的控制：6%177?！?；3. 濕度：大于80%RH，水盤內(nèi)水的深度始終保持在大約1cm 以上。不一致時(shí)應(yīng)及時(shí)調(diào)整校正。消毒時(shí)拆卸培養(yǎng)箱內(nèi)所有鋼架，以75%酒精和超純水分別擦拭消毒，再送高壓消毒。消毒清潔完成后，需開機(jī)運(yùn)行穩(wěn)定后方可使用。2. 使用醫(yī)用高純度CO2（%以上）培養(yǎng)胚胎。3. CO2進(jìn)入培養(yǎng)箱之前，必須經(jīng)過CODA過濾器對(duì)CO2進(jìn)行過濾。4. CO2分壓應(yīng)與培養(yǎng)箱要求的壓力相符，當(dāng)氣瓶CO2氣體接近用完時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換新的氣瓶，記錄更換氣瓶時(shí)間。(四) 液氮罐的質(zhì)量控制1. 胚胎冷凍液氮罐需每天查看外觀，每周至少兩次檢測(cè)剩余量，按時(shí)添加液氮，使液氮深度保持在25cm以上。3. 液氮罐應(yīng)存放于固定位置。(五) 超凈工作臺(tái)的質(zhì)量控制1. 超凈工作臺(tái)層流系統(tǒng)提供潔凈環(huán)境，用于胚胎培養(yǎng)的準(zhǔn)備工作，如培養(yǎng)液配制、培養(yǎng)皿準(zhǔn)備、胚胎操作等，不能進(jìn)行其它存有污染性的操作。3. 超凈臺(tái)每年應(yīng)至少檢測(cè)一次潔凈度。2℃之間，濕度在40%以上，每日觀察并記錄溫度和濕度，如果波動(dòng)過大及時(shí)進(jìn)行調(diào)整，若有異常，盡快維護(hù)和處理。3. 實(shí)驗(yàn)室凈化空調(diào)系統(tǒng)由專業(yè)人士檢測(cè)維護(hù)，新風(fēng)口濾網(wǎng)每24周更換一次，回風(fēng)口濾網(wǎng)每月更換一次，初效過濾器每13個(gè)月更換一次，中效過濾器每36個(gè)月更換一次，高效過濾器每12年更換一次，并做好維護(hù)檢測(cè)記錄。4. 每日觀察并記錄胚胎實(shí)驗(yàn)室與冷凍間、緩沖間、移植手術(shù)室及取卵手術(shù)室之間的壓差。5. 每月進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室空氣細(xì)菌培養(yǎng)。1. 冷藏層：2~8℃；2. 冷凍層：15~20℃。要求：38℃177。(九) 實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的使用和維護(hù)1. 建立設(shè)備常規(guī)操作程序，并嚴(yán)格按照操作程序執(zhí)行。3. 儀器設(shè)備的維修保養(yǎng)應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)定的程序進(jìn)行，有關(guān)人員在進(jìn)行保養(yǎng)、調(diào)校和維修工作以前，應(yīng)首先熟悉儀器的性能、結(jié)構(gòu)、使用方法和保養(yǎng)、調(diào)校方法，以及維修程序。5. 定期由專業(yè)技術(shù)人員對(duì)儀器、設(shè)備進(jìn)行校驗(yàn)，建立設(shè)備使用檔案。1. 培養(yǎng)基管理（1） 登記：培養(yǎng)基到貨時(shí)需立即清點(diǎn)、核對(duì)、記錄到貨時(shí)間、試劑名稱、編號(hào)、批號(hào)、數(shù)量、收貨人等，并注明冷藏品到貨時(shí)，包裝和儲(chǔ)存條件是否達(dá)到要求。試劑分裝后在各分裝容器上做明顯標(biāo)志，標(biāo)明名稱、有效期、分裝時(shí)間，并用封口膜密封容器口。平衡方法：使用前一天下午根據(jù)需要放入37℃、6% CO2培養(yǎng)箱平衡備用；含MOPS的培養(yǎng)基放入不通CO2氣體的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)平衡備用。2. 耗材管理（1） 耗材到貨時(shí)需立即清點(diǎn)、核對(duì)，記錄到貨時(shí)間、名稱、編號(hào)、批號(hào)、數(shù)量、收貨人等。所有耗材送至實(shí)驗(yàn)室之前，必須用75%乙醇擦拭外包裝，待75%乙醇揮發(fā)后放入物品柜。（4） 每季度清點(diǎn)各種耗材，及時(shí)補(bǔ)充并合理安排使用。(十一) 人精子存活試驗(yàn)使用上游法處理精液，獲得活動(dòng)良好的精子，調(diào)整精子濃度為5106/ml，在待測(cè)物品中放置一段時(shí)間（3－5分鐘），如吸管、移液管、針管等在精子混懸液中反復(fù)抽吸后，再放入5ml試管內(nèi)，作為實(shí)驗(yàn)管。將實(shí)驗(yàn)管和對(duì)照管置于室溫，每24小時(shí)用Makler計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)管及對(duì)照管內(nèi)的活動(dòng)精子比率，并計(jì)算48小時(shí)的生存指數(shù)。正常生存指數(shù)應(yīng)大于85%。接觸配子與胚胎的一次性耗材應(yīng)經(jīng)過人精子存活試驗(yàn)，證明無毒方可使用。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量達(dá)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：1. 受精率：IVF≥65％；ICSI≥70％；2. 卵裂率：≥90％；3. 優(yōu)質(zhì)胚胎形成率：＞50％；4. 冷凍周期率：3050％；5. 卵裂期胚胎冷凍后的復(fù)蘇存活率：≥90％。(十三) 實(shí)驗(yàn)室組織管理和質(zhì)量監(jiān)督1. 實(shí)驗(yàn)室工作人員除進(jìn)行配子的處理和培養(yǎng)外，還要進(jìn)行一系列的常規(guī)質(zhì)控監(jiān)測(cè)，意外事件的詳細(xì)記錄和相應(yīng)對(duì)策的結(jié)果評(píng)估。2. 應(yīng)定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室每位成員進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)督，避免由于儀器、試劑、個(gè)人操作引起的偏差。此外，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)接受醫(yī)學(xué)繼續(xù)教育，學(xué)習(xí)最新的生殖醫(yī)學(xué)知識(shí)。試劑名稱作用貨號(hào)Vitrolife G5系列GMOPSTMGMOPSTMPLUS非CO2依賴型培養(yǎng)液在室溫、大氣環(huán)境中處理、操作卵子和胚胎K021893GIVFTMPLUS洗精、受精液上游、受精K022245G1TMPLUS卵裂胚培養(yǎng)液原核期、DD3胚胎培養(yǎng)K022244G2TMPLUS囊胚培養(yǎng)液囊胚培養(yǎng)K021890HYASETM，透明質(zhì)酸酶消化、移除卵丘細(xì)胞K000627ICSITM，PVP精子制動(dòng)K043116OVOILTM，培養(yǎng)用石蠟油避免液體揮發(fā)和污染K991351SpermRinseTM洗精液精子處理：洗精K000621SpermGradTM梯度離心液精子處理：梯度離心K023403其它試劑Quinn’s精子冷凍液精子冷凍保護(hù)劑ART8022SIGMA EBSS緩沖液取卵、移植沖洗液E2888KITAZATO玻璃化冷凍液胚胎冷凍VT101KITAZATO玻璃化解凍液胚胎解凍VT102耗 材耗材名稱規(guī)格貨號(hào)Falcon 35mm 培養(yǎng)皿500/case353001Falcon中心井培養(yǎng)皿500/case353037Falcon ICSI皿500/case351006Falcon 5ml試管500/case352003Falcon 14ml試管500/case352001Falcon 15ml離心管500/case352095Falcon 取