萘啶類熒光小分子在缺陷dna腔體內(nèi)熒光行為的研究畢業(yè)論文-展示頁(yè)
2025-07-07 16:40本頁(yè)面
【正文】 、GCGTCCATAGTGATTAAGA 兩堿基錯(cuò)配TM43 、GCGTCCATGATGATTAAGA四堿基錯(cuò)配TNCCGTCCCCAGTGATTAAGT非互補(bǔ)3 結(jié)果和討論 非標(biāo)記分子信標(biāo)的設(shè)計(jì)如圖1所示，非標(biāo)記分子信標(biāo)是由一個(gè)小的熒光分子組成的，含有47個(gè)核苷酸的DNA鏈（M1），并含有15個(gè)核苷酸的DNA鏈（S1）。 熒光光譜的測(cè)量用帶有熱電溫度控制盒的熒光分光光度計(jì)在370到500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)量，熒光激發(fā)波長(zhǎng)350nm。DNA由上海生工生物工程技術(shù)公司生產(chǎn)合成，序列如表1所示。圖1 實(shí)驗(yàn)原理圖2 實(shí)驗(yàn)部分 主要試劑及儀器2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶(ATMND)、二甲基砷酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）。本研究的意義在于設(shè)計(jì)的非標(biāo)記分子信標(biāo)不需要通過(guò)共價(jià)的方式對(duì)DNA探針進(jìn)行標(biāo)記，因而具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，容易合成且價(jià)格低廉的特點(diǎn)。在分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的莖部設(shè)計(jì)一個(gè)空缺位點(diǎn)且空缺位點(diǎn)的對(duì)面是C堿基，熒光小分子ATMND能通過(guò)氫鍵結(jié)合到空缺位點(diǎn)處的未配對(duì)C堿基，從而形成非標(biāo)記分子信標(biāo)，使其熒光發(fā)生淬滅。最初時(shí)分子信標(biāo)應(yīng)用于聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的檢測(cè)，由于分子信標(biāo)的靈敏性，可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物和整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。這是因?yàn)槿玖峡梢郧度朐贛B的干部分產(chǎn)生一個(gè)大的干擾。雖然使用了傳感器系統(tǒng)，在許多情況下，即使是允許一個(gè)單核苷酸錯(cuò)配的檢測(cè)，系統(tǒng)仍然需要特定的標(biāo)記探針例如熒光染料，因此設(shè)計(jì)一個(gè)基于光學(xué)的原理來(lái)探測(cè)的方法來(lái)替代分子信標(biāo)的寡核苷酸標(biāo)記是使用最廣泛的。分子信標(biāo)是一種新型的可以特異識(shí)別核酸序列的熒光探針，這種熒光探針通過(guò)與核酸靶分子進(jìn)行雜交后構(gòu)象發(fā)生變化而發(fā)出熒光，他們將其命名為分子信標(biāo)(MB) 。從1996年第一次發(fā)現(xiàn)分子信標(biāo)到現(xiàn)在，利用信標(biāo)在檢測(cè)盒研究的技術(shù)得到了不斷地提高和進(jìn)步。當(dāng)一個(gè)分子信標(biāo)與它的遺傳微粒，隨著莖的曲張導(dǎo)致熒光恢復(fù)，它經(jīng)歷了一個(gè)自發(fā)的構(gòu)象重組。在這些DNA探針中，由于分子信標(biāo)的穩(wěn)定性和特異性的特點(diǎn)，受到極大的關(guān)注。長(zhǎng)期以來(lái)由于特異性DNA探針的大量需求，各種分子工程在最近幾年迅速發(fā)展起來(lái)了。尤其對(duì)于基因藥物治療、靶向釋放等水平上的個(gè)性化用藥，最終都依賴于基因測(cè)序結(jié)果。萘啶類熒光小分子在缺陷DNA腔體內(nèi)熒光行為的研究畢業(yè)論文目 錄摘要 1關(guān)鍵詞 1Abstract ……………………………………………………………………… ………………...…..1Keywords…………………………….………………………………………………..……......….. 21 前言 32 實(shí)驗(yàn)部分 4 主要試劑及儀器 4 熒光光譜的測(cè)量 43 結(jié)果和討論 5 非標(biāo)記分子信標(biāo)的設(shè)計(jì) 5 GSMB探針的表征 5 使用非標(biāo)記分子信標(biāo)檢測(cè)目標(biāo)DNA 84 結(jié)論 9參考文獻(xiàn) 11謝 辭 12 1 前言DNA的雜交序列特異性的檢測(cè)，已經(jīng)引起了包括分子診斷、環(huán)境檢測(cè)等領(lǐng)域的廣泛關(guān)注, 因此，對(duì)敏感性和選擇性探針的需求越來(lái)越多。DNA序列分析是現(xiàn)代分子診斷學(xué)的基礎(chǔ)，對(duì)于各種遺傳類疾病、病毒或細(xì)菌的感染、遺傳與變異都有重要意義。近年來(lái)，DNA測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展，加速了人類基因組計(jì)劃的完成，對(duì)基因結(jié)構(gòu)分析和功能研究做出了巨大的貢獻(xiàn)。包括熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）探針、臨近探針、熒光探針等。傳統(tǒng)的分子信標(biāo)是有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的低核酸探針。其獨(dú)特的目標(biāo)識(shí)別和信號(hào)傳導(dǎo)的能力的關(guān)系已經(jīng)在許多生物化學(xué)和生物學(xué)中大量的運(yùn)用，包括定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，DNA蛋白質(zhì)相互作用，多基因分析以及信使RNA在活細(xì)胞中的表達(dá)等。新類型的分子信標(biāo)已經(jīng)發(fā)展到了波長(zhǎng)的移動(dòng)和酶的增加與電化學(xué)信號(hào)之間的相互轉(zhuǎn)化。分子信標(biāo)具有靈敏度高、背景信號(hào)低、特異性識(shí)別性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單以及可進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，在近幾年內(nèi)得到了迅速發(fā)展，并已廣泛地應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、基因突變的快速分析、DNA、RNA 的檢測(cè)、DNA/RNA雜交的動(dòng)力學(xué)研究以及DNA/蛋白質(zhì)相互作用研究等，其應(yīng)用領(lǐng)域仍在不斷拓展。利用在DNA鏈中嵌入染料的方式來(lái)檢測(cè)在溶液中的雙鏈D
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