脂肪酶的概述與應(yīng)用-展示頁
2025-07-04 03:34本頁面
【正文】 子生根發(fā)芽所必需的養(yǎng)料和能量；動物體內(nèi)含脂肪酶較多的是高等動物的胰臟和脂肪組織，在腸液中含有少量的脂肪酶，用于補(bǔ)充胰脂肪酶對脂肪消化的不足，在肉食動物的胃液中含有少量的丁酸甘油酯酶。包括磷酸酯酶、固醇酶和羧酸酯酶。. . . .脂肪酶的概述與應(yīng)用一 脂肪酶概述、脂肪酶（Lipase，甘油酯水解酶）隸屬于羧基酯水解酶類，能夠逐步的將甘油三酯水解成甘油和脂肪酸。脂肪酶存在于含有脂肪的動、植物和微生物（如霉菌、細(xì)菌等）組織中。脂肪酸廣泛的應(yīng)用于食品、藥品、皮革、日用化工等方面脂肪酶廣泛的存在于動植物和微生物中。脂肪酶是一類具有多種催化能力的酶，可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯類的水解、醇解、酯化、轉(zhuǎn)酯化及酯類的逆向合成反應(yīng)，除此之外還表現(xiàn)出其他一些酶的活性，如磷脂酶、溶血磷脂酶、膽固醇酯酶、酰肽水解酶活性等（Hara；Schmid）。脂肪酶的性質(zhì)研究主要包括最適溫度與pH、溫度與pH穩(wěn)定性、底物特異性等幾個方面?？傮w而言，微生物脂肪酶具有比動植物脂肪酶更廣的作用pH、作用溫度范圍，高穩(wěn)定性和活性，對底物有特異性（Schmid等；Kazlauskas等）。溶于水的酶作用于不溶于水的底物，反應(yīng)是在2個彼此分離的完全不同的相的界面上進(jìn)行。酯酶（E ）作用的底物是水溶性的，并且其最適底物是由短鏈脂肪酸（≤C8）形成的酯。不同來源的脂肪酶具有不同的催化特點和催化活力。脂肪酶是一種特殊的酯鍵水解酶，它可作用于甘油三酯的酯鍵，使甘油三酯降解為甘油二酯、單甘油酯、甘油和脂肪酸。因此，一切對蛋白質(zhì)活性有影響的因素都影響酶的活性。脂肪酶在微生物中有廣泛的分布，其產(chǎn)生菌主要是霉菌和細(xì)菌。脂肪酶可將甘油酯（油、脂）水解，在不同階段可釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯及甘油。二 脂肪酶的結(jié)構(gòu)解析 分子結(jié)構(gòu)研究表明, 來源不同的脂肪酶 ,其氨基酸組成數(shù)目從 270 ～ 641 不等 , 其分子量為29 000～ 100 000。表1列出了幾種常見的脂肪酶的結(jié)構(gòu)特征參數(shù)。一般而言, 不僅構(gòu)成活性中心的三元組氨基酸種類相同 , 而且位置不變。 脂肪酶催化中心三元組研究表明，盡管不同來源的脂肪酶有不同的氨基酸組成(殘基數(shù)目、分子量 、三維空間結(jié)構(gòu)等),但由于生物的同源性和進(jìn)化過程的保守性 ,其催化中心擁有相似或相同的特征區(qū) HisXYGlyZSerWGly或 YGlyHisSerWGly(W 、X、Y、Z 指非特異性氨基酸)。如圖 2 所示 立體結(jié)構(gòu)具體參數(shù)方法：三．脂肪酶的純化與表達(dá)l pPIC9k mRCL 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建（華根霉脂肪酶全基因）成熟肽，擴(kuò)增的基因片段純化后克隆到載體 pMD19T Vector 中，由此構(gòu)建重組質(zhì)粒 pMD19mRCL 。（1）質(zhì)粒雙酶切克隆的質(zhì)粒 pMD19mRCL 和酵母表達(dá)質(zhì)粒 pPIC9k 分別被 AvrⅡ和Not I 雙酶切，得到pMD19mRCL質(zhì)粒雙酶切的 800bb 左右的小片段以及 pPIC9k 質(zhì)粒的雙酶切線性質(zhì)粒大片段，回收目的條帶。（3）轉(zhuǎn)化 及重組質(zhì)粒的篩選重組質(zhì)粒pPIC9KmRCL的構(gòu)建l 重組蛋白在巴斯德畢赤酵母 GS115 中的初步表達(dá)1. 巴斯德畢赤酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備2. 巴斯德畢赤酵母的電轉(zhuǎn)化對質(zhì)粒線性化，回收酶切產(chǎn)物；再與巴斯德畢赤酵母感受態(tài)細(xì)胞混勻，電轉(zhuǎn)化得到含目的基因的重組巴斯德畢赤
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