堿性磷酸酶的分離純化-袁野-展示頁
2025-06-04 18:01本頁面
【正文】 2ml M的醋酸鎂及醋酸鈉混合液清洗勻漿器，之后將之倒入離心管，與原來的勻漿液混合。 2ml正丁醇，玻璃棒攪拌 2min，室溫放置 30min，紗布過濾，置于離心管。 棄上清 ，沉淀用 4ml Mg(AC)2溶解。取 B液 于 EP管，待測比活性用。 (2)上清液中 緩慢 加入冷 95%乙醇使其終體積為 60%（ ），混勻后 3000r/min 5min， 棄上清 ，沉淀用 4ml Mg(AC) NaAC混合液攪拌混懸。 (2)上清液中 緩慢 加入冷 95%乙醇使其終體積為 60%（ ），混勻后 3000r/min 5min， 棄上清 ，沉淀用 3ml Mg(AC)2溶解 ,記錄 體積 c。 6. （ 1） 其余懸液中 緩慢 加入冷丙酮，使得丙酮的體積分?jǐn)?shù)達(dá)到 33%（ ），混勻后 2022r/min 離心 5min， 取上清 （棄沉淀） （ 2） 上清中 緩慢 加入冷丙酮，使丙酮終體積分?jǐn)?shù)達(dá)到50%(），混勻后 3000r/min離心 15min， 棄上清 （ 3） 沉淀中加入 Tris醋酸鎂緩沖液 5ml，即為純化酶液。 ? 用于活性測定： 用 TrisMg(AC)2緩沖液將 A液稀釋 25倍、 B液稀釋 10倍、 C液稀釋 5倍，D液不稀釋。 (二 )堿性磷酸酶的活性測定 實(shí)驗(yàn)原理： AKP是一種底物特異性較低，在堿性環(huán)境中能水解磷酸基團(tuán)。 血清 AKP主要來自肝，小部分來自骨骼。 磷酸苯二鈉 磷酸鹽 + 酚 AKP 酚 + 4氨基安替比林 紅色醌類衍生物 鐵氰化鉀 管號(hào) 空白 標(biāo)準(zhǔn) A B C D 酶液體 酚標(biāo)準(zhǔn)液 TrisMg(AC)2 復(fù)合底物 1. 取試管 6支編號(hào)（體積單位為 ml） 2. 加入底物后 , 立即混勻 , 37 ℃ 準(zhǔn)確
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