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正文內(nèi)容

sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳-展示頁(yè)

2025-05-16 18:13本頁(yè)面
  

【正文】 非還原 SDS電泳 帶有烷基化作用的還原 SDS電泳 ( 2)根據(jù)緩沖系統(tǒng)和凝膠孔徑的不同 連續(xù)電泳 不連續(xù)電泳 ( 3)根據(jù)電泳的形式 圓盤(pán)電泳 垂直電泳 平板電泳 水平電泳 操作 ( 1) 制備分離膠 ( 2) 制備積層膠 (堆積膠) 分離膠聚合之后 ( 3) 加樣品 樣品的處理 在蛋白溶液中加入過(guò)量的 SDS后,可引起以下的反應(yīng): 蛋白質(zhì) 本身的電荷被屏蔽 氫鍵斷裂 疏水相互作用被取消 多肽被去折疊 (二級(jí)結(jié)構(gòu)破壞 ),并形成橢球形 ①還原 SDS處理 當(dāng)加入還原試劑 DTT或 β 二巰基乙醇后,蛋白質(zhì)被 完全去折疊 ,只根據(jù)分子量分離。 不同分子量范圍的蛋白質(zhì)應(yīng)選用不同的凝膠濃度 . (四)分子量測(cè)定 相對(duì)遷移率( Rf) Rf即用每個(gè)帶的遷移距離除以溴酚藍(lán)前沿的遷移距離得到的。 尿素系統(tǒng): 適用分子量低于 15KD的蛋白樣品。 (二)緩沖系統(tǒng)的選擇 一般情況下,在被分析的蛋白質(zhì)穩(wěn)定的 pH范圍,凡 不與 SDS發(fā)生相互作用 的緩沖液都可以使用,但緩沖液的選擇對(duì)蛋白質(zhì)的分離和電泳的速度是非常關(guān)鍵的。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在 15KD— 200KD之間時(shí), 電泳遷移率與分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系 影響 SDS電泳的關(guān)鍵因素 ( 1) 溶液中 SDS單體濃度( 1mmol/L) 大多數(shù)蛋白質(zhì)與 SDS結(jié)合的重量比為 1: ( 2) 樣品緩沖液的離子強(qiáng)度(不
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