全內反射熒光顯微鏡介紹-展示頁
2025-05-12 18:43本頁面
【正文】 內反射熒光顯微鏡 167。 目前使用 CCD 探測,可達到的量子產率已到～ 80 % ,成像速率～ 200 Hz.當對活細胞成像時 ,為了達到單分子級的靈敏度或是為了減少曝光時間 ,需要采用圖像增強器。CCD相機的 高靈敏度高靈敏度 特點使全內反射熒光顯微鏡利用消逝波照射樣品并使其成像成為可能，也成就了其高信噪比。黃色小圓點 表示被隱失波激發(fā)的熒光分子，白色小圓點 表示未被激發(fā)的熒光分子。780nm而言，浸透深度為～100nm。T12（ θi） 分界面處的透射強度d 12 滲透深度θi 入射角λ 入射光波長對于可見光波長380 隱失波的強度 深度圖熒光激發(fā)原理非均勻波 即所有的入射光線全部反射出來 ,稱為全內反射熒光激發(fā)原理沿著入射面上的介質邊界傳播在平行界面方向以平行波場方式傳播在垂直界面方向則是呈指數(shù)衰減。θ2θ1=n2這種方法的成像裝置簡單，極易和其它成像技術、探測技術相結合，目前已成功的實現(xiàn) 100nm甚至更低的空間分辨率。全內反射熒光顯微術是利用全內反射產生的消逝波激發(fā)樣品 ,從而使樣品表面數(shù)百納米厚的薄層內的熒光團受到激發(fā) ,熒光成像的信噪比大大提高。至今基本原理全內反射熒光顯微鏡的基本設計思路全內反射熒光顯微鏡的基本原理熒光標記驅動蛋白動態(tài)研究。新的突破。將全反射理論與生物細胞的。1995年Yanagida小組用 TIRFM技術首次在液體溶液中得到了熒光標記的單個蛋白質分子的成像。全內反射熒光顯微術的發(fā)展歷程全內反射熒光顯微術的發(fā)展歷程Hirsch field完成了第一個全內反射熒光實驗1965年Axelrod等生物物理學家對 TRIFM技術及基本原理進行描述，并探索了其生物應用。其中，其中， 全內反射熒光顯微術全內反射熒光顯微術 (Total internal reflection fluorescence microscopy ,TIRFM)是是近年來新興的一種光學成像技術。近年來人們開發(fā)出了一系列光學顯微鏡。發(fā)展歷史全內反射熒光顯微術的發(fā)展歷程全內反射熒光顯微術的發(fā)展歷程 發(fā)展歷史熒光顯微鏡的概念熒光顯微鏡的概念 在細胞生物學方面，傳統(tǒng)光學顯微鏡始終不能解決生物樣本顯微中的幾個重要問題： 信噪比 不高； ； 分辨極限 （ R ≥0. 61λ/nsinθ ）： 傳統(tǒng)的光學顯微鏡由于受到 光瞳遠場衍射效應 的影響 ,存在分辨極限 ,瑞利將之歸納為 R ≥0. 61λ/nsin(u/2) ,其中 R為分辨力 細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光，但后可發(fā)熒光；另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。全內反射熒光顯微鏡發(fā)展歷史優(yōu)勢應用分型及結構基本原理發(fā)展與展望和定量研究的工具之一。,λ 為成像光波波長 , nsin(u/2)為物透鏡的 數(shù)值孔徑 ,即 NA 值， u為孔徑角 ,因此光學顯微鏡空間分辨極限～ 250 nm。近年來人們開發(fā)出了一系列光學顯微鏡。近年來新興的一種光學成像技術。 20世紀80年代早期年代早期20世紀90年代新型物鏡透鏡、聚光鏡和超靈敏探測器的出現(xiàn)，使 TRIFM技術得到充分發(fā)展。該項技術已經應用到許多單分子的研究中這是首次嘗試用全內反射熒光這是首次嘗試用全內反射熒光法測液體中的單個分子的熒光法測液體中的單個分子的熒光。將全反射理論與生物細胞的熒光成像技術相結合是一種全熒光成像技術相結合是一種全新的突破。 肌球蛋白酶活性測量，肌收縮力的產生，肌球蛋白酶活性測量，肌收縮力的產生，熒光標記驅動蛋白動態(tài)研究。1996年Moerner小組又用這項技術實現(xiàn)了限制在丙烯酰胺膠體的納米孔中的單分子的三維成像。可以看到樣品表面，單分子的活動情況。基
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