電鏡超薄切ppt課件(2)-展示頁
2025-05-11 07:44本頁面
【正文】 ? 組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室：蘇衍萍 冷凍蝕刻法 超薄切片 冷凍蝕刻法 冷凍割斷術(shù) 細(xì)胞化學(xué)法 免疫組織化學(xué)技術(shù) 免疫電鏡法 電鏡放射自顯影術(shù) 放射自顯影技術(shù) 掃描電鏡技術(shù) 被吞噬的紅細(xì)胞 ? 現(xiàn)有的透射電鏡生物制品制備技術(shù)分為兩類： ? 一類是透射電鏡的基本制備技術(shù)，包括超薄切片和負(fù)染色法； ? 另一類是生物制品的特殊技術(shù)，其中包括冷凍蝕刻法、冰凍割斷術(shù)、細(xì)胞化學(xué)法、免疫電鏡法、放射自顯影技術(shù)、 X線微區(qū)分析技術(shù)等。 ? 超薄切片樣品的制備 ? （ 1） 取材 基本要求是在活體情況下進(jìn)行 ? 取材的原則 (快 、 準(zhǔn) 、 輕 、 小 、 冷的原則 ） ? 1） 快速： 1分鐘之內(nèi)投入固定液 。 ? 3） 部位準(zhǔn) ? 4） 損傷?。浩餍祽?yīng)銳利 ， 避免牽拉 、 擠壓 ，防止組織受機(jī)械損傷 。 胚胎干細(xì)胞的研究 ? 2）培養(yǎng)細(xì)胞： 生長在瓶中的細(xì)胞到足夠的量，先倒去培養(yǎng)液，然后倒入適量的戊二醛固定液，在冰浴下 35分鐘、彎頭吸管吹打或用軟器械輕輕地刮下貼壁的細(xì)胞，將這種混合液倒入離心管中， 2022rpm低速離心 1520分鐘，使細(xì)胞呈團(tuán)，棄去上清液，換一次固定液，將其移入修塊臺，修快成標(biāo)準(zhǔn)塊 4oC固定、待用。 經(jīng)過固定 ? 處理后再離心成團(tuán) ， ? 在 50oC中棄去上清液 ， ? 加入適量的經(jīng) 50oC ? 預(yù)溫的 2%的瓊漿 ， ? 使團(tuán)懸浮 ， 將懸浮團(tuán) ? 和瓊脂液一同在薄片 ? 上展層 ， 固定后 ? 切成 1mm3的小塊 。 1）固定液的作用 ? A． 阻止細(xì)胞自溶 。 ? C 在一些組分的分子之間以化學(xué)反應(yīng)和物理反應(yīng)建立鉸鏈 ， 提供一個(gè)骨架來穩(wěn)定各種細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu) 。 ? 2） 影響固定效果的因素 ? 固定液的酸堿度 (pH值 ) ? ① 固定液的 pH值 ? ② 滲透壓 ? ③ 緩沖液的類型 ? ④ 固定的溫度和時(shí)間 ? 當(dāng)前采用的是在 0～ 4℃ 下固定 1 ～ 4小時(shí) 。 1g包裝 ， 淡黃色晶體 。 ? 優(yōu)點(diǎn) ① 對蛋白質(zhì)和脂類固定較好 。 ③ 分子密度高 ，產(chǎn)生良好的反差 ， 因此鋨酸固定本身也起到生物染色作用 。 ② 擴(kuò)散慢 ， 穿透能力差 。 ④ 不適于進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)工作 。 存放時(shí)間久了容易變質(zhì) ， 影響固定 。 (2)能保存某些酶的活性，對糖元、細(xì)胞膜、核基質(zhì)等有較好的作用。 ? C 甲醛（ fomaldehyde） :多用多聚甲醛粉劑配制。 ? 2） 固定的方法 ? A 單固定法：對單細(xì)胞或固定液易于浸透的組織 ， 一般單獨(dú)用 12%四氧化鋨固定液固定 12小時(shí)可達(dá)到固定的目地 。 ? C 原位固定和灌注固定：將動(dòng)物麻醉 、 解剖進(jìn)行原位固定 。 神經(jīng)組織 、 視網(wǎng)膜 、 腎臟 。 ? 0. 2mol/L磷酸緩沖液的配制 ? 磷酸二氫鈉 （ ） ? 磷酸氫二鈉 （ ）
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