【正文】 回流固液比對金銀花總黃酮提取的影響 用傳統(tǒng)乙醇回流法提取金銀花總黃酮，在其他條件不變的情況下，改變回流 液固比 ，測得的金銀花總黃酮含量見表 410 和圖 47。 乙醇回流法提取總黃酮 乙醇回流時間對金銀花總黃酮提取的影響 準確稱取發(fā)酵液 150mL，用水提法浸提 1， 2， 3， 4， 5h后，測定總黃酮的含量，結(jié)果見圖 46表 49?？傸S酮的優(yōu)選浸提條件（各因子優(yōu)水平組合）為 最佳提取功率為 406W，最佳提取時間為12min，最佳固液比 1:25，最佳乙醇濃度為 70%。顯著性檢驗后發(fā)現(xiàn)因素：固液比（ B） 、 乙醇濃度 %（ A）和微波功 率 W（ C）對指標影響 15 顯著。 表 46 正交實驗因素水平表 實驗號 乙醇濃度 %（ A） 固液比（ B） 微波功率 W（ C） 微波時間 min（ D） 1 50 1:25 252 8 2 70 1:30 406 10 3 90 1:35 700 12 012340 50 60 70 80 90 乙醇濃度（%）總黃酮得率(%) 14 表 47 微波輔助提取金銀花總黃酮 的 L9（ 34）正交試驗結(jié)果 表 因素 乙醇濃度（ %） 固液比（ g/mL） 微波功率 （ w） 微波時間 （ min） 黃酮得率（ %） 試驗號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 M1 M2 M3 m1 m2 m3 R A 50 50 50 70 70 70 90 90 90 B 1:25 1:30 1:35 1:25 1:30 1:35 1:25 1:30 1:35 C 252 406 700 406 700 252 700 252 406 D 8 10 12 12 8 10 10 12 8 為進一步確定各因素對 金銀花總黃酮得 率的影響程度，對表 47 中的 各因素 進行方差分析和顯著性檢查，見表 48。所以，選擇 70%乙醇作為微波輔助提取溶劑。可能的原因是：乙醇濃度過低，提取液中雜質(zhì)含量較多，可能是蛋白質(zhì)、過濾、濃縮、和分離均較困難 。液固比在 1:30 的時候總黃酮含量最高，達到 %。 固液比對金銀花總黃酮提取的影響 準確稱取 5g金銀花粉末，液固比分別設(shè)定為 20， 30， 40， 50， 60 將提取液離心，取上清液，將過濾渣乙醇回流 2h后合并提取液，實驗結(jié)果見圖 44 表 44。 微波處理時間對金銀花總黃酮提取的影響 準確稱取 5g金銀花粉末，加入適量 70%的乙醇溶液，設(shè)定微波功率為 406W，微波輔助提取時間分別設(shè)定為 4min， 6min， 8min， 10min， 12min， 14min 將提取液離心，取上清液，將過濾渣乙醇回流 2h 后合并提取液，檢測總黃酮含量，實驗結(jié)果見圖 42 和表 42。 微波提取金銀花總黃酮單因素實驗方法 微波功率對金銀花總黃酮提取的影響 準確稱取 5g金銀花粉末，加入 70%的乙醇溶液，設(shè)定微波功率為 126W700W，微波輔助提取全程時間為 10min，將提取液離心，取上清液，將過濾渣乙醇回流 2h后合并提取液，檢測總黃酮含量， 實驗結(jié)果見圖 42 和表 42。 總黃酮含量測定方法 取 液，加入 5%亞硝酸溶液 蕩搖勻，放置 6min 加入 10%硝酸鋁 蕩搖勻，放置 6min 入 4%氫氧化鈉試液 4mL， 30%（ V/V）乙醇定容至刻度，搖勻，放置 15min 分光光度法，在 510nm定吸光度值由標準曲線計算得總黃酮含量。而微波輔助提 取的總黃酮較乙醇回流法高。 微波輔助提取法與乙醇回流法比較 比較兩種提取方法的處理時間和液固比對總黃酮提取量的影響。采用分光光度法，在 510nm處測定吸光度，以對照品量（ mg/mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。 對照品溶液的制備方法 精密稱取蘆丁對照品 置 50mL 容量瓶中，加適量甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻備用。 儀器 粉碎機 （ DFT100 克 上海新諾儀器廠 ） 微波爐 （ WP700 型 格蘭仕微波爐有限公司 ） ； 電子天平 （ AG135 型 上海精密科學(xué)儀器有限公司 ） ； 恒溫水浴鍋 （ 018268 型 金壇市大地自動化儀器廠 ） ； 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （ RE52 AAA 型 上海嘉鵬科技有限公司 ） ； 循環(huán)水式真空泵 （ SHBⅢ A 河南省太康科教器材廠 ） ； 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 （ DGG9140A 型 上海森信實驗有限公司 ） ； 紫外 722 型可見分光光度計 （ 上海光譜儀器有限公司 ） ； 自動平衡離心機 （ TDZ5WS 型 賽特湘儀離心機 儀器有限公司 ） 。 1. 材料與方法 材料 金銀花 (浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片廠提供 )60℃烘箱內(nèi)烘干，打粉備用。首次運用微波技術(shù)從白芥子中提取總黃酮，提取速度快，提高了效率，比常規(guī)法提取的含量高，其結(jié)果令人滿意。用微波法從柚皮中提取黃酮的最佳工藝條件為，乙醇濃度 80％、浸提時間為5 min 、料液比 1:25 此時黃酮得率為 0. 84mg/g。戴玉錦等通過單因素的特點，大大節(jié)省了能源。 陳斌 [3]等利用微波萃取葛根異黃酮的工藝，采用 77％乙醇，固液比為 1:1 4 ，且在體系溫度低 60℃的前提下，微波間隙處理 3 次，葛根總黃酮的浸出率達 96％以上。 MAE 是在分析化學(xué)中派生出來的新型萃取技術(shù)，和傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾、索氏抽提等技術(shù)比較，微波提取技術(shù)可以縮短萃取時間、降低能耗、減少溶劑用量、提高收率和純度、降低生產(chǎn)成本，不僅具有很高的經(jīng)濟效益， 而且有望改變中草藥傳統(tǒng)的服用方式。 orthogonal test method。 total flavonoids。 關(guān)鍵詞 ：金銀花；總黃酮；微波輔助提??；正交試驗法； 乙醇回流 4 Microwaveassisted extraction process of flavonoids in honeysuckle Conditions Abstract: Objective The purpose of microassisted extraction process of total flavonoids in honeysuckle conditions of a preliminary study and with the traditional craft make that nol pared to optimize the extraction of total flavonoids in honeysuckle conditions. Method Use rutin as reference substance, by ultravioletvisible spectro photometry rutin standard curves set up。（ 3）以總黃酮得率為指標，微波輔助提取優(yōu)于傳統(tǒng)回流提取法。根據(jù)以上分析，可定出影響指標的因素顯著性主次順序為： ACBD。 結(jié)果 （ 1）單因素實驗結(jié)果：金銀花總黃酮 的最佳提取工藝為 乙醇濃度 70%，固液比為 1:25，微波時間 12min, 微波功率 406W。 本科畢業(yè)論文（設(shè)計）手冊 題 目： 微波輔助提取金銀花總黃 酮工藝條件的研究 學(xué) 院： 生物工程 專 業(yè)： 生物工程 學(xué) 號： 姓 名： 指導(dǎo)老師： 職稱： 合作老師： / 職稱： / 成 績： 1 手冊目錄 （一） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )正文??????????? ? 3 （二） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )任務(wù)書???????????? ? 21 （三） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )開題報告??????????? ? 23 （四） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )文獻綜述??????????? ? 30 （五） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )外文翻譯????????? ? 36 （六） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )指導(dǎo)記錄????????? ? 62 （七） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )中期檢查表???????? ? 64 （八） 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )答辯資格審查表??????? 65 （九）本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )答辯記錄?????????? 66 （十）本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )成績評定書?????????? 67 （十一）本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )作品 (實物 )驗收表?????? ?? 68 2 目 錄 中文摘要??????????????????????????????? 5 外文摘要??????????????????????????????? 6 引言 ? ? ??????????????????????????????? 7 1．實驗材料及儀器 ?? ????????????????????????? 7 材料 ????? ??? ?????????????????? ? ?? 7 試劑 ? ????? ?? ??????????????????? ? ?? 8 儀器 ? ????? ?? ?????????????? ????? ? ?? 8 2．工藝流程……………………………………………………………………………… 8 3．實驗方法 ?? ?????????? ?????????????? ?? 9 標準曲線的制備 ………………………………………………………………… 9 金銀花總黃酮傳統(tǒng)提法 ????? ?????????????? ? ? 9 微波輔助提取單因素實驗方法? ??????? ? ?????????? 9 微波輔助提取正交試驗方法? ? ?????? ? ??? ???????? 9 黃酮含量測定方法 ? ? ?????? ……… ??? ?????????? 9 4．結(jié)果 … ? ? ?????????? ?????? … ???????? ?? 10 標準曲線繪制?????????????????????????? 10 微波輔助提取金銀花總黃酮工藝條件的研究（單因素實驗）????? ? 10 微波功率對金銀花總黃酮提取影響? ?? ???????????? 10 微波時間對金銀花總黃酮提取的影響?????????????? 11 固液比對金銀花總黃酮提取的影響 ? ? ?? ??????????? 12 乙醇濃度對金銀花總黃 酮提取的影響 ????????????? 13 微波輔助提取金銀花總黃酮工藝條件研究（正交實驗）???????? 13 微波輔助提取與傳統(tǒng)乙醇回流法比較 ? ?????????????? 15 5．討論 ? ?? ? ? ? ?? ? ? ?? ? ? ???????????????? 17 6．結(jié)論 ? ?? ? ? ? ?? ? ? ?? ? ? ???????????????? 17 參考文獻 ? ? ?????????? ???????? ?????? ??? ? 18 致謝???????????????????????????????? 20 3 微波輔助提 取金銀花總黃酮工藝條件的研究 摘 要 ： 目的 本實驗采用微輔助提取，分別通過單因素實驗、正交實驗考察金銀花總黃酮的最佳工藝條件，為金銀花總黃酮藥理藥效研究提供材料，同時為其進一步開放奠