【正文】 和EPA推薦方法之一。 近似致死劑量范圍： 每間隔一個(gè)劑量給一只動(dòng)物，測(cè)出最低致死劑量和最高非致死劑量；然后用二者之間的劑量給一只動(dòng)物，如果該劑量下動(dòng)物未發(fā)生死亡，則該劑量與最低致死劑量之間的范圍為近似致死劑量范圍。 設(shè)計(jì)劑量序列表 ： 按 50%遞增法，設(shè)計(jì)出數(shù)個(gè)序列劑量。 近似致死劑量法 (Approximate Lethal Dose – ALD) 1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物： 6只健康 Beagle犬（ 46月齡）或猴（ 23歲），選用其他物種的動(dòng)物時(shí)應(yīng)說(shuō)明理由。 劑量：劑量的設(shè)計(jì)通常是 100、 300、 1000、3000 mg/kg，或 80、 160、 3 6 1280 mg/kg，通常隔日給予下一個(gè)高劑量，劑量逐漸加大，直到出現(xiàn)動(dòng)物死亡時(shí)或達(dá)到劑量上限時(shí)止。試驗(yàn)結(jié)果參考下表標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 仔細(xì)觀察和詳細(xì)記錄。毒性反應(yīng)出現(xiàn)和消失的時(shí)間，準(zhǔn)確的動(dòng)物死亡時(shí)間。 周期： 給藥后至少應(yīng)觀察 2周，根據(jù)具體特點(diǎn)可適當(dāng)延長(zhǎng)。 2）正式試驗(yàn) 動(dòng)物： 每個(gè)劑量至少用 10只動(dòng)物，雌雄各半。每個(gè)劑量試驗(yàn)之間至少應(yīng)間隔 24小時(shí)。 固定 劑 量法（ Fixeddose procedure） 無(wú)死亡 結(jié)束試驗(yàn) 初始量 5mg 50mg 500mg 2022mg 無(wú)死亡 150mg 有死亡 有死亡 無(wú)毒性反應(yīng) 無(wú)毒性反應(yīng) 無(wú)死亡 15mg 無(wú)死亡 結(jié)束試驗(yàn) 1) 首先用雌性動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試。采用一次給藥的方式進(jìn)行。 試驗(yàn)選擇 50、 500和 2022mg/kg四個(gè)固定劑量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，特殊情況下可增加 5000 mg/kg劑量。有許多中藥、天然藥物毒性較低，如單次給藥量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于藥效學(xué)試驗(yàn)等效劑量時(shí)，可不必進(jìn)行更大劑量的觀察。 ? 最大給藥量試驗(yàn) ： ? 最大給藥量指單次或 24小時(shí)內(nèi)多次（ 23次）給藥所采用的最大給藥劑量。 ? 最大耐受量試驗(yàn) ： ? 最大耐受量 （ Maximal tolerance dose, MTD） 是指動(dòng)物能夠耐受的而不引起動(dòng)物死亡的最高劑量。 ? 致死量的測(cè)定主要包括最小致死量（ LD5）、半數(shù)致死量（ LD50）和最大致死量（ LD95）。 急毒試驗(yàn)的一般研究方法 ? 致死量法 ： ? 藥物毒性的大小，可用動(dòng)物的致死量（ Lethal dose）來(lái)表示，因?yàn)閯?dòng)物生與死的生理指標(biāo)較其他指標(biāo)明顯、客觀、容易掌握。 ? 說(shuō)明所使用的計(jì)算方法和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，提供所選用方法合理性的依據(jù)。組織病理學(xué)檢查應(yīng)附有病理學(xué)檢查負(fù)責(zé)人簽字的報(bào)告及有病變組織的病理照片。 ? 判斷出現(xiàn)的各種反應(yīng)可能涉及的器官、組織或系統(tǒng)等。 （八） 結(jié)果處理和分析 ? 根據(jù)所觀察到的各種反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間等，分析各種反應(yīng)在不同劑量時(shí)的發(fā)生率、嚴(yán)重程度。 ? 記錄所有動(dòng)物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆等。 ? 一般應(yīng)詳細(xì)觀察給藥后 4小時(shí)內(nèi)動(dòng)物的反應(yīng)情況，然后每天上、下午各觀察一次。 （五）給藥容量： 灌胃給藥，大鼠給藥容積每次一般不超過(guò) 20ml/kg，小鼠每次一般不超過(guò) 40ml/kg；其他動(dòng)物及給藥途徑的給藥容量可參考相關(guān)文獻(xiàn)及根據(jù)實(shí)際情況決定。給藥途徑一般采用兩種給藥途徑，其中一種應(yīng)與擬臨床給藥途徑一致，如不采用擬臨床途徑給藥，必須充分說(shuō)明理由。動(dòng)物初始劑量不應(yīng)超過(guò)或低于平均體重的 20％ （三）試驗(yàn)分組 ? 除設(shè)受試物合適的劑量組外，還應(yīng)設(shè)空白（和／或陰性）對(duì)照組。 ? 通常 采用健康成年動(dòng)物 進(jìn)行試驗(yàn)。 大、小鼠為常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ，其他動(dòng)物也可使用，當(dāng)采用非嚙齒類動(dòng)物更適合進(jìn)行研究時(shí)，盡可能采用非嚙齒類動(dòng)物。 （二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ? 一般應(yīng)采用 哺乳動(dòng)物，雌雄各半 。如果由于給藥容積或給藥方法限制，可采用原料藥（提取物）進(jìn)行試驗(yàn)。 三、急性毒性試驗(yàn)的基本內(nèi)容 （一）受試物 ? 急性毒性研究的受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗(yàn)受試物和上市藥品，因此建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品，并注明受試物的名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。 二、急性毒性試驗(yàn)的基本原則： （一）試驗(yàn)管理 ? 急性毒性試驗(yàn)必須執(zhí)行“藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（ GLP）”。 5) 不可能 認(rèn)識(shí) 偶 見(jiàn) 不良反 應(yīng) （ %） 和罕 見(jiàn) 不良反 應(yīng) （ %） 我 國(guó) 1979年 頒 布 “藥 政管理法 ” 1985年 頒 布 “新 藥審 批法 ” 1999年 SDA頒 布 GLP及 GCP 頒 布 “藥 品管理法 ” 加強(qiáng) 藥 政管理 藥物急性毒性研究 概述 ? 急性毒性 是指動(dòng)物一次或 24小時(shí)內(nèi)多次接受一定劑量的受試物，動(dòng)物在短期內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。 藥品臨床前毒理學(xué)研究局限性的原因： 藥 品 臨 床安全性 評(píng) 價(jià)存在局限性的原因 2) 上市前 臨 床 試驗(yàn)療 程一般 較 短 ， 觀 察期亦 較 短 。 ? 人體的疾病因素，可能影響人體對(duì)藥物的反應(yīng)性，以致產(chǎn)生在臨床前毒性試驗(yàn)中難以觀察到的毒性現(xiàn)象。 實(shí) 施 GLP是提高 藥 品毒理 學(xué)研 究 質(zhì) 量的重要保 證 。 例 : 50年代中期，法國(guó)上市外用藥二碘二乙基錫，因動(dòng)物毒性研究不充分，缺乏初期臨床安全性評(píng)價(jià)，藥品倉(cāng)促上市應(yīng)用造成 207例中毒 ， 110人死亡 ，再次提醒人們認(rèn)識(shí)新藥研究中臨床前毒理學(xué)研究的重要性。藥物毒理研究 周玖瑤 2022,12 近半 個(gè) 世 紀(jì)國(guó) 外 發(fā) 生的重大要害事件 年代 藥 物 毒性表 現(xiàn) 受害人 數(shù) 53 非那西丁 腎損 害、溶血 2022人，死亡 500人 56 三 苯 乙醇 白 內(nèi) 障、 陽(yáng) 痿、 1000人，死亡占 % 56 反 應(yīng) 停 海豹 樣 畸胎 1萬(wàn)人，死亡 5千人 67 氨苯唑啉 肺 動(dòng) 脈高 壓 70%用 藥 者 60 異 丙 腎氣霧劑 心律失常、心衰 死亡 3500人 63 氯碘喹啉 脊髓 變 性、失明 7856人，死 5% 33 已 烯 雌 酚 下代 陰 道腺癌 300人 68 心得寧 角膜、心包、腹膜 損 害 2257人 藥 物不良反 應(yīng) 的 發(fā) 展史 國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心 發(fā)布藥品不良反應(yīng)信息通報(bào) ? 乙雙嗎啉 — 白血病 ? 壯骨關(guān)節(jié)炎 — 肝損害 ? 清開(kāi)靈注射液 — 過(guò)敏反應(yīng) ? 雙黃連注射液 — 過(guò)敏反應(yīng) ? 苯甲醇 — 兒童臂攣縮癥 藥 名 類 別 上市年代 撤出時(shí)間 芬氟拉明（ fenfluramine） 減肥藥 1993 右芬氟拉明（ dexfenfluramine） 減肥藥 特非那定（ ferfenadine） 抗組胺藥 1985 米貝拉地爾 （ mibefradil） 鈣拮抗藥 西沙必利 （ cisapride） 胃動(dòng)力藥 近期從美國(guó)市場(chǎng)上撤出的處方藥（ 1） 藥 名 類 別 上市年代 撤出時(shí)間 曲格列酮（ troglitazone） 胰島素增敏藥 阿洛司瓊 （ alosetron） 5HT拮抗藥 格帕沙星 （ grepafexa） 抗菌藥 溴芬酸鈉 （ bromfenac sodium） 鎮(zhèn)痛藥 西立伐他停（ cerivastatin） 降脂藥 近期從美國(guó)市場(chǎng)上撤出的處方藥（ 2） 中 藥 需 進(jìn) 行系 統(tǒng) 毒理 學(xué)研 究 ? 長(zhǎng)期用藥安全性了解較少 ? 長(zhǎng)期用藥之安全性了解較少 ?“ 無(wú)毒 ” 中藥長(zhǎng)期給藥可致器質(zhì)性損害 ? 新生兒溶血癥 /禁用黃連事件；小 柴胡湯 /間質(zhì)性肺炎 ?“替代”用中藥 ? 木通 /關(guān)木通；粉防己 /廣防己；馬兜鈴酸、馬兜鈴酰胺所致急性腎衰 . ? 德國(guó)聯(lián)邦藥品和醫(yī)療用品局 96年 6月限制使用番瀉、鼠李皮、大黃、蘆薈等含蒽醌類中藥 . ? 一、二類中藥 /有效成份、部位、活性成分濃縮 /藥效、毒性增強(qiáng) . 1. 臨床前毒理學(xué)研究 藥品臨床前毒理學(xué)研究的重要性 ? 通過(guò)受試藥的毒理學(xué)試驗(yàn)，確定受試藥的劑量與毒性作用的相關(guān)性以及藥物的安全劑量范圍； 安全性研究的重要性和局限性 ? 認(rèn)識(shí)藥物毒性作用的靶器官和靶組織，以確定藥物毒性作用的選擇性； ? 觀察藥物毒性作用的發(fā)生、臨床特征及發(fā)展過(guò)程是否可逆，以判斷藥物毒性的性質(zhì)。 這些研究結(jié)果是預(yù)測(cè)藥品臨床應(yīng)用安全性的重要依據(jù)。 藥品臨床前毒理學(xué)研究的局限性 人體臨床用藥的不良反應(yīng)和藥品動(dòng)物毒性研究的相關(guān)率不及 25%。 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺乏人所具有的對(duì)藥物毒性作用的主覺(jué)反應(yīng)； ? 毒理試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量有限，發(fā)生率低的毒性反應(yīng)，難以經(jīng)小樣本實(shí)驗(yàn)得以發(fā)現(xiàn)； ? 所用動(dòng)物均系實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)品系，且多為健康動(dòng)物，對(duì)藥物的反應(yīng)性多較單一。 ? 人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在藥物代謝動(dòng)力學(xué)方面的差異，亦會(huì)造成人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)藥物毒性反應(yīng)的差異。 一些需 經(jīng)較長(zhǎng)時(shí)間應(yīng) 用才能 發(fā) 生的反 應(yīng) ， 或停 藥 后的 滯 后不良反 應(yīng) ， 難 以在 臨 床 試驗(yàn) 期 間 被 觀 察到； 1) 上市前 藥 品 臨 床 試驗(yàn) 病例 數(shù) 相 對(duì)較 少 ， 一些低 頻 度不良反 應(yīng) ， 很 難 在此期 間 被 發(fā)現(xiàn) ； 3) II期和 III期 臨 床 試驗(yàn) ，受入 選條 件的限制（入 選 病例年 齡 、合 并 癥均有限制） ，不可能 觀察到受 試藥 品 對(duì) 特殊人群的毒性作用； 4) 對(duì) 照性 臨 床 試驗(yàn) 的 觀測(cè) 指 標(biāo) 只限于 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)規(guī) 定的 內(nèi) 容， 觀 察 臨 床反 應(yīng) ，可能被疏漏， 導(dǎo) 致 臨 床 評(píng) 價(jià)的片面性。 ? 急性毒性目的 :為新藥的研發(fā)提供參考信息。 （二）試驗(yàn)設(shè)計(jì) ? 試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的基本原則。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。 ? 溶媒或賦形劑：選擇合適的溶媒或賦形劑。如臨床為單性別用藥，則可采用相對(duì)應(yīng)的單一性別的動(dòng)物。嚙齒類動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn) Ⅱ 級(jí)及其以上等級(jí)要求，非嚙齒類動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn) Ⅰ 級(jí)及其以上等級(jí)要求。如果受試物擬用于兒童，建議考慮采用幼年動(dòng)物。 （四）給